反义寡核苷酸pH敏前体脂质体的制备及性质分析

为了提高反义寡核苷酸的稳定性和生物利用度及避免在溶酶体内降解,采用旋转蒸发-薄膜水化、超声-挤压、冻干三步法完成pH敏前体脂质体的制备,研究了体外释药规律;以反义寡核苷酸为实验对象,测定了包封率.制得的pH敏前体脂质体复水后形成的pH敏脂质体形态圆整,粒径12.3～389.9 nm范围内,平均粒径为22.7 nm;三批pH敏脂质体的平均包封率为68.3%;体外释药方程为Q=1.8382－2.5186×10^－2T (r=0.9913);结果说明制备的pH敏前体脂质体水合形成的pH敏脂质体粒度适宜,可用于反义寡核苷酸的包封.     

肝细胞靶向pH敏脂质体介导的硫代反义寡核苷酸对HCV5‘NCR基因表达的抑制作用

反义寡核苷酸是一种阴离子大分子物质,细胞生物利用度较低且易被细胞溶酶体酶降解,为了增强反义药物在病变靶细胞内的有效浓度,根据受体介导的内吞作用原理,针对肝细胞专一性表达的去唾液酸糖蛋白受体,设计及制备了一种肝靶向性脂质体,这种脂质体同时具有pH敏性.采用竟争抑制实验及鸡红细胞溶血实验分析了其肝细胞靶向性及pH敏性;应用肝靶向pH敏脂质体作为药物运载工具,介导反义寡核苷酸HCV363作用于转基因细胞HepG2.9706细胞,通过荧光素酶活性检测,观察了硫代反义寡核苷酸对HCV 5′NCR调控功能的抑制活性.结果显示,不同浓度半乳糖溶液对5%18-gal脂质体有一定的抑制作用,浓度超过20mmol/L时,达到饱和,最大抑制率为38%;溶血实验显示脂质体与红细胞膜融合作用有显著的pH值依赖性,pH＜6时,血红素释放量明显增加;肝靶向pH敏性脂质体介导的HCV363对HepG2.9706细胞中HCV 5′NCR调控基因具有显著的剂量依赖性抑制作用,浓度为1.0umol/L时,抑制率达86%.综上,所制备的脂质体具有一定的肝细胞靶向性及显著的pH敏感性,这种脂质体能够增强HCV特异性硫代反义寡核苷酸的细胞内抑制活性,这为针对肝炎病毒的反义寡核苷酸的体内活性评价提供了有用的转运体系.     

肝细胞靶向pH敏脂质体介导的硫代反义寡核苷酸对HCV5′NCR基因表达的抑制作用

反义寡核苷酸是一种阴离子大分子物质 ,细胞生物利用度较低且易被细胞溶酶体酶降解 ,为了增强反义药物在病变靶细胞内的有效浓度 ,根据受体介导的内吞作用原理 ,针对肝细胞专一性表达的去唾液酸糖蛋白受体 ,设计及制备了一种肝靶向性脂质体 ,这种脂质体同时具有pH敏性。采用竟争抑制实验及鸡红细胞溶血实验分析了其肝细胞靶向性及pH敏性 ;应用肝靶向pH敏脂质体作为药物运载工具 ,介导反义寡核苷酸HCV3 63作用于转基因细胞HepG2 .970 6细胞 ,通过荧光素酶活性检测 ,观察了硫代反义寡核苷酸对HCV 5′NCR调控功能的抑制活性。结果显示 ,不同浓度半乳糖溶液对 5 % 18 gal脂质体有一定的抑制作用 ,浓度超过 2 0mmol L时 ,达到饱和 ,最大抑制率为 3 8% ;溶血实验显示脂质体与红细胞膜融合作用有显著的pH值依赖性 ,pH <6时 ,血红素释放量明显增加 ;肝靶向pH敏性脂质体介导的HCV3 63对HepG2 .970 6细胞中HCV 5′NCR调控基因具有显著的剂量依赖性抑制作用 ,浓度为 1 0 μmol L时 ,抑制率达 86%。综上 ,所制备的脂质体具有一定的肝细胞靶向性及显著的p…     

具靶向性的转铁蛋白—脂质体的制备

具靶向性的转铁蛋白──脂质体的制备杨静平,王瓞,林其谁（中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,２０００３１）关键词脂质体;人转铁蛋白;靶向性;癌细胞;天花粉蛋白利用正常细胞和癌细胞表面受体或抗原物质的差异,用相应配体修饰脂质体表面,使...     

