精氨加压素片段(4-8)对鼠脑PKC和PKA活性的影响

精氨加压素的 C端片段 ,AVP( 4 - 8) ,具有增强记忆的功能 ,它在大鼠脑内引发一系列的生理生化反应 .PKC经常是 G蛋白偶联受体信号传导途径中的介导激酶 ,在 AVP( 4 - 8)信号转导支路中亦不例外 .放射性配基结合实验表明 ,在海马及皮层突触膜上存在 AVP( 4 - 8)的特异性结合位点 .AVP( 4 - 8)可以刺激大鼠脑内 PKC酶活的升高 ,并可以被 AVP( 4 - 8)的受体拮抗剂 ZDC( C) PR阻断 .在同样条件下 ,AVP( 4 - 8)对 PKA酶活无显著性影响 .     

蛋白激酶C-细胞外信号调节激酶1/2通路介导精氨酸升压素对成年大鼠心肌成纤维细胞的促增殖作用

精氨酸升压素(arginine vasopressin, AVP)是高血压和心力衰竭时激活的神经体液和血流动力学因子,同时,它还具有直接的生长刺激作用.我们以往的研究显示AVP可诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts, CFs)增殖.本研究旨在进一步观察AVP是否对成年大鼠CFs具有促增殖作用,并探计其机制.采用组织块法培养成年大鼠CFs,用[3H]-TdR掺入法和流式细胞仪方法观察AVP作用下CFs的DNA合成和细胞周期分布.根据特异性底物髓磷脂基质蛋白(myelin basic protein, MBP)的磷酸化水平测定细胞外信号调节激酶1/2 (extracellular signal-regulated kinase 1/2, ERK1/2)的活性.用Western blot检测ERK1/2的磷酸化和p27Kip1、细胞周期蛋白D1、 A、 E的表达.结果显示,AVP(0.1μmol/L)可促进成年大鼠CFs的DNA合成,该作用可被V1受体拮抗剂d(CH2)5[Tyr2(Me),Arg8]-vasopressin (0.1μmol/L)阻断,而不受V2受体拮抗剂desglycinamide [d(CH2)5, D-Ile2, Ile4, Arg8]-vasopressin (0.1μmol/L)的影响.AVP可激活ERK1/2,用蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)激动剂佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA, 30nmol/L, 5min)急性刺激可模拟该作用,而PMA持续慢性作用(2.5μmol/L,24h)耗竭PKC后则抑制AVP对ERK1/2的激活.AVP可抑制p27Kip1的蛋白表达,升高细胞周期蛋白D1、 A和E的表达,同时促进细胞周期由G0/G1期进入S期.ERK1/2抑制剂PD98059 (30μmol/L)阻断AVP对DNA合成、p27Kip1、细胞周期蛋白D1、A和E蛋白表达的作用,并抑制细胞周期进程.以上结果表明,AVP可促进成年大鼠CFs增殖,该作用由V1受体和PKC-ERK1/2通路介导.AVP可通过ERK1/2调控p27Kip1、细胞周期蛋白D1、A和E的表达,从而促进成年大鼠CFs的细胞周期进程.     

新合成一种与心肌腺苷酸受体特异结合的放射性配基

腺苷酸对心肌收缩有明显影响,但心肌腺苷酸受体的含量很少,只达脑组织的1/25左右。因此,~3H-环己基腺苷酸、~3H-2-氯腺苷酸及~(125)I-羟苯异丙基腺苷酸(~(125)I-HPIA)等放射性配基虽广泛应用于研究脑组织的腺苷酸受体,但这些放射性配基与心肌膜制备结合时的非特异与特异结合比太高,因而很难应用于心肌腺苷酸受体研究。最近,美国Oklahoma医学研究基金会的Linden等自腺苷酸经N~6-4-硝基苯腺苷酸(N~6-4-Nitroben-zyladenosine)合成N~6-4-氨苯腺苷酸(N~6-4-aminobenzyladenosine,ABA),再以~(125)I标记,得到一种新型的腺苷酸受体放射性配基~(125)I-氨苯腺苷酸(~(125)I-ABA),并在大鼠心、脑等膜制备与~(125)I-HPIA进行了     

