适用于分析细胞内蛋白质组分研究的两向电泳法

哺乳动物体细胞内含有上万种不同蛋白质,各组分在细胞内的丰度因组织和细胞类型而异,也会在转化、分化和激素反应过程中发生变化。每个细胞内各种蛋白质含量的大致范围是10~3—10~9个分子。到目前为止细胞内所含蛋白质已被仔细研究过的还不足1000种,多数属     

“橄榄球迷的喜讯”

大肠杆菌伴侣蛋白GroEL和GroES已被广泛研究其目的在于了解这些蛋白如何行使蛋白质折叠功能,本文为此提出一种模式,即圆柱状的GroEL蛋白质通过其上的两个凹槽之一与底物结合．     

蛋白质药物长效化技术的现状和进展

综述了提高蛋白质药物半衰期技术的最新进展。由于蛋白质药物在体内会被快速清除,所以患者必须频繁用药才能保持药物浓度,限制了其治疗效果。因此,延长蛋白质药物体内的半衰期并阻止其被快速清除已成为近年来的研究热点。已建立的提高蛋白质药物半衰期的技术包括化学修饰、蛋白质融合、微囊化、糖基化、抗蛋白酶突变体等,许多长效蛋白质药物已经研制成功并应用于临床治疗。阐述了这些技术的原理并通过实例比较和评价了各种技术的优点和适用范围。     

蛋白质组研究中的分析技术

蛋白质组分析技术已在生物科学各领域被广泛应用,蛋白质组的研究已成为目前国际上的前沿和研究热点。概述了蛋白质组研究中的常用分析技术,包括样品制备、双向凝胶电泳、凝胶图像分析、质谱鉴定及数据库检索等。直观地列出了蛋白质组研究的技术体系流程图。各种分析技术的连用和分析过程的自动化将是蛋白质组研究技术的发展方向。     

小蛋白质富集法鉴定酿酒酵母“漏检蛋白”

小蛋白质 (Small proteins,SPs) 是由小开放阅读框 (Short open reading frames,sORFs) 编码长度小于100个氨基酸的多肽。研究发现小蛋白质参与了基因表达调控、细胞信号转导和代谢等重要生物学过程。然而,生命体中大多数的已注释小蛋白质尚缺少蛋白水平存在的实验证据,被称为漏检蛋白 (Missing proteins,MPs)。小蛋白质的高效鉴定是其功能研究的前提,也有助于挖掘“漏检蛋白”。文中采用小蛋白质富集策略鉴定到72个酵母小蛋白质,验证9个“漏检蛋白”,发现低分子量、高疏水性、膜结合、弱密码子使用偏性及不稳定性是蛋白漏检的主要原因,对进一步的技术优化具有指导意义。     

微管解聚剂和光合作用抑制型除草剂诱导的黑麦和玉米中蛋白质组分变化的比较研究

研究了黑麦、玉米在经甲基胺草膦和Atrazine两种除草剂处理后叶绿素含量、叶绿体和根尖分生组织内的蛋白质组份变化,实验结果表明,0.1 mg·L^-1的Atrazine可使黑麦中的叶绿素含量下降（分别从对照的1.72±0.034 mg·g^-1 FW下降到1.62±0.05 mg·g^-1 FW、1.25±0.015 mg·g^-1 FW）。2种除草剂均可使黑麦、玉米中的蛋白质组份产生改变,如当分别用0.1 mg·L^-1的Atrazine处理时,黑麦分生组织中,有4个蛋白质斑点,斑点7、斑点18~20被诱导产生,12个蛋白质斑点,斑点6、斑点8~17、斑点21消失。玉米分生组织中,有4个蛋白质斑点,斑点5、斑点14~16被诱导产生,4个蛋白质斑点,斑点17~20消失。黑麦叶绿体中,有两个蛋白质斑点被诱导产生,13个蛋白质斑点,斑点1~13消失,但Atrazine处理不引起玉米叶绿素含量和叶绿体蛋白质组份的变化。4 mg·L^-1 APM可引起黑麦和玉米分生组织蛋白质组份变化,在黑麦中,1个蛋白质斑点被诱导产生,4个蛋白质斑点,斑点2~5消失。玉米分生组织中,15个蛋白质斑点,斑点4~5、斑点7~16、斑点21~23被诱导产生,4个蛋白质斑点,斑点1~3、斑点6消失。APM均不能引起2种作物中叶绿素含量和叶绿体蛋白质组份的变化。     

