可溶性核糖核酸的研究 Ⅰ.金属离子对可溶性核糖核酸酶解稳定性的作用

(1)各种金属离子对大腸杆菌RNase活力的影响不同,Mg~++不仅沒有抑制作用而且是大腸杆菌RNase表現活力的必需因素。Ca~(++)与Ag~(++)相似,Co~(++)对酶活力影响較小,而Ni~(++)則有抑制作用。(2)在Mg~(++)、Ca~(++)或Na~+等存在下,大腸杆菌RNase和牛胰RNase降解SRNA的速度远比HRNA为慢;利用Mg~(++)对这两种RNase活力的影响不同,在Mg~(++)存在与否下,比較SRNA与HRNA降解速度的結果指出,SRNA的二級結构是其酶解緩慢的主要原因,而Mg~(++)等金属离子对稳定其二級結构起着重要的作用。这种作用在60℃仍然存在。(3)SRNA影响RNase对HRNA的降解。这种現象可能用酸溶性核苷酸与RNA一起沉淀的作用解释,但也不能完全排除两个結构相似底物(SRNA与HRNA)同时存在相互竞爭的可能性。(4)对SRNA不能为其他核酸降解酶完全降解或降解速度緩慢的原因及其生理意义进行了討論。     

可溶性核糖核酸的研究——Ⅱ.脱氨作用对可溶性核糖核酸性质的影响

(1)脫氨SRNA的ε(p)及超离心沉降行为皆与SRNA相似。脫氨SRNA的紫外吸收高峰及低峰皆稍向短波长方向移动。Mg~(++)使SRNA产生紫外低吸收效应,尿素使SRNA的光吸收值增高;在同样条件下,Mg~(++)及尿素对脫氨SRNA紫外吸收值影响极小。脫氨SRNA易为Ba~(++)等金属离子所沉淀,在pH5—7.2范圍內,0.083MBaCl_2即可使脫氨SRNA沉淀約90%,而SRNA的沉淀尚不足10%。脫氨SRNA經碱或牛胰RNase水解后,則不再能为BaCl_2所沉淀。温度对BaCl_2沉淀脫氨SRNA与SRNA有显然不同的影响。(2)用大腸杆菌RNase和牛胰RNase两种酶水解脫氨SRNA与SRNA时,Mg~(++)可以提高这两种酶对前者的降解速度,而对后者起稳定作用。(3)大腸杆菌RNase降解脫氨SRNA可以得到黄嘌呤、次黄嘌呤及尿嘧啶三种单核苷酸,降解SRNA可以得到腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤及尿嘧啶四种单核苷酸。     

论核糖核酸酶P

<正> 核糖核酸酶P(RNase P)是一类使转移核糖核酸(tRNA)5′端成熟的加工酶,在tRNA生物合成中起着非常重要的作用。RNase P活性于1972年在大肠杆菌中首次发现,到1977年证明该酶是一个由核糖核酸(RNA)和蛋白质两者构成的核糖核蛋白(RNA蛋白,ribonucleoprotein),RNA部分为酶活性所必需。1979年将无活性的RNA组分和蛋白质组分重组得到有活性的酶。1983年分离出RNase P中RNA组分的前体分子,同时阐明,无论     

核酸化学结构的研究——Ⅰ.1-氟-2,4-二硝基苯与可溶性核糖核酸的反应

(一)本工作报告了FDNB与RNA的作用条件,并研究了不同断裂程度的RNA和FDNB的反应。(二)对DNP-在大肠杆菌S-RNA分子中的结合位置通过紫外线吸收光谱和牛胰RNase以及蛇毒磷酸双酯酶的降解作用做了探讨,由实验结果推断:DNP-似结合在S-RNA末端5′-G核苷酸的磷酸单酯上。(三)本文说明DNP-的结合量可以用来计算S-RNA的链长及分子量;也可以利用DNP-标记pG末端,以便利于该末端核苷酸排列顺序的研究。     

