芳香烃龙胆酸降解途径蛋白质组学的研究

芳香烃是一类重要的环境污染物,微生物降解是其主要的处理方法。研究显示降解过程中产生保守型和诱导型的各一组同工酶。目前,仅有保守型的龙胆酸加双氧酶（GDOI）及其下游片段被克隆。产碱假单胞菌NCIB9867（P25X）的突变株-SNZ28 GDOI被打断,在龙胆酸诱导的情况下,该突变株仍能检测到龙胆酸加双氧酶活性。采用二维蛋白电泳分析突变株SNZ28在有和没有龙胆酸诱导条件下的蛋白质表达差异。电泳结果显示了两者存在有15个蛋白点的差异。通过MALDI-TOF和Q—TOF分析,其中的12个蛋白质点与数据库中已知多肽片段有同源性。其中,P4点与青枯菌（Ralstonia species）龙胆酸1,2加双氧酶同源。该结果在蛋白质组学上证实了GDOII的存在。     

芳香烃分解代谢的龙胆酸途径*

龙胆酸代谢途径是微生物降解芳香烃的3条典型的代谢途径之一,是一条重要但需要深入研究的代谢途经。综述了龙胆酸代谢途径的研究进展,特别是分子生物学方面的成果。     

溴氨酸降解菌株的分离和特性*

从化工厂污泥中分离到 4个对蒽醌染料中间体溴氨酸有显著降解和脱色作用的菌株。经鉴定 ,4株菌均为假单胞菌属 (Pseudomonassp )。脱色效果最好的N1菌株能以溴氨酸为唯一碳源生长 ,其脱色效果受温度和 pH影响较大 ,最佳生长条件是 30℃ ,pH7 2。     

细菌产木聚糖酶发酵条件的研究*

研究了碳源、氮源以及其他因子对木聚糖酶高产菌ＷＬＵＮ０２４（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）产酶的影响,结果表明在麸皮６ｇ／Ｌ、（ＮＨ４）２ＳＯ４ ０．８ｇ／Ｌ、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．４ｇ／Ｌ、接种量５％－１０％的条件下,３７℃培养３６ｈ,其木聚糖酶活力可达６００ＩＵ／ｍＬ。同时研究了在较优条件下该菌的摇瓶产酶曲线。     

假单胞菌株K9510产肌酐酰氨基水解酶的条件*

肌酐酰氨基水解酶是酶法分析血清肌酐浓度的关键酶。本实验室从空气中分离到能分解肌酐 的菌株 Ｋ９５１０、Ｋ９５１１和 Ｋ９５１２,其中Ｋ９５１０菌株初步分类鉴定为假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ.）。菌株 产酶条件优化研究结果表明：菌株在底物或底物类似物的诱导下产酶;混合金属离子溶液对菌株产 酶有促进作用。菌株产肌酐酰氨基水解酶最适培养基组成为：肌酐９ｇ、酵母提取物１．５ｇ、麦芽汁０．９ｇ、 ＮＨ_４Ｃｌ０． ５ｇ、定容 １Ｌ。适量混合金属离子溶液,用 ０． １ｍｏｌ     

具胶原蛋白酶活性铜绿假单胞菌的筛选*

从成都皮革厂等堆积废弃毛皮、皮革的场所采集土样,通过以明胶为主要基质培养基进行富集和初筛,获得95株有明胶酶活性菌株。挑选其中28株明胶酶活性较高的菌株进行牛皮消化试验,有12株菌能在48h内完全消化小牛皮。以Ⅲ型酸溶性胶原为底物,测定了12株菌发酵培养液中胶原蛋白酶活性,确认这12株菌都具有胶原蛋白酶活性,酶活力基本相同,约10-16U／mL。经形态观察、生理生化特征分析及BIOLOG微生物鉴定仪鉴定,这12株菌分为两类,分别是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeraginosa)和火神发光杆菌(Photobacterium logei)(结果另发表)。对铜绿假单胞菌产生胶原蛋白酶粗酶性质进行了研究,其酶活最适温度为32℃,最适pH为7．5,可以被金属蛋白酶抑制剂EDTA和EGTA部分抑制,不能被PMSF抑制。对铜绿假单胞菌产胶原蛋白酶发酵条件的研究表明,不仅培养基中氮源、碳源和金属离子影响产酶量,而且发酵工艺对胶原蛋白酶的产生也有较大影响。     

