胍丁胺对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度的影响

本研究旨在观察胍丁胺 (agmatine ,Agm)对分离大鼠心室肌细胞内游离钙浓度 ( [Ca2 +]i)的影响。用酶解方法分离大鼠心室肌细胞 ,用Fluo 3 AM负载 ,然后用激光共聚焦法测定单个心室肌细胞 [Ca2 +]i 的荧光强度 (fluorescenceintensity ,FI) ,结果以FI或相对荧光强度 (F/F0 % )表示。实验结果表明 ,在正常台氏液 (含钙 1 0mmol/L)和无钙台氏液中 ,单个大鼠心室肌细胞的荧光密度分别为 12 8 8± 13 8和 119 6± 13 6,两者无差异。Agm 0 1、1和 10mmol/L浓度依赖性地显著降低细胞的钙浓度 ;在正常台氏液中加入EGTA 3mmol/L ,Agm同样降低细胞的钙浓度。KCl 60mmol/L ,PE 3 0 μmol/L ,和Bay K 864 410 μmol/L均升高心室肌细胞的[Ca2 +]i。Agm同样降低高浓度KCl、Bay K 864 4和PE诱发的心室肌细胞 [Ca2 +]i 升高。当细胞外液钙浓度由 1mmol/L增加到 10mmol/L时 ,诱发心室肌细胞钙超载 ,同时部分心室肌细胞产生可传播的钙波 (Ca2 +wave) ,Agm 1mmol/L降低钙波的传播速度和持续时间 ,最终阻断钙波。以上结果提示 ,Agm对心室肌细胞的胞浆[Ca2 +]i具有抑制作用 ,此作用通过阻断电压依赖性钙通道而实现 ;并可能与抑制大鼠心室肌细胞内钙释放有关     

牛磺酸对血管紧张素Ⅱ改变培养心肌细胞内游离Ca2+浓度作用的影响

目的和方法 :用Fura 2 /AM .荧光显示测定细胞内游离Ca2 浓度 ([Ca2 ]i)的方法 ,我们研究了牛磺酸 (Tau)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )引起的培养心肌细胞 [Ca2 ]i变化的影响。结果 :在有Ca2 和无Ca2 的缓冲液中 ,AngⅡ (1 ,1 0 ,1 0 0 ,1 0 0 0nmol/L)能浓度依赖性地引起 [Ca2 ]i升高。在含Ca2 的缓冲液中 ,Tau(1 0 ,2 0mol/L)可依浓度地抑制AngⅡ (1 0 0nmol/L)引起的 [Ca2 ]i升高 ;但在无Ca2 的缓冲液中 ,牛磺酸无此作用。用ryanodine(Rya ,1 μmol/L)预先耗竭细胞内贮存的Ca2 后 ,AngⅡ (1 0 0nmol/L)仍能引起 [Ca2 ]i进一步升高 :AngⅡ的这一作用能被Tau(2 0mmol/L)显著抑制。结论 :在培养的乳鼠心肌细胞 ,Tau能够通过抑制AngⅡ引起的Ca2 内流而拮抗AngⅡ升高 [Ca2 ]i的作用。     

白藜芦醇降低大鼠心室肌细胞内游离钙浓度

实验旨在研究白藜芦醇(resveratrol)对大鼠心室肌细胞内钙浓度(intracellular calcium concentratoin,[Ca2+]i)的影响.应用激光共聚焦显微镜技术记录心室肌细胞内的钙荧光强度.结果表明在正常台氏液和无钙台氏液中,白藜芦醇(15～60μmol/L)呈浓度依赖性地降低[Ca2+]i.蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂正钒酸钠(sodium orthovanadate,1.0 mmol/L)和L型Ca2+通道激动剂Bay K8644(10 μmol/L)可部分抑制正常台氏液中白藜芦醇的效应.但NO合酶阻断剂L-NAME(1.0 mmol/L)对白藜芦醇的作用无影响.白藜芦醇也能明显抑制无钙台氏液中由低浓度ryanodine(1.0 nmol/L)引起的[Ca2+]i增加.当细胞外液钙浓度由1 mmol/L增加到10 mmol/L而诱发心室肌细胞钙超载时,部分心室肌细胞产生可传播的钙波,白藜芦醇(60 μmol/L)可降低钙波的传播速度和持续时间,最终阻断钙波.结果提示,白藜芦醇能够降低心室肌细胞内游离钙浓度,此作用可能与其抑制电压依赖性Ca2+通道、酩氨酸激酶和肌浆网内钙释放有关.     