细胞毒性RNase及其抗肿瘤活性

核糖核酸酶(ribonuclease,RNase)是一类核酸水解酶,它们广泛存在于动植物中,除了具有水解RNA的活性外,有的还有一定的细胞毒性。根据结构的相似性,这些RNase属于RNase A超家族(RNase A superfamily)。RNaseA超家族包含了以牛胰核糖核酸酶为原型的不同来源的脊椎动物核糖核酸酶。细胞毒性RNase显示出抑制肿瘤细胞生长的活性,因而有望应用于肿瘤治疗中。本文对RNase A超家族中的几个成员棗核糖核酸酶A(ribonuclease A,RNaseA)、豹蛙抗癌酶(onconase,ONC)、牛蛙核糖核酸酶(Rana catesbeiana ribonuclease,RC-RNase)、牛精液核糖核酸酶(bovine seminal ribonuclease,BS-RNase)和amphinase(Amph)的结构及抗肿瘤活性进行了综述。     

胰脏核糖核酸酶的生理功能和分子结构与进化

各种生物中广泛存在核糖核酸酶(RNase).自1939年Kunitz.首次得到结晶的牛胰脏RNase以来,生物化学家开始对动物胰脏RNase进行多方面的研究.首先是因为胰脏RNase是研究RNA结构的一种重要工具酶.其次,比较胰脏RNase分子中氨基酸的异同和性质,也是深入了解蛋白质结构与功能关系的重要手段,另外,研究进化地位不同的动物     

水分胁迫对高粱等作物叶片中核糖核酸酶活力的影响

水分胁迫促使高粱,玉米,蚕豆叶片中核糖核酸酶(RNase)活力增加,其程度以下部老叶多于上部叶片。酶活力的增加不仅由于水分胁迫的直接影响,也与缺水促进叶子早衰有关。 亚胺环己酮(CHM)前处理对水分胁迫时高粱幼苗RNase活力的增加起强烈抑制作用;氯霉素(CP)前处理对脱水引起的RNase活力增加无明显抑制效果。 高粱叶细胞中的RNase活力约85％存在于细胞质的液相中,其余似以颗粒酶形式存在于各类细胞器内,不易因水分胁迫而被释出。因而水分胁迫下高粱RNase活力的增加主要决定于细胞质中的可溶性RNase。 根据酶的热稳定性和它对酸化-碱化处理的反应表明水分胁迫并未引起高梁RNase的性质发生变化。     

核糖核酸酶A家族典型成员在肿瘤发生中的作用

人体中核糖核酸酶A(ribonuclease A,RNaseA)家族包含8个典型成员(RNase 1至RNase 8)。已有研究显示，除RNase 8外，该家族其它典型成员影响了胰腺癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌和皮肤癌等多种肿瘤的发生发展。在肿瘤发生过程中，特定RNase表达量及糖基化修饰会发生显著改变，是肿瘤诊断的潜在标志物；它们能以多种机制参与肿瘤发生、生长和转移等过程，有望成为肿瘤治疗的靶点；而部分成员则具有杀伤肿瘤细胞、抑制肿瘤发展的功能，存在临床开发成肿瘤治疗药物的可能。具体而言，RNase 1通过核糖核酸酶活性依赖的细胞毒性和细胞外RNA降解功能，发挥直接杀伤肿瘤细胞或降低局部炎症而抑制肿瘤生长的作用；RNase 1还能结合并激活促红细胞生成素，产生肝细胞癌受体相互作用蛋白A4 (erythropoietin-producing hepatocellular carcinoma receptor-interacting protein A4, EphA4)信号通路，促进乳腺癌的发生。RNase 2和RNase 3是嗜酸性粒细胞颗粒蛋白质的重要成分，依赖于阳离子性及核糖核酸酶...     

黄芪多糖对RNase和RNase抑制因子的作用

黄芪多糖-Ⅱ(简称APS-2)系葡萄糖聚合体,分子量12,300,其作用与黄芪多糖(APS)相似。小鼠和大鼠皆腹腔注射200mg/kg/day×3J小鼠实验表明APS-2有显著抑制肝、脾碱性RNase活力的作用,对血清RNase活力无作用,对酸性RNase无明显抑制。大鼠实验表明对肝碱性RNase只有104,000×g部分有显著抑制作用,而对10,000×g部分无影响。对肝碱性RNase的抑制因子具显著性增强作用。因此黄芪多糖的作用是通过增强RNase抑制因子和抑制RNase活力,使RNA的分解代谢降低,从而引起RNA累积和合成速率的降低。     

