基于部分18S rDNA, 28S rDNA和COI基因序列的索科线虫亲缘关系

通过PCR扩增获得我国常见昆虫病原索科线虫6属10种18S rDNA、28S rDNA(D3区)和COI基因序列,结合来自GenBank中6属10种索科线虫的18S rDNA同源序列,用邻接法和最大简约法构建系统进化树。结果显示:12属索科线虫分为三大类群,第一大类群是三种罗索属线虫(Romanomermis)先聚在一起,再与两索属(Amphimermis)和蛛索属(Aranimermis)线虫聚为一支;在第二大类群中,六索属(Hexamermis)、卵索属线虫(Ovomermis)和多索属(Agamermis)亲缘关系最近,先聚在一起,再与八腱索属(Octomyomermis)和Thaumamermis线虫聚为一支。第三大类群由索属(Mermis)和异索属(Allomermis)线虫以显著水平的置信度先聚在一起,再与蠓索属(Heleidomermis)和施特克尔霍夫索属(Strelkovimermis)线虫聚为一支。从遗传距离看,基于3个基因的数据集均显示索科线虫属内种间差异明显小于属间差异,武昌罗索线虫(R.wuchangensis)和食蚊罗索线虫(R.culicivorax)同属蚊幼寄生罗索属线虫,其种间的遗传距离最小。     

五种索科线虫RAPD亲缘关系分析

采用RAPD技术构建了索科线虫4属5种的指纹图谱。从47个引物中筛选出12个稳定性好、多态性高的引物,共扩增出161条谱带,其中150条谱带具遗传多态性,占93·17%。所获片段长度大小为200~3200bp,单个引物扩增的条带数在11~16之间,平均为13·42条。采用RAPDistance软件及MEGA程序,计算Nei氏相似系数和遗传距离,建立UPGMA和NJ聚类图,两个聚类图拓扑结构相同,将5种索科线虫分为两大分支:同属于蚊幼寄生罗索属线虫的食蚊罗索线虫(Romanomermisculicivorax)与武昌罗索线虫(R.wuchangensis)亲缘关系最近,先聚在一起,再与同翅目(Homoptera)寄生长沙多索线虫(Agamermischang-shaensis)聚为一支;鳞翅目(Lepidoptera)寄生中华卵索线虫(Ovomermissinensis)和同翅目寄生两索属线虫(Amphimermissp·)亲缘关系较近,两者聚为一支。5种索线虫属内种间的遗传距离较小,食蚊罗索线虫与武昌罗索线虫之间遗传距离仅为0·1789;而属间遗传距离较大,在0·4471~0·5488之间。上述结果表明:RAPD技术可以应用于索科线虫亲缘关系的分析,能够反映出不同线虫间的遗传差距,从而成功地进行属、种的分类及进化问题研究。     

国外斯氏线虫科和异小杆线虫科昆虫病原线虫应用研究进展

<正> 昆虫病原线虫种类很多,分布于27个科,但已用作害虫生物防治的主要有索科(Mermithidae)、斯氏线虫科(Steinernematidae)和异小杆线虫科(Heterorhabditidae)。前者主要用于防治医学卫生害虫中的蚊蚋类,以食蚊罗索     

应用豫南罗索线虫防制稻田内三带喙库蚊的效果观察

自1986年以来,作者曾在四川的成都、峨眉和云南的昆明等地多次进行了豫南罗索线虫(Romanomermis yunanensis)寄生前期幼虫现场释放试验,结果表明豫南罗索线虫对自然孳生地内的三带喙库蚊、纹腿库蚊和白纹伊蚊等有较好的防制作用。为了解豫南罗索线虫在我国不同地区的应用效果,1991年7月,又选择黄河以北的河南省武陟县进行现场试验,现将     

应用两种罗索线虫防制按蚊和库蚊幼虫的现场试验

在峨眉市郊稻田、水坑和沼泽同时释放罗索线虫未定种(2000/m~2)和豫南罗索线虫(3000/m~2)。结果中华按蚊幼虫和三带喙库蚊幼虫的感染率分别为68.6%—87.0%和64.7%—76.9%。单独释放一种线虫的对照组结果表明,同时应用两种索线虫没有减弱二者各自的灭蚊效果,起到了联合杀灭上述两蚊种的作用。     