转铁蛋白修饰脂质体的制备及其肝癌靶向性研究

目的：肿瘤的靶向治疗是当前研究的热点,肝肿瘤细胞表面有大量的转铁蛋白受体表达,而正常组织较少,因此本研究制备转铁蛋白（TF）修饰的脂质体（TFLPs）,并对其肝肿瘤靶向性进行研究。方法：采用薄膜分散法制备普通脂质体,考察其形态,粒径,电位。通过体外血清稳定性模拟脂质体进入体内后的稳定性。通过HepG2肿瘤细胞对TFLPs的摄取实验考查脂质体与肝癌细胞的亲和力。构建荷瘤裸鼠模型,考查TFLPs在荷瘤裸鼠体内的分布。结果：所制备的TFLPs平均粒径为108．8±9．5nm,Zeta电位为．1．80±0．73mV。学期稳定性试验结果显示,TFLPs在24h内具有良好的血清稳定性。体外细胞摄取实验表明,HepG2细胞对TFLPs的摄取效率是普通长循环脂质体（LPs）的3．4倍。荷瘤裸鼠肝组织和肿瘤组织切片结果显示,TFLPs比LPs具有更好的肿瘤靶向性。结论：该脂质体制备方法简单,与LPs相比,经转铁蛋白修饰可显著提高肿瘤细胞对脂质体的摄取,TFLPs是一种潜在高效的肝癌靶向给药系统。     

亚油酸铂靶向脂质体抗肿瘤特性的研究

用超声波制备了内部包裹亚油酸铂,表面有抗人乳腺癌单克隆抗体ＭｃＡｂＧｐ－１Ｄ８的亚油酸铂靶向脂质体和亚油酸铂非靶向脂质体,研究了这些脂质体绎腹部注射到荷瘤裸鼠之后的组织分布和抑瘤效果,实验结果表明,靶向脂质体亚油酸铂在肿瘤组织的含量明显高于游离亚油酸铂组;在肾,肝,肺,脾,心脏等器官中,前者的含量比后者有所降低,分别在接种癌细胞后６天,１２天和２４天,按６ｍｇ／ｋｇ的剂量分别注射ＰＢＳ,游离亚油酸     

pH敏脂质体对反义寡核苷酸抗流感病毒活性的影响

为了研究具有临床应用前景的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 脂质体转运系统,以临床药用大豆磷脂为主要原料制备了ｐ Ｈ 敏脂质体,并测定了脂质体体外转染活性、ｐ Ｈ 敏特性、细胞毒性和对 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 抗流感病毒活性的影响 结果发现,批号为 ９８０５１９０３,９８０５１１０２ 和 ９８０５１２０２ 的脂质体具有较高转染活性,但只有ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ 转染活性的 １／５０～１／１００当质粒／脂质体（ Ｗ ／ Ｗ ）为 １∶４～１∶８,转染时间为 ３～５ ｈ,质粒量为 ０５ μｇ,转染后 ２４～４８ ｈ 内检测时转染活性最高 脂质体 ９８０５１２０２ 表现明显 ｐ Ｈ值依赖溶解红细胞膜特性,而脂质体 ９８０５１１０２ 和 ９８０５１９０３ 的 ｐ Ｈ 敏特性不明显 脂质体细胞毒性明显降低,如 ９８０５１９０３、９８０５１１０２ 和 ９８０５１２０２ 的毒性分别是 ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ 毒性的 １／１６、１／８ 和 １／４ｐ Ｈ 敏脂质体 ９８０５１２０２ 具有促进 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 抗流感病毒作用,当 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 浓度为 ０２ μｍ ｏｌ／ Ｌ 时,ｐ Ｈ 敏脂质体 ９８０５１２０２ 使其抗病毒活性提高 ５ 倍,但 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 浓度较高时ｐ Ｈ 敏脂质体对 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ抗     