核糖核酸結构的研究 Ⅲ.利用核糖核酸酶T_1研究絲腺与酵母可溶性核糖核酸的結构

(1) 从高峰淀粉酶制剂(Taka-Diastase)制得RNase T_1,提纯了2800倍,可用于结构研究,从上海四万酿造厂的米麯也分得类似纯度、类似特异性的酶。(2) 用RNase T_1单独或与RNaseⅠ联合作用的结果,均发现啤酒酵母与蓖麻蚕絲腺腺体sRNA的结构有显著差异。例如用RNase T_1单独作用时,由蓖麻蚕蒜腺sRNA所得Gp大于啤酒酵母sRNA,而UpUpGp则小于后者。用两个酶联合作用时,由蓖麻蚕絲腺sRNA所得Cp、(Gp+Gp!)大于啤酒酵母sRNA,且前者较后者多出许多含稀有成份的紫外光吸收点,其电泳层析行为及表现熒光性质较为特殊。(3) 蓖麻蚕蒜腺sRNA合有-Gp(Ap)_4Cp-及-Gp(Ap)_3Cp-等结构。(4) RNase Ⅰ与RNase T_1联合水解sRNA所得Gp!/Gp值大于RNase T_1单独作用时所得Gp!/Gp值。     

磷酸钙柱层析在分离动物组织核糖核酸中的应用及其对核糖核酸稳定性的研究

(1)本实验探索了磷酸钙柱层析在分离动物组织RNA提取液的洗脱条件。(2)磷酸钙柱层析应用于大鼠肝RNA总溶液的分离获得重复性较好的柱层析图谱。(3)对大鼠肝磷酸钙柱层析各峰的RNA性质进行初步分析,但对B峰的性质还不了解。(4)磷酸钙柱层析本身似对RNA分子的降解无甚影响。(5)比较了正常肝、再生肝及3′-甲基奶油黄诱发肝癌RNA的磷酸钙柱层析图谱。(6)观察了大鼠腎、胰、脑等组织RNA的磷酸钙柱层析图谱,与肝脏者有明显的差别。(7)观察了感染脑心肌炎病毒小鼠脑RNA的柱层析图谱,并试验了所洗脱的RNA的部分的致病活性。     

核糖核酸酶A超家族：不仅仅是一组降解RNA的酶

核糖核酸酶A超家族(ribonuclease A superfamily; RNase A superfamily),也称脊椎动物分泌型核糖核酸酶超家族(vertebrate secreted ribonucleases superfamily),是二十世纪蛋白质结构、酶学和分子进化领域研究最多最广泛的核糖核酸酶家族。自上世纪初期从牛胰腺中分离鉴定第一个成员以来，已从哺乳动物、两栖动物、爬行动物、鸟和鱼等几百种动物中鉴定了几千个成员。早期对该家族成员的研究不仅促进了蛋白质化学技术的发展，而且为现代生物学研究奠定了基础。目前已知人的核糖核酸酶A超家族成员包括8个典型成员(RNase 1～RNase 8)和5个非典型成员(RNase 9～RNase 13)。功能方面，曾一度以为该家族成员只具有降解核糖核酸的能力。随着血管生成素(angiogenin; RNase 5)、嗜酸性粒细胞衍生神经毒素(eosinophils-derived neurotoxin, EDN; RNase 2)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophils cationic protein, ECP; RNase ...     

抗呼吸道合胞病毒免疫核糖核酸免疫活性的研究

本文在小鼠模型系统中,应用ELISA和~(125)IUdR释放试验分别研究抗呼吸道合胞病毒免疫核糖核酸(RSV—i—RNA)诱生血清特异性抗体活性和以细胞毒活性为指标检测其增强细胞免疫的作用。实验结果表明:RSV-i-RNA能诱生血清特异性抗体和提高鼠脾细胞对靶细胞的杀伤作用,且明显高于正常核糖核酸对照组。 RSV-i-RNA的上述作用可被RNase所阻断,但不受DNase和Pronase的影响。     