应用豫南罗索线虫防制峨眉稻田内三带喙库蚊的研究

应用豫南罗索线虫防制峨眉稻田内三带喙库蚊的研究薛群力,宋锦章,彭玉芳,唐登明,王绪勇成都军区军事医学研究所成都６１００６１华西医科大学寄生虫学教研室豫南罗索线虫（Ｒｏｍａｎｏｍｅｒｍｉｓｙｕｎａｎｅｎｓｉｓ）已被证实对多种库蚊、伊蚊、脉毛蚊和少数按蚊...     

武昌罗索线虫生物学特性的初步研究

为了更好地利用索线虫防治蚊虫,1986年以来我们对武昌罗索线虫(Romanomermiswuchangensis)的生物学特性进行了初步研究,现报告如下:材料和方法一、线虫来自武汉地区致倦库蚊(Culexpipiensquinquefascisatus)和三带喙库蚊(C.tritaeniorhynchus)幼虫体内脱出。供感染实验用的库蚊和伊蚊幼虫系室内人工饲养所得,中华按蚊(Anophelessinensis)幼虫由湖北省寄生虫病研究所提供。二、寄生率、感染强度、雌雄性比的观察:定期将野外采回的蚊幼虫随机取样,分别饲养于盛有去氯自来水的指管中,每管1只,以酵母粉作为蚊幼虫的饵料。三,人工感染:将室内饲…     

豫南罗索线虫现场应用试验

随着化学杀虫剂造成的耐药性的增加和环境污染日趋严重,昆虫的生物防制更加受到人们的重视。寄生于蚊体内的索科线虫(Mermithidae),当其发育成熟并从蚊体内脱出时导致宿主死亡。近年来,利用蚊体寄生线虫防制蚊虫的研究,在国内外均取得了新的进展。豫南罗索线虫(Romanomermis yunanensis Song&Peng1987)于1984年发现于河南信阳地区。19种蚊虫的人工感染实验;证实它对3种库蚊、4种伊蚊及1种脉毛蚊均很敏感,对斯氏按蚊亦较敏感。为了进一步了解此种线虫对蚊虫防制的应用效果及前景,此线虫经本室培育、繁殖和模拟试验后,于1986年在成都市郊进…     

索线虫寄生前期幼虫的分类研究

本文对六索属、罗索属和两索属3属6种索线虫的寄生前期幼虫进行了观察比较,对索线虫寄生前期幼虫作为索科线虫属、种鉴别的可能性、分类鉴别方法和主要鉴别特征值等问题作了初步研究。     

江油地区四川罗索线虫调查

本文报道1983年6月至1985年10月对四川江油地区蚊体寄生的四川罗索线虫(Romano mermis sichuanensis)的调查结果。四川罗索线虫的自然宿主为中华按蚊等幼虫。它的主要孳生地为稻田,尤以双季田内中华按蚊幼虫的感染率为最高,5～10月份,其平均感染率为6.74%,冬水田为2.14%,流水沟为1.38%,堰塘中偶见(仅占0.15%)。各孳生场所内中华按蚊幼虫的感染幅度为0.15～26.78%。四川罗索线虫在不同月份中对中华按蚊的感染情况来看,自5月至10月份中均有感染,但在不同类型孳生地内出现的感染季节高峰也各有不同,如在双季田内中华按蚊幼虫的感染率以8月份为…     

THE GEOLOGICAL SIGNIFICANCE OF SINACANTHUS FROM TARIM, CHINA

TheSinacanthusfossiIlocalitieswererestrictedtotheYangtzeregionbeforethediscoveryoftheTarimfossils.TheyusedtobereferredtoasDevonianorEarlyDevonianinage,butlaterdiscoverieshavedemostratedthattheageofSinacanthus-bearingbedsshou1dbeSilurian(Li,198O).In1988,fiveSinacanthusfossill,edswerefoundintheTataertagPormationofKalping,NWTarimandtheageoftheTataertagFormationwasconsideredMiddle-LateSilurian(Table2).Inthesummerofl992,WangJunqing,ZhuMinandtheauthorofthispaperfoundalotoffossilfinspinesi…     

武昌六前鞭虫胞器超微结构的研究

对武昌六前鞭虫胞器的超微结构进行了观察,发现R鞭毛复合体的内下方有分散的微管,两根R鞭毛复合体之间和外方具少量的粗面内质网,而虫体周边分布较多.粗面内质同外周被发达的微管.生毛体与胞核之间有胞咽和小盾结构.胞质中有较多的食物泡,未见到线粒体、高尔基体和表膜下微管结构.另外对粗面内质网的结构、功能以及种的鉴定等方面也作了讨论.       