假单胞菌株JKD—2分泌铁载体抑制稻瘟病菌*

利用铬奥醇（CAS）分析法测定了假单胞菌（Pseudomonassp．）JKD－2分泌铁载体的特征。在无铁环境下JKD-2菌能分泌高亲和力的铁载体;在低铁条件下,铁载体的分泌量减少;在富铁环境下,则不能分泌。结果还显示菌株JKD-2在无铁条件下分泌的铁载体,能在低铁条件下抑制稻瘟病菌（Piriculariaoryzae）的生长。     

假单胞菌属生防菌株的遗传工程改良*

拮抗细菌的利用是植物病害生物防治的重要内容,其中利用最多的为假单胞菌属菌株,特别是用于土传病害的生物防治。假单胞菌类容易在植物根际定殖,也是根际最普遍的微生物类群,许多菌株具有防病促生的能力,如引起人们广泛注意的植物根际促生苗（ＰｌａｎｔＧｒｏｗｔｈ－ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ Ｒｈｉｚｏｂａｃｔｅｒｉａ,简称ＰＧＰＲ）,其研究大多集中在该类群。假单胞菌类筛选菌株能够抑制多种植物病害特别是土传病害已成为植病生防工作者之共识,其作用机制包括：有效的根部定殖、抗生作用、根际的营养竞争（特别是对铁的竞争）、诱…     

从杂草DRB中筛选微生物除草剂的研究*

采用MPC和CVP富集培养基从马唐和狗尾草的根部分离到假单胞菌792株、欧文氏菌515株。通过对大肠杆菌的抗代谢毒性试验、对原宿主的萌发抑制试验、杀草试验以及对两种草坪草的安全性试验,筛选的S7菌株能100％抑制狗尾草的种子萌发,对供试草坪草不仅没有负影响,而且对高羊茅的种子萌发还有轻微的促生作用。尽管S7在狗尾草的芽后处理中校正防效只有56.7％,但分析认为以杂草DRB作微生物除草剂的目标菌株会更有前途。     

乳杆菌对致病假单胞菌的抑制作用研究进展*

假单胞菌污染事件在临床就医和日常饮食中频发,屡次产生致病、致死等恶劣后果,有效抑制致病假单胞菌并降低其耐药性作为解决该问题的关键手段,是目前的研究重点。相关研究表明益生菌等天然活性成分对假单胞菌产生多方面影响,以应用范围最广的益生菌——乳杆菌为例,综合国内外最新研究进展,论述了乳杆菌对假单胞菌的生物膜结构、生长活性、生物毒性、黏附细胞表面能力及被假单胞菌感染后的小鼠等产生的影响。深入挖掘乳杆菌等益生菌及其代谢产物成分的作用机制,是防治假单胞菌等微生物污染和感染的关键。     

几种重金属离子对沼泽红假单胞菌的生物效应*

研究了Hg^2 、Cu2 、Cd^2 、Cr(Ⅵ)和Pb^2 对光合细菌沼泽红假单胞菌的96h平均生长速度、细胞外渗液电导率、总蛋白质和细菌叶绿素含量的影响。结果表明,依据5种重金属离子对该菌的96h平均生长速度影响的实验结果,得出它们对该菌的毒性大小次序为Hg^2 ＞Cu2 ＞Cd2 ＞Cr(Ⅵ)＞Pb^2 。在Hg^2 、Cd^2 、Cr(Ⅵ)和Pb^2 的胁迫下,该菌细胞外渗液的电导率增加,且具剂量效应,而Cu2 并未使其细胞外渗液的电导率增加。Hg2 、Cu2 、Cd2 、Cr(Ⅵ)和Pb2 的胁迫均能导致该菌细菌叶绿素含量的降低,也存在剂量效应。但Hg2 、Cu2 、Cd2 、Cr(Ⅵ)和Pb^2 的胁迫对该菌总蛋白质含量没有显的的影响。     

双烯内酯水解酶基因的克隆和序列分析*

从土壤中分离到一株降解2,4-二氯酚能力较强的假单胞菌菌株GT241-1,从中克隆出参与降解2,4-二氯酚的双烯内酯水解酶基因(dcpD)。该基因编码的双烯内酯水解酶可将顺式-2-氯双烯内酯水解成2-氯马来乙酸。采用的基因克隆策略是用Southem杂交对其邻近基因进行定位后构建基因组库,再用斑点杂交筛选目的转化子。经序列测定得知dcpD基因编码区702bp。核苷酸和推测编码的氨基酸序列分析表明,dcpD与已在GenBank登记的相关基因有一定的差异。     