谈谈在我国开展蛋白质工程研究的一些看法

蛋白质工程已日益受到科学家和舆论的重视,关于它产生的历史和学科背景以及成就和展望,本刊已有另文介绍。本文拟就当前在我国开展蛋白质工程研究谈谈个人的浅见。 1.蛋白质化学是蛋白质工程的基础学科:蛋白质研究经过了二十多年的蓬勃发展,人们发现了数千种不同功能和来源的蛋白质,其中有上千种的氨基酸排列顺序已被测定,上百种已获得高分辨率分子结构的解析。在这些成就面前,蛋白质化学家感到除累     

应用二维电泳和质谱技术初步研究NAG7基因的功能

为了进一步研究鼻咽癌相关基因NAG7的功能,NAG7基因编码框的cDNA片段被亚克隆至pcDNA3.1( )的表达载体,通过脂质体转染入鼻咽癌细胞系HNE1。抽提HNE1细胞和已转染了NAG7基因的HNE1细胞总蛋白质,用二维凝胶电泳分离蛋白质,获得二维凝胶图谱,PDQuest软件包分析后,确立表达上调的蛋白质斑点进行质谱分析,得到的肽质指纹经蛋白质数据库分析鉴定蛋白质。共分析了12个蛋白质点,其中3个未有质谱结果,已鉴定的9个蛋白质包括生长捕获特异蛋白、DNA结合蛋白、c-myc启动子结合蛋白及胱冬肽酶（caspase)6等蛋白质。通过对这些蛋白质性质和功能的讨论,发现它们参与了细胞周期调控、转录调节及细胞凋亡等重要事件。因此,VAG7很可能是通过介导上述蛋白质的表达上调而发挥作用。     

蛋白质基因组学的建立及其在转化医学中的应用

蛋白质基因组学是蛋白质组学和基因组学研究的交叉领域,能够对疾病模型提供基因和蛋白质水平的双重验证。近年来,蛋白质基因组学已在病原微生物定性、疾病生物标志物探索、肿瘤发生发展机制揭示、神经退行性疾病发生机制探究以及内毒素易感选择性分析等多个医学研究领域得到应用并快速发展。随着医学研究的深入,以蛋白质基因组学为代表的多组学联合手段还将会被应用到医学研究的更多方面。本文系统介绍了蛋白质基因组学的现有技术路线,并展望其研究优势和应用价值,综述了当前蛋白质基因组学发展最为迅速的医学研究应用领域进展,进一步阐述了蛋白质基因组学在医学应用领域未来可能的发展方向。     

温度影响蛋白质结晶的研究现状

温度控制作为调控蛋白质结晶过程的手段,在结晶实验中被广泛采用。热历史效应作为蛋白质结晶实验中新的影响因素,已被越来越多的科学家所重视。控制温度可以改变蛋白质的溶解度,进一步改变溶液的过饱和度,从而影响结晶过程。我们简要总结了温度对蛋白质结晶的影响及应用温度技术控制蛋白质晶体生长的各种技术,为蛋白质结晶工作提供理论和实验依据。     

蛋白质一级结构的“远缘”比较

由于核苷酸顺序测定方法的突破,致使蛋白质(尤其是分子量大、低含量的蛋白质)的一级结构测定大为简便,越来越多的蛋白质的一级结构已被测定。与此同时,电子计算机技术发展迅速,并广泛地应用于生物科学。这两者的结合,开拓了蛋白质一级结构比较研究的领域,在一些尚未想到会有关系的蛋白质一级结构之间也发现有同源性。这种比较研究可称为“远缘”比较,其结果是建立了蛋白质一级结构的“家谱”。本文例举七个类型蛋白质一级结构的“远缘”比较,并对“远缘”比较给予蛋白质结构和功能关系,分子进化的研究提供的启迪作一概要的讨论。     

小肽在猪营养中的研究

蛋白质在消化道中的消化终产物往往大部分是小肽而非游离氨基酸,小肽能完整地被吸收并以二、三肽形式进入血液循环,小肽在蛋白质营养中有着重要的作用。动物为了达到最佳生产性能,必须需要一定数量的小肽,作者就目前国内、外对小肽在猪营养中的研究及应用现状作一综述。随着蛋白质和氨基酸营养研究的深入,人们已逐渐认识到肽营养的重要性。Aga r(1953)观察到,肠道能够完整转运双甘肽。其后Naey(1959)和Smith(1960)首先提出肽可被完全转运的确切证据。最简单的肽是由2个氨基酸组成的二肽,其中含有1个肽键。含有3、4、5个等氨基酸的肽分别被称为三、四、五肽等。由2--10个氨基酸通过     