一氧化氮在血管紧张素Ⅱ激活蛋白激酶C中的作用

实验在培养新生大鼠心肌细胞中检测NO前体L－精氨酸（L－Arg）和NO供体硝普钠（SNP）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）激活蛋白激酶C（PKC）的作用,以探讨心肌细胞PKC水平的信号转导途径,实验结果如下：（1）无血清DMEM培养心肌细胞24h后加入AngⅡ,PKC活性呈剂量依赖性增高;（2）培养基中加入L－Arg,PKC活性呈剂量依赖性降低;（3）用L－Arg100μmol/L进行预处理,30min后分别加入AngⅡ0.1μmol/L或PMA10μmol/L,PKC活性均明显降低,与单纯AngⅡ组和单纯PMA组相比均有显著性差异;用NOS抑制剂L－NAME预处理后,再加入L－Arg,可明显阻断L－Arg对上述两个效应的影响;（4）培养液中加入NO供体SNP,PKC活性呈剂量依赖性地降低;（5）用SNP10μmol／L预处理心肌细胞,5min后分别加入AngⅡ或PMA,PKC活性分别与单纯AngⅡ和单纯PMA组相比均明显降低。以上结果表明,AngⅡ能剂量依赖性激活PKC,而NO可剂量依赖性抑制PKC活性;NOS参与L－Arg抑制AngⅡ或PMA激活PKC的作用。这些观察提示,NO抑制AngⅡ对心肌细胞的作用可能是通过抑制PKC活性实现的,PKC可能是NO和AngⅡ在心肌细胞内信号转导的交汇点（cross talk）。     

非诺贝特通过FoxO1 抑制心肌肥大

目的:探讨非诺贝特(fenofibrate)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肥大心肌细胞的抑制作用及对FoxO1表达的影响。方法:首先采用AngⅡ诱导心肌细胞肥大,将细胞分为三组:对照组:未给予任何干预;心肌细胞肥大组:AngⅡ(10-7mol/L)刺激细胞;治疗组:先给予fenofibrate(10-5mol/L),30min后AngⅡ(10-7mol/L)刺激细胞。应用蛋白免疫印迹法(western-blotting)和实时定量PCR法(real time PCR)检测各组细胞中转录因子FoxO1的蛋白质及mRNA含量,心肌细胞肥大的判断使用脑钠肽(brain natriuret icpepide BNP)。结果:心肌细胞肥大组的FoxO1表达较对照组明显降低,而治疗组的FoxO1表达较心肌肥大组明显升高。结论:非诺贝特可能通过上调FoxO1表达,从而抑制心肌细胞肥大。     

血管紧张素Ⅱ诱导培养的成年大鼠心肌细胞凋亡

研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养的成年大鼠心肌细胞(adult rat ventricular myocytes,ARVMs)凋亡.酶灌流消化法分离培养ARVMs,不同处理后,光镜观察形态改变,琼脂糖凝胶电泳定性分析DNA降解程度.结果发现培养的ARVMs经AngⅡ10μmol/L处理48 h后,大部分细胞变圆,胞浆浓缩;电泳显示核酸断裂片段"梯形"结构,上述改变在72 h更为明显.上述作用可被氯沙坦、维拉帕米和staurosporine所取消.这表明AngⅡ由AT1受体介导诱导培养的ARVMs凋亡,细胞内钙升高和PKC激活起重要作用.     

内皮素对离体大鼠心肌细胞的影响

本文应用离体成年大鼠心肌细胞,研究内皮素作用的细胞机制,发现10~(-9)—10~(-7)mol/L内皮素可引起心肌细胞挛缩、胞浆乳酸脱氢酶漏出和细胞总钙量增加,且具有剂量-效应关系。内皮素可促进~(45)Ca内流,其作用为钙通道阻断剂维拉帕米所拮抗。预先用负载荧光染料Fura-2的心肌细胞与内皮素孵育,可见胞浆游离钙显著增加,其作用亦可为维拉帕米抑制。结果提示:内皮素主要通过电位依赖的钙通道促进心肌细胞Ca~(2+)内流,产生其生物学效应。     