高灵敏假单胞菌铁载体的平板检测方法*

CAS蓝色检测平板是一种筛选、检测各类细菌铁载体的常用方法,而蔗糖-天冬酰氨培养基被用于假单胞菌产铁载体规律的研究。用天冬氨酸替代天冬酰氨,将CAS蓝色检测液与蔗糖-天冬氨酸培养基(MSA培养基)相结合,得到一种改进的MSA-CAS检测平板。通过对假单胞菌属7个种8个株进行荧光与非荧光铁载体检测方面的比较研究,结果表明MSA-CAS检测平板假单胞菌铁载体的检测灵敏度比通用CAS检测平板高,而且在检测荧光铁载体方面具有荧光背景低、荧光铁载体晕圈明显和晕圈与背景的对比度大的优点。     

碱性环境中的放线菌的生物学研究*

碱性环境中存在有一些嗜碱放线菌（Alkalophilic actinomycetes）,这些放线菌具有特殊的生理特征及代谢途径,可产生多种碱性酶及生物活性物质。综述了近20年来嗜碱放线菌的分类学研究,嗜碱菌的嗜碱机理,应用方面的研究进展,并展望了嗜碱放线菌的应用前景。     

一株地塞米松磷酸钠降解菌的分离鉴定

目的为用微生物修复技术清除水环境中的地塞米松污染提供菌种。方法采集被地塞米松磷酸钠污染的医院废水,通过无机盐培养基和含地塞米松磷酸钠的缺碳培养基富集和分离地塞米松降解菌。将分离菌初步驯化后,用常规高效液相色谱法测定其对地塞米松和地塞米松磷酸钠的降解率。分离菌经形态、染色性、生化试验和16S r DNA鉴定。结果获得1株能以地塞米松磷酸钠为唯一碳源和能源的菌株,经生物学特性和16S r DNA分析鉴定为产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes)。分离菌对地塞米松磷酸钠的降解率为50.86%。其中,75.23%地塞米松磷酸钠被降解为地塞米松,23.63%被进一步降解率为其他他物质。结论成功地分离到1株地塞米松降解菌,为进一步研究用微生物修复技术清除水环境中的地塞米松污染提供了实验材料。     

铜绿假单胞杆菌QS相关基因差异表达的研究*

选取100个与铜绿假单胞杆菌(Pseudomonasaeruginosa)群感效应(quorum-sens-ing,QS)相关的基因,克隆这些基因片段于pMD-18T载体,测序鉴定,点样制备cDNA基因芯片。制备cy3-dCTP/cy5-dCTP标记的探针,与芯片杂交。初步研究了处于不同生长期的铜绿假单胞杆菌基因的表达差异。指数中期和平台初期相比,有9个QS基因表达量显著增加,有6个基因表达量显著下降。利用芯片做针对铜绿菌假单胞杆菌药物的筛选妥布霉素(Tobramycin)给药后细菌基因发生     

氯代苯胺类化合物微生物降解的研究进展*

对氯代苯胺类化合物(Chlovoanilines,CAS)好氧微生物降解的研究现状进行了系统的综述,内容包括具有降解氯代苯胺类化合物能力的微生物、氯代苯胺类化合物的代谢途径及相关代谢酶的分析、降解质粒和关键代谢酶的基因克隆和表达,并提出了氯代苯胺类化合物好氧微生物降解研究中存在的问题和尚需进一步研究的方面。     

黄原胶降解菌的筛选及其降解酶性质的研究*

从野外采集并筛选到一株能降解黄原胶的菌株,并对菌种进行了对照鉴定。此外,对菌株的发酵参数、黄原胶降解酶的性质(最适反应温度、pH值,金属离子的影响、底物专一性、动力学研究等)作了初步的研究。结果显示,该酶的最适催化反应温度和pH分别为30℃～40℃和5.0～7.0;能够专一性降解黄原胶;测试大多数金属离子对酶活力没有明显影响,但Ca²⁺能很大程度地缓解EDTA对酶活的抑制作用。     

鼠李糖脂快速定量分析方法及其影响因素研究*

为探寻简单、快速的由铜绿假单胞菌生产鼠李糖脂的定量分析方法,对比分析了蒽酮-硫酸法、L-半胱氨酸-硫酸法、苯酚-硫酸法及其影响因素。结果显示,蒽酮-硫酸法优于其它两种方法,并得出了其最佳测试条件。发酵液中剩余的葡萄糖、上清液对鼠李糖脂定量分析的影响可以忽略,菌体和中层杂质对鼠李糖脂的定量分析有一定程度的影响。因而,分析时要去除菌体。而中层杂质对定量分析的影响可以通过制备含中层杂质的鼠李糖溶液标准曲线而消除。