细胞核的功能

真核细胞的显著特点之一是具有膜包裹着的细胞核,其主要功能是将基因的转录和信使核糖核酸指导合成蛋白质这2个过程在空间上分隔开。最初为蛋白质编码的RNA序列可能是被不为蛋白质编码的RNA序列所隔断的,这些非编码区后来成为DNA分子中基因里的内含子。原核细胞为了节省资源,已基本清除了基因中的内含子。而真核细胞则利用内含子,用同一个基因合成多种蛋白质,这就需要细胞核阻止含有内含子的m RNA与合成蛋白质的核糖体接触。     

生物素酰化蛋白质分子量标准品

生物素酰化蛋白质分子量标准品ＳｈａｎｎｏｎＭ．Ｂｅａｔｔｙ著／李络红译／申宗侯校蛋白质印迹于硝酸纤维素膜已被广泛用于探测感兴趣的异质混合蛋白质,用聚丙烯酰凝胶电泳分离这些蛋白质所测定的一个参数就是分子量。预先染色的分子量标准品对于蛋白质电泳分离和转移...     

多肽噬菌体展示

噬菌体展示技术已被广泛地应用于生物学研究的各个方面.利用它可融合表达多肽、蛋白质结构域和蛋白质.尤其是多肽噬菌体展示,已被作为一种便利的研究工具去发现和研究那些与受体、酶、凝集素、抗体、核酸以及其他生物分子亲和的多肽配基和酶的底物专一性,该技术在药物的发现,疫苗的设计等医学领域也有着潜在的应用价值.     

蛋白质构象的可变性及其在胰岛素结构中的反映

我们对蛋白质三维结构的认识,主要来源于对蛋白质晶体的X射线衍射分析。应用该方法已测定了一百多个蛋白质分子的结构。这些结构分析表明,蛋白质分子具有一个特定的空间结构,并且是相当稳定的致密结构。蛋白质多肽链的卷曲方式,主要取决于非共价力。除了少数的二硫键外,蛋白质结构中有大量的次级键。水溶性蛋白质结构内部由空间上契合得很好的疏水氨基酸侧链组成,带电或极性侧链,除了为行使特殊的功能而藏于凹窝或沟槽的深处,一般都分布在分子的表面。由较长肽链组成的结构,常常可以被划分为相对独立的较稳定的结构域;而含有多条肽链的蛋白质,通常形     

5S核糖体RNA的结构与功能

<正> 核糖体是细胞内蛋白质合成的场所。它是一个巨大的核糖核蛋白颗粒,由大小两个亚基构成。在真核生物中,核糖体的大亚基是60S亚基,由5S,5.8S,28S RNA和约45种蛋白质组成;在原核生物中是50S亚基,由5S,23S RNA和约34种蛋白质组成。5S rRNA作为核糖体大亚基的组份之一,已在真核生物,原核生物,古细菌,植物的线粒体和叶绿体中被发现,     

类泛素修饰蛋白质ISG15及其修饰酶系的功能

受干扰素诱导表达的干扰素刺激基因15编码蛋白质(ISG15)是第1个被鉴定的类泛素修饰蛋白质.目前已在病毒感染细胞和肿瘤细胞中发现了多种ISG15的作用靶蛋白,提示ISG15可能在免疫调节和肿瘤发生等方面发挥重要作用.本文介绍ISG15的结构与生化特点,探讨ISG15在相关酶系作用下修饰目标蛋白质的机制,总结ISG15及其修饰酶系的抗病毒和抗肿瘤作用及其相关机制.     

线粒体蛋白质组研究的进展

应用蛋白质组技术已对正常人胎盘和大鼠肝线粒体蛋白质进行分离与鉴定,补充了线粒体蛋白质组数据库,并且通过比较蛋白质组学研究技术寻找病理条件下线粒体差异表达的蛋白质,为疾病的诊断和治疗提供作用靶标。随着蛋白质组技术的发展和完善,一些新方法也被应用于线粒体蛋白质的研究,推动了线粒体研究的发展。线粒体蛋白质组研究虽然已取得了一些成果,但线粒体蛋白质组数据库中的数据仍较匮乏,并且还有一些问题亟待解决和改善。     

酵母三杂交系统的应用研究进展

1996年,酵母三杂交技术被研究应用于筛选RNA结合蛋白.本介绍了酵母三杂交系统的原理、应用、前景和存在的不足及局限,并分析其原因,总结了在过去8年中利用此方法所取得的成就.在酵母双杂交基础上发展起来的酵母三杂交系统,其应用范围已扩大到蛋白质-蛋白质、蛋白质-RNA、蛋白质-小分子药物间的相互作用等更加广泛的研究领域.