胃癌及癌旁组织定量比较蛋白质组学研究

为寻找胃癌特异的肿瘤标记物,用于胃癌临床诊断及药物治疗靶点的选择,本研究采用荧光差异显示凝胶电泳（DIGE）技术分离并筛选 Cy3、Cy5 及 Cy2 荧光素标记的胃癌及对应癌旁组织差异表达蛋白质,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）或串联质谱技术进行鉴定并分析。结果共筛选出 33 个差异表达蛋白质点,其中 9 个蛋白质点在胃癌组织中上调,24 个蛋白质点下调。对 22 个蛋白质点采用质谱技术成功鉴定,突变结蛋白、锰超氧化物歧化酶、热休克蛋白 60等在胃癌中高表达,热休克蛋白 27、前列腺素 F 合酶、硒结合蛋白 1、锌指蛋白 160、微管蛋白 α6、真核生物翻译延伸因子 1 α1 等在胃癌组织中低表达,并筛选出 5 个未知蛋白。这些差异表达蛋白可望成为胃癌诊断的特异标记物,并与胃癌的发生、发展及预后等有关,为胃癌的诊断、发生机制的研究提供了新的思路。     

胃癌及癌旁组织中无芽孢厌氧菌相关性的研究

在实验研究过程中发现 ,不同的消化道疾病患者 ,胃黏膜微生物群的检出率、菌种、数量均有不同 ,其中胃癌组微生物群改变最明显。为了解微生物与胃癌的相关性 ,对 5 7例胃癌患者的癌组织和癌旁组织进行了无芽孢厌氧菌的检测 ,实验结果表明 ,胃癌病变的中心部位与癌旁组织的无芽孢厌氧菌的检出情况不同。胃癌组织检出的主要为革兰氏阳性无芽孢厌氧菌 (优杆菌、丙酸杆菌、消化链球菌等 ) ,占检出菌株的 6 4 .86 %(48/74 ) ,其中硝酸盐还原实验阳性菌株为 5 9.4 6 % (44 /74 )。癌旁组织检出的主要为革兰氏阴性无芽孢厌氧菌 (类杆菌、梭杆菌、紫单胞菌、韦荣球菌 ) ,占检出细菌的 5 7.14 % (2 4 /42 ) ,硝酸盐还原实验阳性菌株为16 .6 7% (7/42 )。胃癌的病因受多种因素的影响 ,在胃癌组织中检测到无芽孢厌氧菌对胃癌的形成起到的作用 ,有待进一步研究。     

凋亡基因fas在胃癌及癌旁组织中的不同表达及意义

应用免疫组织化学ＳＡＢＣ方法,对６３ 例胃癌及癌旁组织中的ｆａｓ基因的不同表达情况进行了研究。结果显示：凋亡基因ｆａｓ在胃癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织（ｘ２＝ １５７９,Ｐ＜ ００５）,在不同分级的胃癌之间其阳性率无显著差异,而癌旁组织之间的ｆａｓ表达则有显著差异（Ｐ＜ ００１）,结果提示：低分化胃癌癌旁组织具有活跃的凋亡活动,有利于癌组织直接播散。     

胃癌及癌旁组织癌胚抗原分布的免疫电镜观察

应用免疫电镜技术对１４例胃癌手术切除标本进行胃癌及癌旁组织中癌胚抗原（ＣＥＡ）超微结构水平分布的定位观察。结果表明,癌旁正常胃粘膜上皮细胞ＣＥＡ含量很少,仅在表面微绒毛见到微弱的ＣＥＡ分布;肠化上皮细胞ＣＥＡ主要分布在吸收细胞的微绒毛及杯状细胞粘液颗粒之间;而胃癌细胞ＣＥＡ除分布腔面微绒毛外,尚分布细胞侧面,基底面或整个胞膜,还见于胞浆内膜结构中。ＣＥＡ在胃癌细胞与正常胃粘膜上皮及肠化上皮分布上的差异说明表面膜成份极性的丧失是上皮性肿瘤细胞的特征之一。ＣＥＡ在胃癌细胞的分布异常可能导致恶性细胞某些生物学行为的变化。     

