大鼠酷氨酸羟化酶基因在肌母细胞中稳定表达

用电穿孔法将大鼠酷氨酸羟化酶（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ,ＴＨ）基因转染大鼠Ｌ６ＴＧ成肌细胞株,经ＰＣＲ检测、免疫组织化学和荧光组织化学检测证明,ＴＨ基因能在细胞内稳定整合和表达,并在辅因子存在时将酷氨酸转化为多巴,移植于大鼠纹状体后可成活并表达ＴＨ。     

帕金森氏病的病因及表现和治疗

帕金森氏病（Parkinsondiseas。PD）又称震颤麻痹,是发生于中年以上的中枢神经系统变性疾病,以震颤、肌强直反运动减少为主要临床特征入8厂年由英国医生帕金森门OO。。Parkinson）苗先报道。脑炎、动脉硬化、颅脑损伤、一氧化碳、锰、汞及某些抗精神病药物等中毒也可产生与原发性帕金森氏病类似的症状,这种继发者称为帕金森氏综合症。本文重点谈谈帕金森氏病的病因、表现和治疗。亚病因和发病机制到目前为止,Plj的确切病因尚未完全明确。患者中脑黑质多巴胺（DA偷神经元变性坏死、酪氨酸羟化酶（＊N）减少成活性降低,使脑纹状体多…     

人胚DA能神经元移植于帕金森氏病猴模型的TH免疫细胞化学的研究

为了对人胚黑质ＤＡ神经元移植治疗ＰＤ人的临床应用作出客观评估,将８－１２周人胚黑质细胞移植到用ＭＰＴＰ诱发的偏侧ＰＤ猴新纹状体内。实验动物分别存活２个月、５个月和１年后,用ＴＨ免疫细胞化学方法对被移植的人胚ＤＡ细胞的存活和与宿主间的突触联系进行检查。在光镜下可见被移植侧的新纹状体内有ＴＨ阳性细胞,它们成小群散在分布,每小群有３－１０个细胞。ＴＨ阳性细胞的轴突延伸到整个新纹状体,树突呈现出正常发育过     

酪氨酸羟化酶和左旋芳香族氨基酸脱羧酶基因的细胞表达及活性检测

由于在帕金森病中合成多巴胺所需的酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和左旋芳香族氨基酸脱羧酶(aromatic L-amino acid decarboxylase,AADC)活性明显降低,所以补充多巴胺合成酶成为基因治疗帕金森病研究的主要手段。我们分别构建了重组逆转录病毒载体pLHCX／TH及pLNCX2／AADC,通过脂质体介导将带有目的基因的载体分别转到包装细胞PA317中,经筛选得到产病毒的细胞PA317／TH和PA317／AADC,采用免疫组化、原位杂交方法检测目的基因表达;细胞经裂解后进行的酶促反应产物多巴胺以高压液相电化学方法检测证明所克隆的T‘H及AADC基因具有功能活性;这两种基因工程改造细胞可以完成酶促动力学的功能,使L-dopa及多巴胺产生明显增加。本研究为用TH和AADC双基因对帕金森病进行基因治疗提供了一定的依据。     

重组鼠IL-1β和／或慢性缺氧刺激对大鼠颈动脉体中TH表达的影响

目的：观察慢性低压性缺氧和／或重组鼠白介素-1β（traiL-1β）刺激对大鼠颈动脉体（carotidbody,CB）中酪氨酸羟化酶（ty．rosinehydroxylase,TH）表达的影响。方法：雄性SD大鼠分为8组,分别为缺氧刺激0、1、2、3周组和缺氧0、1、2、3周的同时伴rmlL-1β刺激组。对CB进行免疫组化染色,并用westernblot法对TH进行半定量分析。结果：相对于缺氧0周组,缺氧1周、缺氧2周和缺氧3周组大鼠CB中TH的含量明显增加。相对于正常大鼠,rmlL-1β刺激引起大鼠CB中TH表达量增加。相对于单纯给予缺氧1周和缺氧2周,缺氧1周和缺氧2周同时给予mlL-1β刺激后引起大鼠CB中TH表达量的增加。结论：慢性缺氧和rmlL-1β刺激均可致颈动脉体TH上调,慢性缺氧伴rmlL-1β刺激比单纯缺氧刺激可引起TH更显著的增加。这个结果提示慢性缺氧或促炎性细胞因子tL-1β刺激不仅能够分剐促进颈动脉体中儿茶酚胺类物质的合成。而且IL-1β刺激可以促进慢性缺氧时颈动脉体中儿茶酚胺类物质的合成。这说明促炎性细胞因子可能对大鼠颈动脉体的慢性缺氧感受发挥调节作用。     