脊髓蛛网膜下腔注射脑啡肽类似物引起大鼠血压降低和心率减慢

给戊巴比妥钠麻醉大鼠脊髓蛛网膜下腔注射(1)~δ受体激动剂[D-丙~2)-甲硫脑啡肽酰胺(40,80nmo1),[D-丙~2]-亮脑啡肽(50,100nmol),[D-丙~2,D-亮~5]-脑啡肽酰胺(2.5,10,40nmol)均可使大鼠动脉血压下降,心率减慢,具有剂量-效应关系,并可为阿片受体阻断剂纳洛酮所对抗。(2)k 受体激动剂乙基环唑新(100,500nmol)及中等剂量强啡肽(5nmol)对心血管活动无明显影响,大剂量强啡肽(10nmol)使血压下降,心率无明显改变。(3)μ受体激动剂吗啡(150nmol)和双氢埃托菲(0.1,0.5nmol)对血压和心率均无明显作用。以上结果提示在脊髓水平,内源性阿片样物质的心血管作用主要是通过δ受体实现的,激动δ受体对心血管活动产生抑制性影响。     

蛙皮素对大鼠IFN性发热反应及脑内AVP含量的影响

目的:研究蛙皮素(BN)能否拮抗大鼠干扰素(IFN)性发热反应及其可能机制的探讨.方法:建立大鼠IFN-α性发热模型,观察侧脑室注射BN对大鼠IFN-α性发热反应及下丘脑、脑腹中隔区(VSA)精氨酸加压素(AVP)含量的影响.结果:①侧脑室注射IFN-α(每只2、5、8×104U)引起剂量依赖性体温升高,同时测得VSA中AVP含量明显增加(P<0.05),下丘脑AVP含量无明显变化(P>0.05).②侧脑室注射BN(每只0.1、0.5 μg),引起剂量依赖性体温降低(P<0.01),同时测得VSA中AVP含量增加( P<0.05),下丘脑AVP含量无明显变化(P>0.05).③侧脑室注射IFN-α(每只5×104U)30 min后,侧脑室注射BN(每只0.5 μg),BN能逆转大鼠发热反应(P<0.05),并于150 min时,大鼠体温恢复到对照组水平,同时测得VSA中AVP含量与对照组无显著性差异(P>0.05).结论:内生性AVP可能参与了IFN-α性发热反应的调节;BN降正常体温及解热作用可能通过AVP介导完成的.     

核糖核酸一级结构微量分析方法的研究——Ⅳ.寡核糖核苷酸3′-端的显色标记微量测定法

本文报告用甲基橙为原料合成了甲基橙的两种衍生物:4-二甲氨基偶氮苯-4'-磺酰-甘氨酰肼(DABS-Gly-NHNH_2,Ⅰ)和4-二甲氨基偶氮苯-4'-磺酰肼(DABS-NHNH_2,Ⅱ),并用(Ⅰ)成功地标记了高碘酸氧化的核苷二醛。标记产物在聚酰胺薄板上分离得很好,其灵敏度达到10~(-9)～10~(-10)克分子,比紫外吸收法灵敏数十倍。我们用试剂(Ⅰ)标记测定了四种不同的寡核糖核苷酸的3'-端,用量为0.08～0.12A_(260)。     

加压素参与记忆吗?

Dewied等首先提出加压素与记忆有关。他们发现,切除神经垂体的大鼠,其回避行为的条件反射易消退,而经外周或中枢注射加压素可改善此现象。中枢有效剂量仅是外周的1/1000,故认为中枢神经系统是加压素的作用部位。给正常大鼠脑内注射精-加压素抗体的实验结果亦支持这种设想。他们还发现,缺乏加压素的动物(HO-DI大鼠)有严重的记忆缺陷,而用加压素治疗则有效。但是,Carey等比较了200只HO-DI大鼠和正常大鼠的主动与被动回避行为,并没有发现HO-DI大鼠在学习和记忆方面有任何缺陷。Bailey等还发现,HO-DI大鼠的记忆较正常大鼠更好。     

