尖吻蝮蛇毒内一种新抗凝血因子ACF II 的纯化及特性

利用阴离子交换层析、凝胶过滤及阳离子交换层析三步方法, 从皖南尖吻蝮蛇毒中分离纯化到一个新的抗凝血因子ＡＣＦＩＩ（ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒＩＩ） 。纯化的ＡＣＦＩＩ在ＰＡＧＥ、ＳＤＳＰＡＧＥ和ＩＥＦＰＡＧＥ图谱上均呈单一区带。ＡＣＦＩＩ由两条分子量为１４．６ ｋＤ 的肽链通过二硫键连接在一起, 其等电点为７．０。ＡＣＦＩＩ具有显著的抗凝血活性, 在体外延长ＰＰＴ 时间的最终浓度为０ ．４ ｍｇ／Ｌ。ＡＣＦＩＩ不具有类凝血酶活性、磷脂酶Ａ２ 活性和纤溶活性,也没有出血活性和毒性, 是一种潜在的高效抗凝药物。     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶羟基化酶组分…

从Ｍｅｔｈ ｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌株中经ＤＮＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣｌ－６Ｂ阴离子交换层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００凝胶层析分离出纯化出甲烷加氧酶羟基酶组分,经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９０％,分子量为２４０ｋＤ,纯化们数为３．９,比活为２２５ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明,羟基化酶由三个亚基组成,亚基分子量为５６、４３、２７ｋＤ．ＩＣＰＡＥＳ测定羟基化酶的Ｆｅ     

杜仲皮中抗真菌蛋白的分离和特性研究

从杜仲（ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＯｌｉｖ）皮中分离纯化到一种新的抗真菌蛋白（ＥｕｃｏｍｍｉａＡｎｔｉｆｕｎｇａｌＰｒｏｔｅｉｎ）,简称ＥＡＦＰ。将切碎的杜仲树皮用ＮａＣｌ溶液在组织捣碎器中高速匀浆提取,经硫酸铁沉淀、ＣＭ一ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ离子交换层析和Ｂｉｏ一ｇｅｌ一ｐ一１０凝胶层析纯化。如此纯化而得的ＥＡＦＰ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶片上显示一条分子量为５．０ｋＤ的单一带。反相ＨＰＬＣ显示４样品是纯的。等电聚焦电泳测得其ｐＩ值大于１１．０。经还原和氨酰羧甲基化处理,用ＨＰＬＣ层析证明ＥＡＦＰ为单链。用酚一硫酸法未测出其含糖。ＥＡＦＰ是简单单链蛋白。氨基酸组成分析结果表明它宫含Ａｒｇ、Ｃｙｓ和Ｇｌｙ,不含Ｍｅｔ,Ｌｙｓ,Ｔｒｐ,Ｈｉｓ和Ｐｈｅ。未经热变性或ＳＤＳ处理的ＥＡＦＰ与考马氏亮蓝试剂不发生显色反应。手工Ｅｄｍａｎ降解法测得Ｎ一端３个氨基酸残基的顺序为Ｇｌｙ一Ａｓｐ一Ａｌａ。用羧肽酶Ａ和Ｂ酶解ＥＡＦＰ测得其Ｃ一末端为Ｖａｌ．０．３ｍｇ／ｍＬ蛋白明显抑制木霉、小麦赤霉菌、烟草黑茎病菌和棉花枯萎病菌菌丝的生长。蛋白在沸水中保温３０ｍｉｎ活性不变。     

番茄叶片胞外β－半乳糖苷酶的纯化和性质

健康或系统感染ＴＭＶ的番茄叶片胞外都存在高比活可溶性β－半乳糖苷酶。系统感染ＴＭＶ的番茄叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩、－２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５阳离子交换层析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５阴离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶层析纯化．获得ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的β－半乳糖苷酶。该酶的分子量为７４ｋＤ．酶蛋白带能被过碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂染成桃红色,属糖蛋白。β－半乳精苷酶无论在健康或系统感染ＴＭＶ的番茄叶中,均为主要的胞外蛋白组分之一。     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮蛇毒中纯化出两个出血毒素。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸分别占２３％和２４％。ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具     

番茄叶片胞外β—半乳糖苷酶的纯化和性质

健康或系统感染ＴＭＶ的番茄叶片胞外都存在高比活可溶性β－半乳糖苷酶。系统感染ＴＭＶ的番匣叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩－２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５阳离子交换层析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５阴离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶层析纯化,获得ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的β－半乳糖苷酶。该酶的分子量为７４ｋＤ,酶蛋白带能被过碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂染成档红色,属糖蛋白     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人血管壁细胞生长的作用