LMP-1在胃癌和相应癌旁组织中的表达

目的探讨Epstein-Barr virus(EBV)感染与胃癌发生发展的关系。方法应用免疫组化SP法检测EB病毒潜伏感染膜蛋白-1(LMP-1)在97例胃癌组织及89例相应癌旁组织中表达。结果97例胃癌组织中30例LMP-1蛋白表达阳性,阳性率为30.9%,EBV阳性率与患者性别、浸润深度、淋巴结转移、组织学分型和临床分期之间无明显关系(P>0.05);89例相应癌旁组织中33例检测到EBV LMP-1的表达,胃癌组织及相应癌旁组织EBV阳性表达之间有显著相关性(P=0.000)。结论EBV感染与胃癌的发生有一定的相关性。     

胃癌与癌旁组织miRNA差异表达谱的研究

目的研究胃癌中表达失调的miRNA及其生物学功能,从而进一步阐明miRNA在胃癌发生中的分子机制。方法将总RNA加ploy（A）尾后进行反转录PCR扩增特异miRNA,使用QuantityOne软件进行定量分析,计算每对样本胃癌与癌旁组织比值（T／NRatio）,使用SAM软件进行统计分析。MTT法检测miR-21和miR-17-5p对胃癌细胞系生长的影响。结果在8对胃癌及癌旁组织样本中对237个miRNA进行了表达谱分析。对于检测到表达的161个miRNA,使用SAM软件进行统计分析,确认22个在胃癌中表达上调,2个在胃癌中表达下调（FDR=0．0963）。进一步通过生长抑制试验证实在胃癌组织中表达异常增高的miR-21和miR-17-5p对胃癌细胞的生长有明显的促进作用。结论这些在胃癌中异常表达的miRNAs具有成为新一代胃癌标记物的潜力,能够为胃癌的精确诊断分型提供依据,同时针对这些靶点可以开发新的核酸治疗技术,通过抑制或增强其功能来达到治疗胃癌的目的。     

乳腺癌癌旁组织特异性表达基因分析

癌症研究中常用癌旁组织(normal tissues adjacent to the tumour, NAT)作对照,而癌旁组织与无肿瘤的正常组织的基因表达谱是有差异的。癌旁组织特异性表达基因的存在通常会干扰传统的转录图谱研究,然而目前关于癌旁与无肿瘤组织的基因表达谱差异的研究相对较少。本研究对14例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织和对侧正常乳腺组织样本进行高深度RNA测序和分析,发现癌旁组织相比对侧正常乳腺组织有102个差异表达基因。基因富集和蛋白-蛋白互作分析揭示这些差异表达基因显著富集在肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TNF)和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)等癌症相关的基因集中。通过比较癌旁组织与癌组织、癌旁组织与对侧正常乳腺组织的转录图谱,发现23个癌旁组织特异性高表达的基因,即癌旁特异性激活(tumour-adjacent specific activation, TASA)基因。这些基因显著富集在TNF基因集中,其中15个是新发现的基因。结果表明,TASA基因在乳腺癌癌旁组织中普遍存在,并且与免疫系统的TNF信号有关。癌旁中存在类肿瘤型表达模式的基因,这些基因可能与肿瘤形成有关,但是往往在肿瘤-癌旁成对研究中被遗漏。     

胃癌、癌旁和正常组织中存活蛋白的表达与细胞周期变化的相关性研究

目的:探讨胃癌、癌旁和正常组织中存活蛋白的表达情况及其与细胞周期变化的相关性。方法:采用免疫组化SP法检测胃癌、癌旁和正常组织中存活蛋白的表达,同时用流式细胞仪检测3种组织中细胞周期的变化,分析存活蛋白的表达与细胞周期变化的相关性。结果:存活蛋白在正常胃黏膜组织中无表达,胃癌癌旁组织中阳性表达率为16.67%,胃癌组织中阳性表达率为46.67%;与正常胃组织比较,胃癌癌旁组织和胃癌组织G0/G1期细胞均有明显下降,S期细胞均有明显升高,胃癌组织G2/M期细胞明显高于正常组织;存活蛋白的表达与G2/M期细胞数相关(rs=0.627)。结论:存活蛋白在胃癌组织中表达明显增加,并且与胃癌组织细胞周期变化相关,可通过调节细胞周期促进细胞增殖。     

E-cd在胃癌、癌旁组织及转移淋巴结中的表达

研究E-cd在胃癌、癌旁组织及转移淋巴结中的表达。用免疫组化方法检测E-cd的表达,用图像分析仪进行定量分析。结果显示胃癌及转移淋巴结中E－cd的表达明显低于癌旁组织（P＜0.001）。分化不良胃癌中E－cd的表达明显低于分化良好胃癌中的表达（P＜0.05）。结果表明E-cd可作为判断胃癌预后的指标。     