白介素-2对心肌细胞[Ca~(2 )]_i的作用及其信号转导途径

为研究白介素 2 (interleukin 2 ,IL 2 )对心肌细胞内钙浓度 ([Ca2 ]i)的影响及其信号转导途径 ,实验采用酶解法分离成年大鼠心室肌细胞 ,以Fura 2 /AM为钙探针 ,用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞 [Ca2 ]i 的变化。结果发现 :(1)IL 2 (0 5～ 2 0 0U/ml)浓度依赖性地降低单个心室肌细胞内钙瞬态 ,IL 2 (2 0 0U/ml)对咖啡因诱导的肌浆网内储钙的释放无影响 ;(2 )纳洛酮 (naloxone ,Nal) (10 -8mol/L)和nor binaltorphimine (nor BNI,10 -8mol/L)可阻断IL 2对心肌细胞钙瞬态的作用 ,而纳曲吲哚 (naltrindole ,NTI) (10 -6mol/L)不能阻断此作用 ;(3)κ阿片受体激动剂U5 0 488H (10 -6mol/L)降低心肌细胞钙瞬态 ,nor BNI (10 -8mol/L)可阻断此作用 ;(4 ) 5mg/L百日咳毒素 (PTX)预处理可取消IL 2降低心肌细胞钙瞬态的作用 ,而酪氨酸激酶抑制剂genistein (10 -4 mol/L)不能取消IL 2的作用 ;(5 )U7312 2预处理可阻断IL 2的作用。研究结果表明 ,IL 2降低心肌细胞钙瞬态的作用 ,是通过心肌细胞上κ阿片受体介导的 ,其下游途径包括PTX敏感的G蛋白和磷脂酶C。     

E4031对慢性心衰大鼠离体心脏功能和心肌细胞内静息Ca^2＋水平的影响

目的：研究具有钠钙交换（NCX）激动作用的药物E 4031对慢性心衰大鼠离体心脏功能和心肌细胞内静息Ca2＋水平的影响。方法：通过腹主动脉缩窄建立大鼠慢性心力衰竭模型;利用Langendorff装置进行离体心脏灌流,检测大鼠心功能及E 4031对血流动力学指标的影响;急性分离心衰大鼠心肌细胞,与钙荧光指示剂fluo3/AM共同孵育后,用激光共聚焦显微镜系统观察E 4031对心肌细胞内荧光强度的影响。结果：缩窄大鼠腹主动脉12周后,langendorff离体灌流检测显示大鼠心功能明显降低;在灌流液中加入10μmol/L E 4031可以使心衰大鼠心脏左室发展压（LVDP）和左室收缩/舒张最大速率（±dp/dtmax）提高;与正常组和伪手术组相比,心衰大鼠心肌细胞内静息钙荧光强度明显升高,和10μmol/L E 4031共孵育后,心衰大鼠心肌细胞静息钙荧光强度呈现短期先升后降过程,然后在较低的水平保持稳定。结论：E 4031可以增强慢性心衰大鼠离体心功能,可能与其增强心肌细胞膜NCX活动,稳定细胞内Ca2＋水平有关。     

钙调神经磷酸酶信号通路参与钙激动剂介导的心肌细胞肥大

目的在于探讨不同来源的细胞内游离钙(［Ca2+］i）对钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）依赖信号通路和心肌细胞肥大的影响。方法以原代培养的乳鼠心肌细胞为模型,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、雷尼丁（RY）和三磷酸肌醇（IP3）（浓度均为10-7mol／L）激活心肌细胞［Ca2+］i,应用钙荧光指剂Fura-2／AM动态观测心肌细胞［Ca2+］i浓度,同时检测心肌细胞CaN活性及蛋白表达。用氚-亮氨酸（3H-Leu）掺入量测定心肌细胞蛋白质合成速率。结果发现AngⅡ、RY和IP3明显增加心肌细胞［Ca2+］i浓度、CaN活性及蛋白表达并提高3H-Leu的掺入量,与对照组心肌细胞相比差异显著（P＜0．01）。结论激活心肌细胞［Ca2+］i可明显提高心肌细胞蛋白合成速率,心肌细胞CaN活性及蛋白表达似与细胞［Ca2+］i变化有明显关系而与其来源无关,表明CaN信号通路在心肌细胞生长中发挥重要作用。