抗菌肽CM4对酿酒酵母原生质体再生抑制作用的研究

抗菌肽CM4能抑制酿酒酵母原生质体的再生,随着加入抗菌肽浓度的增大,原生质体的再生率下降。用荧光素FTTC标记的抗菌肽处理原生质体,激光共聚焦扫描电镜观察,抗菌肽分子覆盖于膜,破坏了原生质体的膜结构,改变了原生质体的膜渗透性。最终原生质体无法恢复细胞壁而死亡。     

卡那霉菌原生质体的分离和再生

本文报道了卡那霉菌原生质体的分离和再生的条件。实验证明用玻璃纸平板培养法,培养卡那霉菌菌丝体可以代替常规的摇瓶培养法,而且操作简单,培养时间短。在培养菌丝体的琼脂培养基中加入甘氨酸后,对菌丝体的生长具有抑制作用,而这种菌丝体对溶菌酶的敏感性与不加甘氨酸培养基中长成的菌丝体对溶菌酶的敏感性基本相同。单独使用溶菌酶就可以分离原生质体,不用再加裂解酶。用蒸馏水处理原生质体,不能裂解原生质膜;0.1％的SDS能完全裂解原生质膜,而且能保留完整的菌丝细胞,从而可以准确计算出原生质体悬浮液中残存菌丝细胞数。原生质体的再生和生长,受再生培养基成份的影响,非高渗性的卡那霉菌产孢子培养基,可用作再生培养基,且能得到较高的再生频率,同时再生菌落的生长也较旺盛。原生质体在再生过程中,和分生孢子一样首先萌发芽管,未发现有如Okanishi所述的扩张现象。卡那霉菌原生质体的再生能力在4℃冰箱中能保存24小时。     

植物细胞壁的荧光观察

细胞壁是植物细胞的重要组分之一,它不仅能维持一定的细胞形状,支撑植物体,而且起减少蒸腾防止机械伤害的作用。但是细胞壁对研究原生质膜和原生质体融合却带来了困难。酶法脱壁的成功为大规模地进行上述研究创造了有利的条件。如所周知脱壁的程度影响原生质体的质量,此外细胞壁的再生往往是原生质体分裂的前题。因此检查脱壁是否完全和细胞壁的再生情况甚为必     

微生物原生质体技术

从影响原生质体制备、再生的因素、原生质体融合、原生质体诱为、原生质体再生育种、原生质体转化和原生质体固定化等几个方面,较为全面地介绍了目前原生质体技术的发展现状,对相关机制和技术环节作了简要概述。     

关于植物原生质体小分子物质吸收的一些问题

自从Cocking在1960年用酶法在蕃茄根尖制得原质生体后,原生质体就被广泛地用于植物细胞培养,细胞遗传、细胞壁再生、细胞代谢生理等方面的研究,近年来有关原生质体跨膜物质运输的工作也逐渐开展起来。     

果香地霉原生质体的释放与再生

本文报道了果香地霉(Geotrichum suaveolens)原生质体释放与再生方法和结果,讨论了影响原生质体释放和再生的几个重要因子用溶壁酶(Lywallzyme)20—25mg/ml处理6—8小时,可获得较高的原生质体得率(5.6—5.9×10~6个/ml),0.8M MgSO_4是理想的稳定剂。对再生过程观察表明,再生具有三种模式,即直接出芽,间接出芽和链式增殖。不同碳源和稳定剂对再生率以及再生模式都有影响。在液体再生培养基中,用纤维二糖作碳源,再生率可达76.3%,在RSDA—甘露醇固体再生培养基中,再生率为8.7%。实验发现,原生质体再生可能存在“邻近效应”,即当一个原生质体再生时,它可活化邻近的原生质体,促其再生,使再生率提高,甚至这种作用还可能影响到再生模式。     

菊科植物原生质体研究进展

介绍了目前菊科植物原生质体研究进展,重点对菊科植物原生质体分离、培养、影响原生质体再生的因素、原生质体再生植株的变异、原生质体的应用等方面的研究工作进行了总结,提出了存在的问题和今后的工作重点。     