人类核糖核酸酶A家族

核糖核酸酶A（RNase A）是脊椎动物所特有的蛋白质家族。除了水解RNA以外,它们还参与细胞成熟、细胞凋亡、血管生成以及宿主防御等过程,在疾病的诊断和治疗方面表现出重要的应用价值。随着人类基因组计划的完成,人们已经发现了13个RNase A基因。本文综述了人类RNase A的酶活性和结构特点,特别论述了其特殊的生物学活性,以及酶活性与特殊生物学活性之间的关系,为进一步的研究和应用提供信息。     

HSV-1 UL41基因编码蛋白的RNase活性及其调控

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type-1,HSV-1)UL41基因编码一种皮层蛋白,该蛋白质具有核糖核酸酶(ribonuclease,RNase)活性,能特异性地降解一些宿主和病毒信使RNA(messenger RNA,m RNA),参与宿主免疫逃逸,与其他蛋白质相互作用调控其RNase活性。该文概述了HSV-1UL41基因编码蛋白的RNase活性及其调控机制,以期为该基因的深入研究提供参考。     

多核苷酸合成的研究——Ⅰ.酶促合成酵母丙氨酸转移核糖核酸3′-端接受茎区八核苷七磷酸CpUpCpGpUpCpCpA

本文报道了用RNase N_1(核糖核酸酶、鸟嘌呤核苷酸-2’-移换酶,Neurospora Crassa,E.C.2.7.7.26)连接CpUpCpG>p与UpCpCpA合成酵母丙氨酸转移核糖核酸3’-端接受茎区八核苷七磷酸GpUpCpGpupCpCpA。反应条件包括:供体(CpUpCpG>p),0.07～0.09M;受体(UpCpCpA)浓度为供体浓度的三至七倍;RNase N_1,每毫升250单位;pH7.5磷酸缓冲液,0.1M;0°±2℃反应48小时。在这一反应中,CpUpCpGpUpCpCpA的产率随着受体与供体的克分子比例的增大而升高,当这一比例超过6,产率超过30%。本方法一次可得到纯的CpUpCpGpUpCpCpA数毫克。关于从最终产物中除去RNase N_1的问题,我们发现在pH3.5条件下进行DEAESephadexA-25(Cl~-型)柱层析或用pH2.7条件下的纸电泳法均可得到较满意的效果。当把反应物在6M NH_4OH,0.04M DTP,37℃保温15分钟,或者在pH7.4 Tris-HCl缓冲液和0.04MDTP,0℃保温7小时以后,RNase N_1即完全失活。可是,一旦除去上述DTP等抑制条件以后,失活后的RNase N_1在空气中可以逐步恢复其大部分活力。在我们的实验中没有向反应物中加入0.1%的明胶蛋白,很可能底物本身对RNase N_1具有一定的保护作用。在合成CpUpCpGpUpCpCpA的同时,我们还用RNase N_1合成了GpC,GpΨ,GpU,GpUp,GpUpCpC及CpUpCpGpUpCpC等寡核苷酸,并且都得到了较好的产率。对RNase N_1酶促合成CpUpCpGpUpCpCpA反应中产生的几个付产物进行了分离纯化和初步鉴定。     

酵母丙氨酸转移核糖核酸中十三核苷酸(23～35)类似物(CpGpCpGpCpUpCpCpCpUpUpIpGp)的合成

本文报道了利用酶促合成的方法(RNase N_1和T_4 RNA连接酶)合成了酵母丙氨酸转移核糖核酸分子中第23位到第35位的十三核苷酸的类似物CpGpCpGpCpUpCpCpCpUpUpIp-Gp(天然酵母丙氨酸tRNA中第26位是m_2~2G)。CpGpCpG是由CpG>p和CpG经RNase N_1酶催化合成的,产率为20%。十三核苷酸CpGpCpGpCpUpCpCpCpUpUpIpGp的合成是由T_4 RNA连接酶催化CpGpCpG与pCpUpCpCpCpUpUpIpGp之间的连接反应实现的,产率为80%。产物经双向电泳层析分析为一点,用蛇毒磷酸二酯酶部分酶解后的双向图谱分析证明十三核苷酸的核苷酸排列顺序正确。     