通过培养的人主动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）及脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＥＣ）,应用３Ｈ－ＴｄＲ参入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析、逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对ｈＡＳＭＣ和ｈＵＶＥＣＤＮＡ合成的作用及对血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）、ＰＤＧＦ受体、转化生长因子β（ＴＧＦ－β）、内皮素－１（ＥＴ－１）或碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达和肾素－血管紧张系统（ＲＡＳ）的影响,结果显示,ＨＳＰＧ明显抑制培养的ｈＡＳＭＣ基础的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：１０３８５±３２６３ｖｓ,２５５４１±６４２１,Ｐ＜０．０１）及外源性ＰＤＧＦ诱导的ＤＮＡ合成（ｃｐｍ值为：９８７８±１９４７ｖｓ．１３４８１±４４ｌ０,Ｐ＜０．０５）;抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－Ｂｐ和ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,提高ＰＤＧＦａ和β受体ｍＲＮＡ的表达;显著降低ｈＡＳＭＣ培养液中血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度和血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的活性,推测ＨＳＰＧ抑制ＰＤＧＦＡ链、ＴＧＦ－β及ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达,降低ＡＣＥ活性及ＡｎｇⅡ浓度是其抑制ｈＡＳＭＣ增殖的重要机     

地衣芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的纯化及其性质的研究

地衣芽孢杆菌１Ｂａｃｉｕｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＢＬ－３０６产生的胞外β－甘露聚糖酶经硫酸铵分级盐析,ＤＥＡＥ－纤维素柱层析。Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ１００柱凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱再层析分离纯化,得到ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）均一样品。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得纯化后β－甘露聚糖酶分子量为２６０００道尔顿。用凝胶等电聚焦电泳（ＰＡＧＥＩＥＦ）测得等电点ＰＩ为５．０。该酶     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的纯化和性质

Ｍｅｔｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分．经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量４２ｋＤ．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定还原酶的Ｆｅ含量为１．８３ｍｏｌＦｅ每ｍｏｌ蛋白．ＵＶ－Ｖｉｓ光谱表明还原酶除２８０ｎｍ蛋白质特征峰外在４６０ｎｍ有最大吸收峰,且Ａ２８０ｎｍ／Ａ４６０ｎｍ为２．５０,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个ＦＡＤ辅基和Ｆｅ２Ｓ２中心．在厌氧条件下,还原酶能够和ＮＡＤＨ作用,ＵＶ－Ｖｉｓ光谱分析表明还原酶４６０ｎｍ处特征吸收峰消失,说明在ＭＭＯ催化过程中还原酶接受ＮＡＤＨ的电子．ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析分离出调节蛋白Ｂ,部分纯化的调节蛋白Ｂ的分子量大约在２０ｋＤ,它能够提高ＭＭＯ比活性４０倍,ＭＭＯ还原酶和调节蛋白Ｂ单独存在时不具有ＭＭＯ     

纯化光系统Ⅱ（PSⅡ）核心天线复合物CP43和CP47的共振拉曼光谱

采用ＤＥＡＥ－ＦｒａｃｔｏｇｅｌＴＳＫ６５０Ｓ阴离子交换树脂柱层 从菠菜中分离纯化了ＰＳⅡ核心天线复合物ＣＰ４３和ＣＰ４７。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ）检测结果表明,纯化的ＣＰ４３和ＣＰ４７均只含１条蛋白带,证明样品纯度的可靠性。其常温（４６０－５００ｎｍ）较ＣＰ４３具有明显的精细结构。同时测定了它们的常温共振拉曼光谱,可以看出;类似于全反式构型的β－ｃａｒｏｔｅｎｅ分子,ＣＰ４３和ＣＰ     

从感染TMV的番茄叶纯化胞外β—N—乙酰氨基已糖苷酶

番茄系统感染ＴＭＶ（ｔｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ）诱导叶β－Ｎ－乙酰氨基已糖苷酶活性升高。番茄叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩,－２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｃＣ－２５离子交的层析,ＰＢＥ９４（ＰｏｌｙｂｕｆｆｅｒＥｘｃｈａｎｇｅｒ９４,Ｓｉｇｍａ）聚焦层析和ＳＥＰＨＡＤＥＸｇ－１５０凝胶层析纯化,获得纯化的β－Ｎ－乙酰氨基乙糖苷酶。凝胶层析测得该酶的分子量为１４５ｋＤ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ     

林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分性质的研究

以林生山黧豆为材料,利用硫酸铵分段盐析,丙酮沉淀,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ离子交换柱层析,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００凝胶过滤柱层析及ＦＰＬ－ＭｏｎｏＱ柱层析技术,以聚酰胺薄膜层析荧光定量法为酶活力检测手段,分离纯化了谷氨酰羧酶,达到电泳银染纯,纯化后的林生山黧豆谷氨酸脱羧酶活力达３７５．０９Ｕ．ｍｇ＾－１,纯化保数３８．２倍,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,其亚基分子量为７０ｋＤ,经工ＰＡＧＥ确定     