肝细胞靶向性脂质体介导的硫代磷酸反义寡核苷酸在体内外抑制乙型肝炎病毒的研究

在体外细胞培养系统和裸鼠动物体内,观察了人肝细胞靶向性脂质体介导的部分硫代型和全部硫代型反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒的抑制作用。结果显示,针对HBVe基因翻译起始区的18聚体的硫代磷酸反义寡核苷酸在体内、外对HBV DNA、HBV mRNA及HBsAg、HBeAg均有不同程度的抑制作用。研究说明,反义寡核苷酸是抗HBV有效的基因治疗候选药物。     

曲妥珠单抗修饰的阿霉素免疫脂质体的制备及体外性质研究

目的:制备表面键合曲妥珠单抗(trastuzumab,TMAB)的阿霉素免疫脂质(Doxorubicin-loadedimmunoliposome,DOX-IML),并对其体外性质进行研究。方法:将磷脂酰胆碱、胆固醇、阿霉素、DSPE-MPEG2000以一定比例混合,采用薄膜超声分散法制备阿霉素脂质体,将聚乙二醇衍生物(1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[succinimidyl(polyethylene glycol)-3400]、DSPE-PEG3400-NHS)连接到TMAB;再与阿霉素脂质体连接得到DOX-IML。研究不同浓度的TMAB对DOX-IML入胞能力及细胞毒性的影响;测定免疫脂质体的包封率、载药率、粒径、电荷及稳定性等性质;动态透析法模拟体外释药特性,激光共聚焦观察免疫脂质体对AU565细胞抗体介导的入胞作用;MTT法研究DOX-IML抑制肿瘤细胞的生长。结果:成功制备了表面键合TMAB的阿霉素免疫脂质体,配体载入率分别是53%、75.5%、84%;每毫克DOX-IML中抗体的含量分别是37、83、108μg·mg-1;阿霉素的包封率为76.85%、载药量为8.03%;粒径131.8nm;表面电荷-27mV。抗体含量83μg·mg-1的DOX-IML组的细胞存活率最低,细胞内荧光强度最高,且该免疫脂质体稳定性良好,具有一定缓释作用。DOX-IML具有较强的特异性靶向作用,其入胞能力和细胞毒性均高于阿霉素脂质体。结论:DOX-IML具有较强的特异性靶向作用,其入胞能力和细胞毒性均高于阿霉素脂质体,抗体含量适中时其入胞能力和细胞毒性最强。     

半乳糖配体介导大鼠白介素10基因在大鼠肝脏内的靶向表达

目的 探讨大鼠白介素10（rIL-10）基因是否可通过半乳糖配体介导的脂质体转染法在大鼠肝脏内靶向表达。方法将已构建好的rIL-10基因真核表达质粒与半乳糖配体转染试剂按jetPEI．Gal／DNA（N／P=10）比例混合,通过尾静脉注射转移至大鼠体内。RT—PCR法和ELISA法检测rIL-10基因转移至体内0h、24h、7d和16d后大鼠肝、肾、脾和肺组织及血清中rIL-10的表达情况。结果rIL-10基因转移前大鼠肝、肾、脾和肺组织末扩增出明显rIL-10mRNA表达,转移7d后rIL-10表达主要分布在肝组织。肝组织中rIL-10mRNA表达在基因转移24h和7d时显著升高。血清中的rIL-10浓度在转移后24h和7d浓度分别为（107．92±12．26）pg／ml和（33．2±13．15）pg／ml。结论rIL-10基因通过半乳糖配体介导的脂质体转染法可有效的转移至大鼠体内,并可在肝脏靶向表达一周左右时间。     