中国獾蛛属的再研究（蜘蛛目：狼蛛科）

通过对７种中国獾蛛的再研究,笔者将奇异獾蛛Ｔｒｏｃｈｏｓａｒｕｒｉｃｏｌａ（ＤｅＧｅｅｒ,１７７８）与类奇异獾蛛Ｔ．ｒｕｒｉｃｏｌｏｉｄｅｓＳｃｈｅｎｋｅｌ１９６３和武昌獾蛛Ｔ．ｗｕｃｈａｎｇｅｎｓｉｓ（Ｓｃｈｅｋｅｌ,１９６３）进行了外生殖器结构的比较,明确了后两种并奇异獾蛛的同物异名,并分别作了该两种的单性补充描述,本文还记述了１个中国新记录种,水獾蛛Ｔ．ａｑｕａｔｉｃａＴａｎａｋａ,１９８５     

Stability,toxicity and biological activity of retro,inversed and retro‐inversed glucagon isomers

Peptide modifications that improve pharmacological properties are of considerable therapeutic importance. Here we consider the retro (R), inversed (D) and retro‐inversed (RI) isomers of glucagon with respect to structure, stability, toxicity and biological activity. Biologically, RI‐glucagon demonstrated comparable in vivo activity as L‐glucagon with respect to magnitude and duration of blood sugar elevation following i.p. administration to mice. Structurally, the isomers were investigated through circular dichroism (CD) and nanopore analysis. CD demonstrated a conserved potential for formation of secondary structure, which was independent of the direction of the peptide (L vs R; D vs RI) as well as formation of symmetry‐related structures for the chiral isomers (L vs D; R vs RI). CD, therefore, discriminated chiral but not directional isomers. Nanopore analysis, which depends on interaction of the peptides with chiral pores, discriminated all four isomers on the basis of unique signatures of bumping and translocation. Nanopore analysis offered greater opportunity than CD to discriminate the isomers although neither technique provided a definitive biomarker of biological activity. Functionally, the R and RI isomers resist proteolytic degradation and none of the isomers possess hemolytic activity or cellular toxicity. Collectively, this investigation highlights the potentials and limitations of CD and nanopore analysis for investigation of peptide isomers as well as offering insight into the structural criteria to mimic peptide biological activity. For this example, retro‐inversion, through undefined contributions of increased stability and maintained biological activity, was best suited to mimic the biological activity of the parent peptide. Copyright © 2012 European Peptide Society and John Wiley & Sons, Ltd.     

人可溶性白介素4受体(sIL4R)在大肠杆菌中的表达和纯化

白细胞介素 4 (IL 4 )作为一种多功能的细胞因子在哮喘等变态性炎症反应中具有关键作用 .IL 4通过结合细胞表面的白介素 4受体 (IL 4R)发挥其生物学效应 .sIL 4R缺少跨膜和胞内结构域 ,结合IL 4后不能产生信号传递介导IL 4的生物学活性 ,但sIL 4R与IL 4结合的高度特异性和极高的亲和力使它非常适合作为理想的IL 4拮抗剂 ,应用于哮喘等疾病治疗 .采用RT PCR方法 ,以人单核细胞总RNA为模板扩增得到编码sIL 4R的基因片段 ,经测序确证后插入大肠杆菌高效表达质粒pBV2 2 0 ,得到重组质粒pBV2 2 0 sIL 4R ,重组质粒转化E .coliDH5α .重组菌经温度诱导后超声破碎得到包涵体 ,经SuperdexHR75分子筛柱和DEAE SepharoseFastFlow离子交换柱进行纯化 ,HPLC检测表明纯度达到 90 % .N端测序证明 ,重组sIL 4R与天然sIL 4RN端序列完全一致 .Western印迹、配基结合印迹对重组sIL 4R进行鉴定 .结果表明 ,重组sIL 4R具有结合IL 4的生物学活性     