冷应激诱导的脾脏NK细胞活性下降和脑内c-fos表达

目的 :观察单一冷应激对大鼠脾脏NK细胞活性的影响以及脑内Fos表达。方法 :大鼠置于 4℃的冷室 4h。采用YAC 1细胞51Cr释放法测定脾脏NK细胞的活性。用免疫细胞化学观察脑内有关核团的Fos表达 ,以及PVN和LC中Fos表达阳性的神经元的性质。结果 :单一冷应激能使脾脏NK细胞活性明显下降 ,下丘脑室旁核 (PVN)和脑干蓝斑 (LC)出现明显的Fos表达。双染实验表明 ,PVN中有部分神经元同时表达精氨酸加压素 (AVP) ,LC中大多数神经元同时表达酪氨酸羟化酶 (TH)。结论 :PVN中的AVP能神经元和LC中的儿茶酚胺能神经元很可能参与冷应激诱发的脾脏NK细胞活性的下降     

人胰岛素基因在体内外表达的研究

利用定点突变人胰岛素基因,以脂质体载体和质粒不同比例形成的复合物进行体内外转染。体外转染鼠肝细胞,G418进行筛选,利用放免法测定培养液中胰岛素含量;体内通过肝门脉注射,测定模型鼠血糖及转染后7天时血液中胰岛素的含量,结果显示目的基因已转入肝细胞,且体内外转染都有一定量的成熟胰岛素表达,体外转染中粒与脂质体比为1:6转染后24h表达量最高为10.45μIU/ml,体内转染使模型鼠的糖尿病症状明显改善,血糖最高降幅达55％。     

大鼠脑内血管的单胺能神经分布——免疫组织化学法研究

本实验应用ABC免疫过氧化物酶法,以酪氨酸羟化酶(TH)作为标记物,观察了10只Wistar大鼠脑实质内血管的中枢去甲肾上腺素能神经分布。脑实质内血管壁明显可见免疫反应阳性去甲肾上腺素能神经纤维。对端脑皮质、海马、下丘脑、脑桥、延髓各部位血管的神经形态进行了描述。皮质血管的阳性纤维数量较多,纤维较细,相互交织成网,膨体可见;髓质内血管的阳性纤维较稀,似线样结构。讨论了中枢去甲肾上腺素能神经对脑实质内血管以及局部脑循环的作用。     

酪氨酸羟化酶基因载体－pCMVTH 质粒的构建及在大鼠骨骼肌内的表达

为用转基因方法治疗巴金森氏病大鼠模型,本研究采用分子克隆技术,将合成多巴胺的关键酶－酪氨酸羟化酶（ＴＨ）的基因,克隆进入以巨细胞病毒ＣＭＶ为启动子的载体质粒内,经限制性内切酶定位分析证实该重组的ＤＮＡ质粒的可靠性。携带ＴＨ基因的ＰＣＭＶＴＨ质粒以ＬＩＰＯ－ＦＥＣＴＩＮ介导,在培养的原代骨骼肌细胞中高效表达。本研究为进一步用转基因的细胞植入脑内以治疗巴金森氏病打下一定基础。     

帕金森病裸DNA法基因治疗的实验研究

采用体内裸DNA基因治疗帕金森病(PD)取得显著疗效.将酪氨酸羟比酶(TH)基冈表达质粒与Lipofectin形成的复合物立体定位注射于PD模型鼠纹状体,显著改善了PD鼠的不对付旋转行为.免疫组化证实神经细胞表达了外源TH.     