RNA—RNA原位杂交实验条件探讨

将Vigilin和qroal(Ⅰ)cDNA亚克隆到pGEM3Z和pGEM4Z载体,体外转录合成35s标记的cRNA探针。经RNA凝胶电泳,Southern Northern,杂交检查探针长度,杂交特性和特异性,通过系列实验探讨了RNA-RNA原位杂交实验中固定、杂交前处理、杂交温度,探针量、探针长度,洗脱严格性和RNA酶处理等对杂交结果的影响,建立了简化的RNA-RNA原位杂交方法。     

PNA technology

Peptide nucleic acids (PNA) are deoxyribonucleic acid (DNA) mimics with a pseudopeptide backbone. PNA is an extremely good structural mimic of DNA (or of ribonucleic acid [RNA]), and PNA oligomers are able to form very stable duplex structures with Watson-Crick complementary DNA and RNA (or PNA) oligomers, and they can also bind to targets in duplex DNA by helix invasion. Therefore, these molecules are of interest in many areas of chemistry, biology, and medicine, including drug discovery, genetic diagnostics, molecular recognition, and the origin of life. Recent progress in studies of PNA properties and applications is reviewed.     

基因治疗研究中脂质体介导的基因转移技术

对于脂质体的深入研究特别是阳离子脂质体的研制使其逐步成为重要的基因转移载体之一,并且初步应用于基因治疗研究,同时多种靶向脂质体的研制也为体内靶向基因转移和表达奠定了基础。本文就脂质体的结构、功能、在基因治疗研究中的应用以及各种靶向脂质体的研制进行了介绍。     

肽核酸的分子生物学效应及应用

肽核酸(PNA)是一类以酰胺键连接骨架替代核酸中核糖磷酸二酯键骨架构成的核酸类似物,其中N-乙基甘氨酸骨架PNA与核酸链以Waston-Crick碱基配对形式稳定互补结合,具有广泛生物学效应,包括调节DNA识别蛋白质的功能以及调节转录和翻译.在分子生物学研究中PNA作为新的工具在多方面得到应用.除它的DNA(RNA)结合特性外PNA在生物稳定性、细胞摄取、结构修饰多方面的研究进展显示出作为基因调节药物具有良好前景.     

核酸自组装纳米递送载体的研究进展

随着核酸纳米技术的飞速发展,核酸自组装纳米载体已成为药物递送领域的研究热点。针对核酸自组装纳米载体在药物递送中的应用进展进行了系统综述,讨论了不同的核酸自组装策略,阐述了多种靶向递送和药物控制释放方法,同时,总结了核酸自组装纳米递送载体在蛋白质药物、核酸药物、小分子药物和纳米药物递送中的应用,并针对该领域的挑战和未来发展趋势进行了总结和展望,以期为药物递送领域和新型药物系统研究提供参考。     

基于核酸自组装纳米结构的siRNA药物递送研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)作为转录后调节机制,可靶向mRNA进行剪切降解从而发挥基因沉默效应.siRNA (small interference RNA)因其高效性和特异性而被广泛应用于药物研究中.目前,研究者们已开发了多种阳离子载体用于siRNA递送.但由于siRNA双链结构具有相对较强的刚性结构,且阴离子电荷密度较低,无法与阳离子载体形成稳定、致密的复合物,使得siRNA的应用仍面临诸多挑战,如细胞摄取率低、靶向特异性差、递送过程不稳定、潜在的细胞毒性以及易诱发免疫反应等.近年来,核酸自组装纳米结构由于其结构灵活且负电荷密度较高而受到广泛关注,有望实现siRNA药物的高效递送和基因沉默.本文综述了近年来基于核酸自组装纳米结构的siRNA递送的研究进展及其应用.     

哺乳动物克隆的研究进展与应用前景

显微注射技术本身固有的缺点在很大程度上限制了转基因动物的研究及应用。近年来,体细胞基因打靶和体细胞克隆的最新研究进展表明,这两种技术相结合将成为制备大型转基因动物的有效途径。