乳链菌肽的分离纯化和部分生物学性质

用乳酸链球菌ＳＭ５２６进行乳链菌肽的发酵生产,产量为４０～５０ｍｇ／Ｌ,经中空纤维超滤器超滤,非极性大孔树脂ＸＡＤ－２层析,ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０层析纯化了该肽。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表达达均一,ＲＰ－ＨＰＬＣ表明其纯度不低于９５％,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测其Ｍｒ约为３６００,用ＩＥＦ测其等电点为９．５,酸性条件下稳定且抗热,胰蛋白酶,胃蛋白酶和木瓜蛋白酶不敏感,但对α－     

栝楼种子中一种新型小分子核糖体失活蛋白——S—tric …

通过硫酸铵分级沉淀、ＣＭ－５２阳离子交换层析、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－１００凝胶过滤和ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ－Ｓ离子交换层析等步骤,从栝楼种子中分离到一种核糖体失活蛋白－－Ｓ－ｔｒｉｃｈｏｋｉｒｉｎ,经１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定分子量为８ｋＤ左右,１３．５％聚丙烯酰胺凝胶酸性电泳结果显示其等电点在ｐＨ９．５左右。通过对大鼠肝核糖体作用的研究,表明Ｓ－ｔｒｉ－ｃｈｏｋｉｒｉｎ属于ＲＮＡ Ｎ－糖苷酶催化型     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮（Ｄｉｅｎａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）蛇毒中纯化出两个出血毒素（ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２）．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸（Ａｓｘ,Ｇｌｘ）分别占２３％和２４％,ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具蛋白水解酶活性,无对ＴＡＭＥ,ＢＡＥＥ的水解活性和ＰＬＡ２酶活性．两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关．ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最适温度分别为３５℃和４０℃,最适ｐＨ为６－９,对热均不稳定,温度高于６０℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含０．５ｍｏｌ的Ｚｎ,１ｍｏｌ的Ｃａ,较多的Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ,不含Ｃｏ。     

圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性

圆弧青霉突变株ＰＧ３７发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５２００ｕ的碱性脂肪酶,纯化倍数１６．５,得率３３．２％,在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）上均呈现单一 白质条带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和凝胶过滤分别测得酶的分子量为２７．５ｋＤ和２９．ｋＤ,表明该酶以单体形式存在。Ｎ末端１０个氨基酸的序列测     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的理化性质及生物活性

采用硫酸铵分级分离,假配基亲和层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００分子筛层析等方法,从苦瓜籽中获得核糖体失活蛋白（ＲＩＰ）．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ和ＰＡＳ方法分析均表明为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带．根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０分子筛层析结果计算其相对分子质量为３．０×１０４,经ＩＥＦ－ＰＡＧＥ结果计算其ｐＩ为８．９～９．０．对无细胞系统中蛋白质生物合成抑制活性明显,其ＩＣ５０为５．３×１０－ １０ ｍ ｏｌ／Ｌ左右．体外生物活性试验结果表明其对人肝癌细胞、Ｖｅｒｏ、ＳＰ２／０、３Ｔ３、Ｋｂ、Ｎａｖａｎａ 等肿瘤细胞株均表现有不同程度的抑制作用．而对完整细胞人胚肺二倍体细胞却毒性极小．因此,上述实验结果为该ＲＩＰ的进一步深入研究和有可能开发成免疫毒素的高效弹头药物提供了一定的工作基础．     

乳链菌肽的分离纯化和部分生物学性质

用乳酸链球菌ＳＭ５２６进行乳链菌肽的发酵生产,产量为４０～５０ｍｇ／ｌ．经中空纤维超滤器超滤,非极性大孔吸附树脂ＸＡＤ－２层析,ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０层析纯化了该肽。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明达均一,ＲＰ－ＨＰＬＣ表明其纯度不低于９５％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测其Ｍｒ约为３６００,用ＩＥＦ测其等电点为９．５．酸性条件下稳定且抗热;对胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶不敏感,但对α－胰凝乳酶和蛋白酶Ｋ敏感。乳链菌肽对多种革兰氏阳性菌有强烈的抑制作用;以枯草杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,其作用方式是杀菌。     

系统感染TMV的番茄叶胞外β-1,3-葡聚糖酶

系统感染ＴＭＶ （ｔｏｂａｃｃｏ ｍ ｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ）的番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｉｌｌ．）叶胞外蛋白提取液经冰冻干燥浓缩、－ ２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５离子交换层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５凝胶层析纯化,获得ＰＡＧＥ均一的β－１,３－葡聚糖酶．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明,它包含分子量为３６ ｋＤ 和２７ ｋＤ的两个同工酶．以昆布多糖为底物,酶的最适ｐＨ 在４．８—５．２之间,在ｐＨ ４—８稳定;酶的最适温度在３０—４０℃之间,在４０℃保温１ｈ 后酶活性不变;Ｋｍ 值为９．２ ｍ ｇ／ｍ Ｌ．在系统感染ＴＭＶ 的番茄叶胞外蛋白提取液中,有分子量为２２ ｋＤ、２７ ｋＤ和３６ ｋＤ的３个β－１,３－葡聚糖酶同工酶     

甲基单胞菌Methylomonassp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的…

Ｍｅｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌ ＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分,经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明的酶由