鼠Ⅰ型可溶性白细胞介素1受体基因在昆虫细胞的克隆和表达

白细胞介素１（ＩＬ－１）是一种重要的细胞因子,具有广泛的生物学活性。它通过与细胞表面的白细胞介素 １受体（ＩＬ－１Ｒ）结合而起作用。以杆状病毒为载体在昆虫细胞中克隆表达了小鼠Ｉ型可溶性白细胞介素１受体（ｓＩＬ－１　ＲＩ）基因。以ＮＩＨ／３Ｔ３细胞ＲＮＡ为模板,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到小鼠ｓＩＬ－ＩＲＩ的ｃＤＮＡ,克隆至杆状病毒转移载体ｐＡｃＧＰ６７Ｂ,将转移重组质粒与野生病毒ＡＣＮＰＶ ＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ９,经同源重组得到重组杆状病毒ｒＡＣＮＰＶ。应用经纯化的ｒＡｃＮＰＶ感染昆虫细胞Ｓｆ９,表达获得重组的ｓＩＬ－１ＲＩ。经对亲和层析样品的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析和对ＩＬ－１β生物活性阻断作用实验证实,表达产物能够与其配基结合,并且能够分泌至细胞培养上清中。     

鲤鱼管内皮细胞的分离培养及初步鉴定

鲤动脉球内灌注0.1％胶原酶消化,分离到大量内皮细胞及少量成纤细胞,28℃,在加入蛋白含量为：350μg/mL鲤下丘脑粗提液的1640＋20％小牛血汪培养液中,细胞生长良好,7d后,接近单层。原代经三次0.5％柠檬酸胰酶消化逐步淘汰少量成纤维细胞,10d后,得纯内皮细胞,并顺利传至二代,第二代细胞经血凝ⅧR因子酶标检测发现,培养细胞存在血凝ⅧR因子相同抗原,具有内皮细胞的一般特征,从而得到初步鉴定。     

Nucleocytoplasmic shuttling of antigen in mammalian cells conferred by a soluble versus insoluble single-chain antibody fragment equipped with import/export signals

The ectopic expression of antibody fragments within mammalian cells is a challenging approach for interfering with or even blocking the biological function of the intracellular target. For this purpose, single-chain Fv (scFv) fragments are generally preferred. Here, by transfecting several mammalian cell lines, we compared the intracellular behavior of two scFvs (13R4 and 1F4) that strongly differ in their requirement of disulphide bonding for the formation of active molecules in bacteria. The scFv 13R4, which is correctly folded in the bacterial cytoplasm, was solubly expressed in all cell lines tested and was distributed in their cytoplasm and nucleus, as well. In addition, by appending to the 13R4 molecules the SV40 T-antigen nuclear localisation signal (NLS) tag, cytoplasmic-coexpressed antigen was efficiently retargeted to the nucleus. Compared to the scFv 13R4, the scFv 1F4, which needs to be secreted in bacteria for activity, accumulated, even with the NLS tag, as insoluble aggregates within the cytoplasm of the transfected cells, thereby severely disturbing fundamental functions of cell physiology. Furthermore, by replacing the NLS tag with a leucine-rich nuclear export signal (NES), the scFv 13R4 was exclusively located in the cytoplasm, whereas the similarly modified scFv 1F4 still promoted cell death. Coexpression of NES-tagged 13R4 fragments with nuclear antigen promoted its efficient retargeting to the cytoplasm. This dominant effect of the NES tag was also observed after exchange of the nuclear signals between the scFv 13R4 and its antigen. Taken together, the results indicate that scFvs that are active in the cytoplasm of bacteria may behave similarly in mammalian cells and that the requirement of their conserved disulphide bridges for activity is a limiting factor for mediating the nuclear import/export of target in a mammalian cell context. The described shuttling effect of antigen conferred by a soluble scFv may represent the basis of a reliable in vivo assay of effective protein- protein interactions.