基因组对芸苔属作物原生质体培养及植株再生的影响

本文以包心菜、芜菁油菜、浙油６０１的无菌苗叶肉原生质体为材料,经不同液体培养基浅层培养,细胞分裂并形成愈伤组织。愈伤组织经增殖后,转到分化培养基上诱导分化,均获得了再生植株。本文着重研究了植物基因组对原生质体分裂频率及植株再生的影响。研究结果表明：（１）植物基因组对原生质体分裂频率的影响随原生质体培养基的不同而异;（２）植物基因组对原生质体再生植株影响显著,芜菁油菜的Ａ基因组不利于原生质体再生植株     

多杀菌素生产菌原生质体的制备条件及其再生菌株生理特性

为了改良多杀菌素生产菌种,提高多杀菌素产量,研究了甘氨酸添加浓度、溶菌酶作用时间、温度和浓度对多杀菌素生产菌刺糖多胞菌Saccharopolyspora spinosaSP06081菌株原生质体制备和再生的影响,并考察了不同再生培养基和渗透压稳定剂对其再生的影响,确定了该菌株原生质体制备和再生的最佳条件。同时,对原生质体再生菌株的形态与多杀菌素产量变化进行了比较研究。结果表明:菌体在添加0.2%的甘氨酸的TSB培养基中培养48h收集,0.1mg/mL溶菌酶,28oC作用20min制备原生质体,将原生质体涂布于以蔗糖为渗透压稳定剂的R2YE培养基中,原生质体再生数目最多,达108个/mL以上;原生质体再生菌株在形态和抗生素产量上产生分化,29.3%的再生菌株形态上保持与亲本菌株一致,具有菌丝松散,断裂分枝多的特点,其中53.2%的再生菌株多杀菌素产量变异向正方向移动,最高产量达到582.0mg/L,比亲本菌株提高85.6%。原生质体再生菌株的形态分化与多杀菌素产量具有重要相关性。     

地衣芽孢杆菌原生质体最佳形成和再生条件的研究

近年来,微生物原生质体融合及诱变受到广泛重视,实验方法日趋完善,实践证明它是一种有效的育种方法。在微生物原生质体制备和再生过程中,各种微生物所需的最佳条件差别很大。我们研究厂地衣芽孢杆菌53-A,菌株原生质体形成和再生的各种因素及最佳条件,并用光学显微镜和电镜观察了原生质体形成、再生和原生质体的聚集现象,现将结果报道如下。     

产琥珀酸放线杆菌的原生质体制备与再生

基因组重组技术是一项重要的菌种改造技术,原生质体制备和再生是进行基因组重组的前提和基础。目前少有关于产琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)CGMCC2650原生质体研究的报道。为了优化该菌的原生质体制备和再生条件,及利用基因组重组技术构建优良菌种提供参考,研究了甘氨酸预处理,菌龄,酶浓度,作用时间,温度对产琥珀酸放线杆菌原生质体制备和再生的影响,并考察了不同渗透压稳定剂对其再生的影响。结果表明,菌体在添加了0.6mg/ml甘氨酸的TSB培养基中培养5h后收集,用SMM稀释到OD660=1.0,用0.025mg/ml溶菌酶在37℃下酶解45min制备原生质体,将原生质体涂布于含0.3mol/L蔗糖的再生培养基中,再生率最大,达到40.9%。确定了产琥珀酸放线杆菌原生质体制备和再生的最佳条件,所用的原生质体制备的方法对琥珀酸的产生没有影响,这为进一步开展该菌的原生质体诱变及基因组重组等研究奠定了基础。     

香菇菌丝原生质体分离与再生条件的研究

在25-26℃下培养5-6天的菌丝体,以0.8mol/L甘露醇作为渗透压稳定剂,用1.5%溶璧酶液酶解1.5-2小时,所得原生质体的产量较高,最高可达4×10⁷个/ml以上。上述条件分离的原生质体,再生率也较高。原生质体再生的温度以26℃为最佳。不同的再生培养基明显地影响原生质体的再生率。在完全培养基中加入麸皮浸出液可显著提高香菇菌丝原生质体的再生率,其中,以添加5% 麸皮浸出液的效果最好。显微观察结果表明,在液体培养集中,香菇菌丝原生质体的再生是不同步的。一般要培养20小时以后才能见到出芽,而且原生质体的再生形式也是多种所样的。     