Rb基因在人胃癌中异常的初步观察

Rb基因是一种抗癌基因,其产物Rb蛋白与细胞转化、细胞周期调节及转录调控有密切关系。许多肿瘤如视网膜母细胞瘤、乳腺癌、小细胞肺癌、前列腺癌、膀胱癌、骨肉瘤、软组织肉瘤等,都与Rb基因的失活或缺失有关。胃癌是消化道常见多发肿瘤,研究表明,其发生发展与多种癌基因的活化、抗癌基因的异常有关。我们用Southern印迹杂交法,以Rb基因为探针,检测了九例胃癌患者的癌组织和一个胃癌细胞株,发现它们与正常人血相比Rb基因全部呈现异常。其中5例发生Rb基因部分缺失,3例及人胃腺癌细胞株BGC-823全部缺失。这表明在胃癌发生过程中Rb基因的丢失是一个重要环节。我们相信用更灵敏的多聚酶链式反应(PCR)技术检测胃脱落细胞,对患癌危险性的早期预报会有很大帮助。同对,本实验也对肿瘤的基因治疗研究提供了靶细胞。     

胃溃疡、胃癌组织中幽门螺杆菌及真菌基因片段的扩增分析

探讨胃溃疡、胃癌组织中幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)、真菌(Fungi)单纯感染及混合感染的可能性并进行验证。应用聚合酶链反应(PCR)技术,分别自4例胃溃疡和4例胃癌并伴单纯幽门螺杆菌、真菌及其混合感染病例石蜡包埋组织(FFPE)中扩增Hp及fungi基因特异片段并进行测序分析。成功提取了FF-PE胃组织基因组DNA,并扩增出Hp 16S rRNA及真菌内转录间隔区18S rDNA基因和28S rDNA之间的基因特异条带,测序大小分别为114 bp和357 bp,经在线BLAST比对分析表明所扩增基因与Hp及真菌核苷酸具有高度同源性。胃溃疡、胃癌组织中存在Hp和真菌单纯感染及混合感染。推测Hp与真菌混合感染可能是加重胃溃疡发展和诱发胃癌发生的又一致病因素。积极治疗Hp与真菌混合感染有助于提高胃溃疡的治愈率和减少胃癌的发生。     

Adenoviral Delivery of the EMX2 Gene Suppresses Growth in Human Gastric Cancer

Background

EMX2 is a human orthologue of the Drosophila empty spiracles homeobox gene that has been implicated in embryogenesis. Recent studies suggest possible involvement of EMX2 in human cancers; however, the role of EMX2 in carcinogenesis needs further exploration.

Results

In this study, we reported that down-regulation of EMX2 expression was significantly correlated with EMX2 promoter hypermethylation in gastric cancer. Restoring EMX2 expression using an adenovirus delivery system in gastric cancer cell lines lacking endogenous EMX2 expression led to inhibition of cell proliferation and Wnt signaling pathway both in vitro and in a gastric cancer xenograft model in vivo. In addition, we observed that animals treated with the adenoviral EMX2 expression vector had significantly better survival than those treated with empty adenoviral vector.

Conclusion

Our study suggests that EMX2 is a putative tumor suppressor in human gastric cancer. The adenoviral-EMX2 may have potential as a novel gene therapy for the treatment of patients with gastric cancer.     

胃癌的基因治疗进展

基因治疗是近年来治疗肿瘤的新方法,因治疗策略的不同而发展为2个分支:一是分子肿瘤治疗,包括肿瘤抑制基因治疗、自杀基因治疗、反义基因治疗、抑制肿瘤血管形成的治疗、免疫基因治疗;二是virotherapy。简要综述了肿瘤基因治疗的各种方法及其在胃癌治疗中的应用和发展前景。     

nm23-H1基因缺失人肺癌细胞株的筛选与鉴定

nm23一Hj基因与肺癌的侵袭与转移密切相关,但是其作用的分子机制尚不清楚,为研究nm23—141基因的功能,筛选并鉴定了nm23一H,基因缺失人肺癌细胞株及其生物学特性．应用SoutheITIblot．RT—PCR和West—elTl blot检测9株人肺癌细胞株中nm23—14,基因的存在状态及其生物学行为．结果发现发现人大肺癌细胞株L9981中存在nm23—141等位基因的杂合性缺失,与其同源的NL9980及其它7株肺癌细胞株中nm23—111基因均以杂合子的形式存在;并且L998l细胞株的增殖能力、克隆形成能力、体外侵袭力．裸鼠体内成瘤性及移植瘤肺转移的能力均显著高于NL9980．研究结果显示nm23一H,基因的缺失可能与L998l细胞株恶性表型和高转移潜能密切相关．     