魔芋葡甘低聚糖抗氧化性初步研究

为了检验魔芋葡甘低聚糖抗氧化功能,本文测定了魔芋葡甘低聚糖体外清除自由基及保护DNA氧化损伤能力,并通过连续两周用不同剂量的魔芋葡甘低聚糖灌胃小鼠,检测其对肝脏和血浆中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱肝肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的影响。研究结果显示:魔芋葡甘低聚糖对超氧阴离子自由基(.O2-)和羟自由基(.OH)有较好的清除能力,能有效地保护DNA免受羟自由基的损伤,并且能有效地降低肝脏中丙二醛水平,提高肝脏和血浆中SOD、GSH-PX的活性。     

大鼠侧脑室注射精氨酸加压素对针刺镇痛的影响

以钾离子透入法引起大鼠甩尾反应为指标,测定动物的痛阈。由侧脑室注射精氮酸加压素(AVP)后,大鼠痛阈升高33.6％～68.5％,针刺镇痛效应明显加强,痛阈提高202.4％～302.7％。脑室注射抗精氨酸加压素血清,动物痛阈虽无明显变化,但针刺镇痛效应明显削弱,痛阈仅增加41.6％～71.0％。注射抗β-内啡肽血清和抗强啡肽A血清并不阻断AVP增强针刺镇痛效应。本工作的结果提示,脑内AVP参与针刺镇痛,这种作用与脑内内源性β-内啡肽和强啡肽的关系不甚密切。     

大鼠对乙酰柠檬酸三丁酯的安全耐受值测定

按体重将80只SD大鼠随机分为对照组,低、中、高剂量组,每组雌雄各10只。持续静脉给药观察4周后处死,观察体重、脏器系数、血液及生化指标以及病理切片。与对照组比较,各组大鼠体重无显著性差异(p0.05);高剂量组雄鼠脑、肺、胸腺脏器系数差异显著(p0.05),雌鼠肝、卵巢脏器系数有差异显著(p0.05);中高剂量组雌、雄鼠部分血液及生化指标差异显著(p0.05);病理切片观察,各组大鼠肝脏均出现脂变,中高剂量组大鼠附睾、大肠出现炎症,其他器官未见明显病理改变。中高剂量组ATBC溶液对大鼠有一定毒性,参考低剂量组给药浓度,大鼠对其安全剂量为500 mg/kg体重/d。     

血管升压素对大鼠背根神经节神经元膜的作用

为研究血管升压素(arginine vasopressin,AVP)对大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元的作用及其机制,用细胞内微电极记录技术记录离体灌流DRG神经元的膜电位。结果如下:(1)在受检的120个细胞中,大多数(81.67％)在滴加AVP后产生明显的超极化反应。(2)滴加AVP(10μmol/L)后膜电导增加约19.34％(P<0.05)。(3)灌流平衡液巾的NaCl以氯化胆碱(CH-Cl)置代和用Cd2+阻断Ca2+通道后,AVP引起超极化反应的幅值均无明显变化(P>0.05),而加入K+通道阻断剂四乙铵(TEA)后,AVP引起的超极化反应幅值明显减小(P<0.05)。(4)AVP引起的超极化反应可被AVP V.受体拈抗剂阻断。结果捉示,AVP可使DRG大多数神经元膜产生超极化,DRG神经元膜上存在AVP V,受体,且AVP引起的超极化反应是通过神经元膜上AVP V.受体介导的K+外流所致.AVP可能参与了初级感觉信息传入的调制。     

灵芝多糖对AD模型大鼠海马组织Caspase-3和FasL表达的影响

目的研究灵芝多糖（GLP）对阿尔茨海默病（AD）大鼠海马组织半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白静3（caspase-3）和FasL基因以及空间学习记忆能力的影响。方法双侧海马内一次性注射淀粉样多肽25-35片段（Aβ25—35）制作大鼠AD模型,治疗组24h后腹腔注射灵芝多糖水溶液,1周后进行Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力变化。采用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链式反应法（RT-PCR）分别检测大鼠海马组织caspase-3蛋白的表达量和FasL基因的表达,以及灵芝多糖对上述各指标的影响。结果灵芝多糖能明显改善AD模型大鼠低下的空间学习记忆能力。显著降低模型大鼠海马组织caspase-3和FasL的表达,而且灵芝多糖能明显改善模型大鼠脑组织海马CAI区神经元的退行性变化。结论灵芝多糖能降低海马组织内FasL和caspase-3表达量,改善海马CAI区神经元的退行性变化。对老年性痴呆大鼠学习记忆能力可能有增强和提高作用。     