重组人EPO真核表达质粒在大鼠骨骼肌中的表达及其对贫血的治疗作用

目的和方法构建ＥＰＯ真核细胞表达载体（ｐｃＤ２ＥＰＯ）,用缝线法和注射法将其直接导入肾性贫血大鼠股四头肌,观察ＥＰＯ在骨骼肌细胞中的表达及其对贫血的治疗作用。结果：ｐｃＤ２ＥＰＯ导入股四头肌２周后,骨骼肌细胞内出现ＥＰＯｍＲＮＡ,提示被导入的ＥＰＯ基因在肌细胞内得到表达。贫血动物被治疗１周后,缝线组和注射组动物的ＨＧＢ和ＲＢＣ均显著升高;在第３周,缝线组的ＨＧＢ和ＲＢＣ接近健康大鼠的水平;至第４周,两个治疗组的ＨＧＢ和ＲＢＣ仍显著高于对照组。结论：经缝线法导入的ｐｃＤ２ＥＰＯ在骨骼肌中的表达效率及对贫血的治疗效果明显高于直接注射法,而两种治疗方法对改善肾性贫血动物肾脏清除ＢＵＮ的功能无明显差异     

外源ble基因在杜氏盐藻中的瞬时表达

利用电击法将带有ble基因的pSP124S转入杜氏盐藻细胞内进行瞬时表达,研究了外源基因在盐藻内的存留及表达情况,确定了合适的电击转化条件,发现利用电击法可以使大量的质粒导入盐藻细胞,质粒在细胞中逐渐降解但至少96h内可以检测得到,外源启动子能够使ble基因有效转录,转录至少可以持续72h,ble基因能够在盐藻细胞中正确翻译,可以作为盐藻遗传转化研究的筛选标记。     

外源ble基因在杜氏盐藻中的瞬时表达

利用电击法将带有ble基因的pSP124S转入杜氏盐藻细胞内进行瞬时表达．研究了外源基因在盐藻内的存留及表达情况,确定了合适的电击转化条件,发现利用电击法可以使大量的质粒导入盐藻细胞,质粒在细胞中逐渐降解但至少96h内可以检测得到。外源启动子能够使ble基因有效转录,转录至少可以持续72h,ble基因能够在盐藻细胞中正确翻译,可以作为盐藻遗传转化研究的筛选标记。     

EFFECTS OF HYPOXIA ON TYROSINE HYDROXYLASE ACTIVITY IN RAT CAROTID BODY

Abstract— Tyrosine hydroxylase (TH) activity was measured in the carotid body. superior cervical ganglion and adrenal glands of the rat under normal conditions and at 48 h following exposure of the animals for 1-3 h in a low O₂ atmosphere. Basal TH levels were 5-6 nmol/h/mg tissue for both the carotid body and the ganglion. Forty-eight hours after hypoxia, there was an increase in enzyme activity in both tissues which paralleled the severity of the hypoxia but was greater in the carotid body than the superior cervical ganglion. Thus, following exposure to 5% O₂ in N₂ for two 30-min periods (20-min interim), TH activity had increased by 50% in the carotid body and 33% in the ganglion; after exposure to 10% O₂ in N₂ for 3 h (continuous), TH levels were increased by 37% in the carotid body and 12% in the ganglion. In the adrenal gland, basal TH activity was 3.42 ± 1.87 nmol/h/mg tissue, and this value was unchanged following either level of hypoxia.     