人体白细胞转移因子和“免疫”核糖核酸的联合抽提法——Ⅱ.“免疫”核糖核酸

本文继续介绍联合抽提法的第Ⅱ部分“免疫”核糖核酸(iRNA)的抽提。将白细胞匀浆沉淀残渣按Scherrer和Darnell的十二烷基磺酸钠加苯酚的热抽提法抽提。每克白细胞可得iRNA1～2毫克。A_(260)/A_(230)=2.05～2.26,A_(260)/A_(280)=2.03～2.20。RNA含量为48.33±4.72%,DNA含量为4.31±2.53%,蛋白质为2.76±0.32%,糖原含量为42.92±9.92%。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示五条区带,相当于4S、83、9S、15S和20S。冻干的iRNA制剂经动物实验证明无毒性、无热原和无过敏性,但对家兔具有抗原性。制剂经RNase、DNase或pronase处理后与抗血清仍有沉淀反应,但经唾液淀粉酶处理后沉淀线消失。所以认为抗原性系由制剂中所含糖原所引起。溶于肝素溶液的制剂注射于病人,能提高其迟发型皮肤变态反应及细胞免疫反应。     

多核苷酸合成的研究——Ⅰ.酶促合成酵母丙氨酸转移核糖核酸3′-端接受茎区八核苷七磷酸CpUpCpGpUpCpCpA

本文报道了用RNase N_1(核糖核酸酶、鸟嘌呤核苷酸-2′-移换酶,Neurospora Crassa,E.C.2·7·7·26)连接CpUpCpG>p与UpCpCpA合成酵母丙氨酸转移核糖核酸3′-端接受茎区八核苷七磷酸CpUpCpGpUpCpCpA。反应条件包括:供体(CpUpCpG>p),0.07～0.09M;受体(UpCpCpA)浓度为供体浓度的三至七倍;RNase N_1,每毫升250单位;pH7.5磷酸缓冲液,0.1M;0°±2℃反应48小时。在这一反应中,CpUpCpGpUpCpCpA的产率随着受体与供体的克分子比例的增大而升高,当这一比例超过6,产率超过30%。本方法一次可得到纯的CpUpCpGpUpCpCpA数毫克。关于从最终产物中除去RNaseN_1的问题,我们发现在pH3.5条件下进行DEAMSephadexA-25(Cl~-型)柱层析或用pH2.7条件下的纸电泳法均可得到较满意的效果。当把反应物在6M NH_4OH,0.04M DTP,37℃保温15分钟,或者在pH7.4 Tris-HCl缓冲液和0.04M DTPJ 0℃保温7小时以后,RNase N_1即完全失活。可是,一旦除去上述DTP等抑制条件以后,失活后的RNase N_1在空气中可以逐步恢复其大部分活力。在我们的实验中没有向反应物中加入0.1%的明胶蛋白,很可能底物本身对RNase N_1具有一定的保护作用。在合成CpUpCpGpUpCpCpA的同时,我们还用RNase N_1合成了GpC,GpΨ,GpU,GpUp,GpUpCpC及CpUp(UpGpUpCpC等寡核苷酸,并且都得到了较好的产率。对RNase N_1酶促合成CpUpCpGpUpCpCpA反应中产生的几个付产物进行了分离纯化和初步鉴定。     

作用于cip-cel mRNA的核糖核酸内切酶的鉴定

【目的】本研究以革兰氏阳性细菌解纤维素梭菌(Ruminiclostridium cellulolyticum)为研究对象,筛选作用于纤维小体编码基因簇cip-cel mRNA的核糖核酸内切酶。【方法】通过对预测的4个假定编码核糖核酸内切酶基因进行基因敲除、体内过表达、体外过表达和活性分析等方法,分析它们对cip-cel mRNA剪切位点的剪切能力。【结果】敲除rnc和rnj基因,对cip-cel mRNA剪切没有任何影响;体内过表达RNase时能够加速cip-cel mRNA的降解,而过表达RNase G时,则结果与野生型对照菌株无异;RNase G基因rng和RNase Y基因rny的体外活性鉴定分析,发现RNase G对体外转录的包含cip-cel mRNA剪切位点的RNA没有作用,而RNase Y能够对其进行剪切和降解。【结论】RNase Y是能够作用于cip-cel mRNA的核酸内切酶。该研究结果对理解革兰氏阳性细菌核糖核酸内切酶的作用机制,及其在转录后水平的调控基因差异表达等方面具有重大意义。