红藻氨酸和GABA受体在中华大蟾蜍卵母细胞的表达

本文报道了利用中华大蟾蜍卵母细胞作为外源性膜蛋白的表达及其功能特性研究的模式系统。将大鼠脑的mRNA微量注入蟾蜍卵母细胞(每个卵母细胞注射50ng),在19℃下经48h以上培养后,由外源mRNA表达的大鼠脑的红藻氨酸和γ-氨基丁酸受体被整合到了卵母细胞膜上。红藻氨酸(5×10~(-5)mol/L)和γ-氨基丁酸(10~(-4)mol/L)所诱导的膜电流分别达到294.0±6.4nA(n=5)和309.5±4.9nA(n=4)。红藻氨酸浓度在10~(-3)mol/L时,其诱导的膜电流达最大值。进而,注射mRNA的卵母细胞,~(36)Cl~-流入速度比对照组高一倍多。这些结果表明,中华大蟾蜍卵母细胞,如同爪蟾卵母细胞一样,能表达具有功能的外源膜蛋白(受体蛋白和离子运输蛋白)。     

IL-1β对精氨酸升压素诱导的大鼠心肌成纤维细胞INOS-NO系统活性的影响

目的：探讨白细胞介素-1β（IL-1β）对精氨酸升压素（AVP）诱导下大鼠心肌成纤维细胞（CFs）诱导型一氧化氮合酶（iNOS）-一氧化氮（NO）系统活性的影响。方法：胰酶消化法分离培养SD仔鼠CFs,硝酸还原酶法、分光光度法和逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）分别测定不同浓度IL-1β与AVP协同作用下CFs的NO含量、NOS活性和iNOSmRNA表达。结果：AVP诱导下CFs iNOSmRNA表达、NOS活性和NO合成均显著增加（P〈0.05）。一定浓度范围内IL-1β与AVP协同作用,剂量依赖性地增加AVP对CFs iNOS-NO系统活性的提高作用,其中AVP＋3ng／ml和AVP＋5ng／ml IL-1β组的iNOS mRNA表达、NOS活性和NO合成均显著高于AVP组（P〈0。05）,但IL-1β浓度增加至5ng／ml时,CFs的iNOSmRNA表达、NOS活性和NO合成不再继续升高,反而有所下降。结论：在一定浓度范围内IL-1β可与AVP协同提高CFs iNOS-NO系统活性。     

人胱抑素C参考物质制备方法的建立

[目的]建立重组人胱抑素C(cystatin C)表达体系,获得可溶、稳定、高纯度的胱抑素C。[方法]密码子优化并人工合成人胱抑素C编码序列,与麦芽糖结合蛋白(MBP)分别克隆至PRSF-Duet载体以构建重组人p MBP-CYSC PRSF表达质粒。使用大肠杆菌E. coli BL21(DE3) p Lys S对其进行诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白纯度和分子量,全自动生化仪测定纯化蛋白浓度及稳定性。[结果]成功构建重组人p MBP-CYSC PRSF表达质粒并诱导表达,胱抑素C蛋白浓度可达500 mg/L,纯度可达90%,在4℃和-20℃储存条件下监测64 w,胱抑素C蛋浓度稳定,均在允许相对偏差5%以内。[结论]通过密码子优化,成功获得浓度为500 mg/L、纯度为90%、存储稳定性至少达到64 w的胱抑素C蛋白,可充分满足该产品诊断试剂制备的需求。     

JTV1基因及其编码蛋白的研究

JTV1基因的转录物编码p38蛋白质,也称AMIP2.p38/JTV1是人类tRNA合成酶复合物的支架蛋白质,是氨酰tRNA连接酶复合物的核心分子,对复合物的组装起到重要的作用.p38/JTV1的结构中包含了谷胱甘肤S-转移酶(GST)结构域,可以与损害的DNA结合,起到分子伴侣的作用;p38/JTV-1可以通过与FBP相互作用而下调c-myc,从而促进细胞的凋亡;AIMP2/p38是p53的正性调节因子,缺失AIMP2/p38,可增加DNA损伤引起的凋亡,因为JTV1拥有上述这些活性,并且人类肿瘤组织经常发生突变,提示JTV1可能作为一种新的肿瘤抑制剂.     