人类抑癌基因beclin 1在胃癌和直结肠癌中表达下调的研究

人类抑癌基因beclin 1通过自噬作用调节细胞生长,但在胃癌和直结肠癌中其表达水平和调控机制仍不清楚．通过检测胃癌和直结肠肿瘤组织中beclin 1基因的表达水平,及DNA异常甲基化和杂合子缺失对其表达的影响,发现与癌旁组织相比,35％的胃癌标本和30％的直结肠癌标本中beclin 1基因表达显著下调．同时发现,beclin 1基因5’端存在一高密度CpG岛,在胃癌和直结肠癌中beclin 1的启动子区域和第二个内含子区域存在甲基化,而杂合子缺失仅在胃癌中发生．这些发现表明beclin 1基因的异常甲基化和杂合子缺失对其在胃癌和直结肠癌中的表达起调控作用．     

Conservation, Rearrangement, and Deletion of Gene Pairs During the Evolution of Four Grass Genomes

Gene order and content differ among homologous regions of closely related genomes. Similarities in the expression profiles of physically adjacent genes suggest that the proper functioning of these genes depends on maintaining a specific position relative to each other. To better understand the results of the interaction of these two genomic forces, convergent, divergent, and tandem gene pairs in rice and sorghum, as well as their homologs in rice, sorghum, maize, and Brachypodium were analyzed. The status of each pair in all four species: whether it was conserved, inverted, rearranged, or missing homologs was determined. We observed that divergent gene pairs had lower rates of conservation than convergent or tandem pairs, but higher rates of rearranged pairs and missing homologs in maize than in any other species. We also discovered species-specific gene pairs in rice and sorghum. In rice, gene pairs with strongly correlated expression levels were conserved significantly more often than those with little or no correlation. We assigned three types of gene pair to one of 14 possible evolutionary history categories to uncover their evolutionary dynamics during the evolution of grass genomes.     

胃癌发生过程分子作用机制的研究进展

胃癌是常见的恶性肿瘤之一,综述了近一年来在胃癌相关基因的分子遗传学和分子病理学研究方面取得的进展,它们包括抑癌基因(PTEN、p16、p27Kip1、p21、p5 3、TGF-βII、Smad4、Caspases-3、Fas、maspin、KAI 1、RECK、E-Cad、MHC)和癌基因(ras、VEGF、Survivin、hTRT、Bcl-2、c-myc、Ki-67、CDK4、MMPs),通过介绍这些生物大分子在胃癌组织中上调或下调机制,以期为胃癌的检测和治疗提供科学依据。     

胃癌血管靶向肽GX1修饰的人血清白蛋白用于胃癌近红外活体成像

目的:以肿瘤血管靶向肽GX1修饰的人血清白蛋白(HSA)作为吲哚菁绿(ICG)的载体,合成近红外荧光探针GX1-HSA-ICG,研究其作为近红外荧光探针在荷人胃癌裸鼠活体中的靶向成像能力。方法:以HSA作为ICG的载体,通过化学修饰与GX1共价连接,合成GX1-HSA-ICG纳米颗粒探针;使用SDS-PAGE对探针合成进行鉴定;采用探针与脐静脉内皮细胞HUVEC以及与肿瘤细胞共培养的脐静脉内皮细胞Co-HUVEC进行结合和竞争抑制试验,验证探针和Co-HUVEC细胞结合的特异性;利用小动物活体成像系统对皮下荷胃癌小鼠进行近红外荧光活体成像,验证探针在体内的胃癌靶向性。结果:成功合成GX1-HSA-ICG。细胞结合与竞争抑制实验显示GX1-HSA-ICG可与Co-HUVEC细胞特异性结合;荷瘤小鼠活体成像也显示出GX1-HSA-ICG较ICG有更长体内的循环时间,并且胃癌组织局部较HSA-ICG有更强的聚集。结论:本研究成功合成了胃癌血管靶向肽GX1修饰的HSA为荧光染料载体的胃癌血管靶向探针,成功对荷胃癌裸鼠进行了活体成像。使用HSA为载体的探针较单纯使用ICG的肿瘤局部滞留能力显著提高,GX1增加了探针的胃癌靶向特异性。该探针在胃癌的早期诊断和抗肿瘤血管生成治疗评估中具有潜在的应用价值。