6-羟多巴胺纹状体内注射制作大鼠帕金森病模型的研究

目的 为拓宽6-OHDA损毁多巴胺能神经元所制备大鼠帕金森病模型的应用范围,采用多位点纹状体内注入6-OHDA的途径来制备模型。方法 研究用SD大鼠,两个针道内四点定位注射,每点注射3μg／μ16-OHDA3μl。结果 术后两周出现缓慢旋转,4周旋转行为达到7转／分并保持稳定;形态学染色可见损毁1周后注射侧黑质酪氨酸羟化酶免疫组化阳性细胞减少20％,2周后减少38％,3～4周减少70％以上,6周后损伤趋缓。高效液相-电化学法活体检测纹状体内多巴胺的代谢产物3、4-二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA),发现注射侧和非注射侧相比含量分别下降98．33％和96．05％;组织匀浆检测损毁侧黑质多巴胺含量下降了73％以上,3、4-二羟基苯乙酸(DOPAC)含量下降60％。结论 纹状体内注射6-OHDA能够制备帕金森病大鼠模型。     

NERVE GROWTH FACTOR AND THE ACTIVITY OF TYROSINE HYDROXYLASE IN ORGAN CULTURES OF RAT SUPERIOR CERVICAL GANGLIA

Abstract— Superior cervical ganglia from young rats were cultured in the absence of serum. The effect of nerve growth factor on the level of tyrosine hydroxylase was studied. In the absence of nerve growth factor the specific activity of tyrosine hydroxylase fell by more than 50% within 48 h. In the presence of nerve growth factor the total and specific activities were maintained and even increased in the same period. Both the 2.5 S and the 7 S forms of nerve growth factor were effective. Oxidized nerve growth factor had no effect except when present in very high concentration. Purified antibody to nerve growth factor was inhibitory. Insulin had only a slight effect in this system, but dibutyryl CAMP elevated tyrosine hydroxylase activity substantially. Propranolol inhibited the action of nerve growth factor but its action appeared to be nonspecific and unrelated to its action on the β-adrenergic receptor. Changes in the activity of dihydropteridine reductase paralleled those seen in tyrosine hydroxylase.     

脑啡肽对大鼠海马神经细胞IL-6基因表达的影响

本文研究了大鼠海马内微量注射甲硫－脑啡肽（Ｍ－ＥＮＫ）对海马细胞的白细胞介素－６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６,ＩＬ－６）基因表达的影响。大鼠双侧海马内微量注射细菌内毒素脂多糖各１μｌ（ＬＰＳ,浓度：５０ｎｇ／ｍｌ）,于９０ｍｉｎ后用原位杂交技术检测到海马结构ＩＬ－６的基因表达,以齿状回颗粒细胞层显著。当海马内预先注射Ｍ－ＥＮＫ（每侧１μｌ,浓度：１０μｇ／μｌ）,３０ｍｉｎ后再给予脂多糖则未见ＩＬ－６基因表达。结果表明Ｍ－ＥＮＫ及ＬＰＳ可影响脑内ＩＬ－６的基因表达,在中枢调节机体免疫功能中,ＩＬ－６可能具有重要作用。     

THE DE NOVO SYNTHESIS OF TYROSINE HYDROXYLASE IN RAT SUPERIOR CERVICAL GANGLIA IN VITRO: THE EFFECT OF NERVE GROWTH FACTOR

Abstract— An immunoprecipitation technique has been employed to measure the rate of synthesis of tyrosine hydroxylase in organ cultures of rat superior cervical ganglia and the effect of nerve growth factor on that rate. Ganglia which have been maintained in culture for 16 h without nerve growth factor synthesize tyrosine hydroxylase; the hydroxylase comprises approx 0.2% of the newly synthesized soluble protein. While the total amount of tyrosine hydroxylase synthesized de novo increases in the presence of physiological levels of nerve growth factor, the differential rate of tyrosine hydroxylase synthesis is essentially unchanged. At higher levels of nerve growth factor (3–10 μg/ml) there is a small increase in the differential rate of tyrosine hydroxylase synthesis. The major action of nerve growth factor appears to be on the survival of the tissue, but a small effect on the induction of tyrosine hydroxylase is evident at high levels of nerve growth factor.