精氨酸加压素C端片段（4—8）对大鼠海马神经元CCT的影响

为了研究精氨酸加压素C端片断 4～ 8(AVP4～ 8)对大鼠海马神经元中胞苷三磷酸 :磷酸胆碱胞苷转移酶 (CCT)的mRNA水平和酶活性的影响及其作用机制。将大鼠海马神经元用不同药物处理一定时间后 ,用RT PCR结合Southern杂交的方法测定CCT的mRNA水平 ,用测定胞苷二磷酸胆碱中 [14 C]的参入率来确定CCT活性。结果表明 :AVP4～ 8能上调海马神经元内CCT的mRNA水平 ,AVP4～ 8的拮抗剂ZDC(C)PR对此有抑制作用 ,当用放线菌素D中止基因转录 ,发现用AVP4～ 8共处理的细胞 ,比单独用放线菌素D处理的细胞 ,其CCTmRNA的半衰期较长 ;AVP4～ 8处理后 ,神经元内CCT的酶活性也有一定程度的上升。由此得出结论 :AVP4～ 8通过提高神经元内CCTmRNA的稳定性 ,提高了CCTmRNA的水平 ,进而影响了胞内CCT的酶活性。     

精氨酸加压素对大鼠背根神经节神经元GABA激活电流的增强作用（英文）

越来越多的研究表明,精氨酸加压素(arginine vasopressin,AVP)在痛觉调制中具有镇痛作用。已报道的研究专注于AVP镇痛的中枢作用机制,而本研究旨在研究AVP镇痛的的外周作用机制。应用全细胞膜片钳技术,在急性分离的大鼠背根神经节(DRG)神经元上,观察AVP对GABA激活电流(IGABA)的增强作用以及AVP对GABAA受体功能的影响。结果显示,AVP(1×10-10~1×10-5 mol/L)预处理后,IGABA增大,GABA剂量效应曲线上移,IGABA的最大值较之对照增加约49.1%;而EC50值几乎不变,表示此种加强为非竞争性的,而且AVP对GABA电流的作用可能是电压非依赖性的。AVP对IGABA的加强作用几乎完全被V1a受体的拮抗剂SR49059(3×10-6 mol/L)阻断。二次钳压技术胞内透析非水解GDP类似物GDP-β-S(5×10-4 mol/L)或PKC抑制剂GF109203X(2×10-6 mol/L)也可以阻断AVP对IGABA的加强作用。以上结果提示,AVP经由G蛋白耦联受体以及PKC信号通路上调DRG神经元GABAA受体的功能,可能是其诱导镇痛作用的基础。     

测定腦氨含量的一些技術問题

(一) 我們用固體二氧化碳和丙酮的混合液來代替液體空氣固定動物,所测得的大鼠腦氨含量與用液體空氣所得結果基本上一致。 (二) 改良了Conway測定氨的微量瀰散器皿使之適用於少量組織及0.05—0.50微克氨的测定。 (三) 採用了Conway的半量瀰散法,減少了由榖氨酰胺水解所引起的誤差。 (四) 利用上述改良的方法我們分別测定了大鼠腦各部的氨含量。     

中国大鲵 Dmrt 基因 DM 结构域的克隆及序列分析

Dmrt 基因家族是一个与性别决定相关的基因家族,该家族成员共有一个具有 DNA 结合能力的保守基序-DM 结构域。为了进一步探讨该家族在系统进化中的保守性,本研究通过简并 PCR 技术,扩增并克隆了中国大鲵（Andrias davidianus）基因组中的 DM 结构域。序列分析显示,中国大鲵基因组中存在 Dmrt 基因的 DM 结构域。其核酸序列与猕猴、青鳉、人、小鼠、牛、热带爪蟾相应 Dmrt 基因 DM 结构域的相似性分别为 91%、92%、92%、89%、91%、84%。其蛋白序列与上述物种的相似性均为91%,表现为4个氨基酸的变异。即第 19、34、36 和 45 位的精氨酸分别由半胱氨酸、谷胱酰胺、色氨酸和谷胱酰胺所取代。这些氨基酸的变化对其蛋白总体的三维构型没有显著影响。聚类分析结果表明,不同进化地位物种的 Dmrt 基因 DM 结构域编码序列存在高度的同源性,显示 Dmrt 基因在系统进化上的高度保守。