提高枯草杆菌原生质体再生率的进一步研究

前言提高细菌原生质体再生率是研究细菌细胞融合的前提,目前国内报导的原生质体再生率均不高,且不稳定。为了更有效地获得高产融合株,必须探求再生的最适条件,前报已较系统地研究了有关诸因素对供试菌株原生质体化及其活性的影响,以及提高再生率的措施,使再生率达44.47％;但仍有大幅度提高的必要。本文旨在进一步深入研究提高原生质体再生率的改良措施。     

谷氨酸产生菌原生质体的制备及其形成模式

比较了谷氨酸生产菌棒杆菌T原生质体形成的条件,以及对再生率的影响。采用溶菌酶一甘氨酸一青霉素G处理其细胞的原生质体形成率千兀再生率最佳。酶处理10小时,原生质体形成率接近1OO％,再生率可达10％以上。根据显微摄影观察,棒杆菌形成原生质体有类似于“海鸥”形的独特形成模式。     

食用菌原生质体巨大化及其再生的初步观察

通过观察几种食用菌原生质体的巨大化过程,发现含有细胞壁裂解酶的高渗营养液是比较理想的巨大化反应液;巨大化反应不同时间的原生质体再生率有“高→低→高”的起伏变化;巨大化后原生质体再生率普遍提高。最后测定了巨大化时间、渗透压稳定剂、培养基及其碳源等对巨大化原生质体再生率的影响。     

菌根真菌——赭丝膜伞原生质体分离与再生研究

振荡培养48h的赭丝膜伞（Cortinariusrussus）菌丝体经0．5％流基乙醇预处理后,离心法收集,以06mol／LMgSO_4作高渗稳定剂,PH5．8,采用纤维素酶、离析酶和浸解酶联合处理,在三个温度（24℃、31℃、35℃）下经11～16h反应均可获得较高的原生质体产量,最高产量达8×10~7个／g鲜重菌丝。分离得到的原生质体表现了快速的再生能力,在MMNC固体培养基上可达到20％以上的再生频率。文章较详细地研究了酶系组成、酶解温度和时间、菌丝菌龄等多个因素对C。russus原生质体分离及再生的影响。     

克鲁维酵母高渗培养与原生质体制备与再生

研究了高渗预培养条件对克鲁维酵母Ｙ０３４原生质体形成与再生的影响。结果表明,同等条件下,经高渗预培养的原生质体再生率为常规培养的１．７倍,为改造菌株遗传特性而制备高活性原生质体探索了新的途径。     

金针菇原生质体分离制备、融合、再生及融合子检出

探讨了利用金针菇菌丝体分离、制备原生质体;不同的酶浓度和酶解时间对原生质体得率的影响;以及八种再生培养基的选择性试验.建立了金针菇原生质体的分离、制备、融合及再生的试验体系.试验共获得209株再生菌株,通过核染色检测,共获得37株具有双核和锁状联合的再生株.     

原生质体技术选育桃红侧耳优良菌株

研究了桃红侧耳原生质体的制备及再生,并进行了原生质体再生株的筛选工作。实验表明,培养5天的桃红侧耳菌丝体30℃酶解3h原生质体数目可达8.4×107/mL。原生质体再生率在1号再生培养基上最高,为6.9%。再生菌株经筛选后,得到长速显著快于出发菌株的优良菌株H120和H247。经F3代栽培实验证明:H120和H247的生物学效率明显优于出发菌株,且差异极显著。酯酶同工酶分析表明:H120和H247酶谱均发生了变化。     

灵芝原生质体分离与再生研究

首次详细、系统地探讨了灵芝原生质体分离与再生的条件,结果表明：用0．6mol／L甘露醇配制成含2％溶壁酶和0．5％崩溃酶的复合酶,在30℃,pH为6.0时酶解3小时,可得到最高的原生质体得率。但考虑到原生质体的再生,以酶解2．5小时为最适。酶解2．5小时所得原生质体经精制,用纤维二糖培养基（以0.6mol／L甘露醇为渗透压稳定剂）进行双层平板（上层平板含0．2％琼脂）培养法再生,原生质体的再生率最高。本研究为以后进行灵芝原生质体的融合以及灵芝的转基因研究打下了基础。