测定a-淀粉酶活性的凝胶扩散法和组织印渍法

建立了改良凝胶扩散法和组织印渍法检测α-淀粉酶活性的方法。此法的实验条件容易控制,重复性好。组织印渍法在玉米种子吸水约5h后即可检测到α-淀粉酶活性。     

细菌L型的组织印片法检测

应用组织印片革兰氏、细胞壁染色的方法,检查36例慢性扁桃体炎、15例慢性咽炎组织中的细菌L型。结果表明,组织印片革兰氏染色和细胞壁染色L型菌的检出率相同,阳性率是90.2％,与对照组中同一标本的L型培养和免疫组织化学染色的L型检出率均具有一致性(P>0.05)。上述4种检查方法的L型检出率之间亦无显著性差异(P>0.05)。故我们认为,组织印片法检测细菌L型简便、准确,是L型感染初步筛选的最佳方法,可用于L型感染的快速诊断。     

人膀胱癌转化生长因子α的研究

应用Northern印渍杂交和放射免疫分析技术证明了膀胱癌组织和细胞中TGFαmRNA的表达,并发现TPA能提高人膀胱移行上皮癌BIU-87细胞中TCFαmRNA和TGFα活性分子的水平,但对TGFα的功能受体(EGF受体)具有负调节作用。提示TGFα在膀胱肿瘤细胞的恶性增殖过程中起一定作用,蛋白激酶C的激活可能是调节TGFα基因表达的途径之一。     

中药法落海挥发油化学成分研究

目的：分析和鉴定法落海中挥发油的化学成分。方法：用蒸馏法提取法落海中的挥发油，借助GC-MS法将挥发油中各化学成分进行分离和鉴定，用峰面积归一化法测定其相对含量。结果：法落海挥发油离子流图共有99个峰，鉴定出了77种化合物，占挥发油总量96.1%，其中主要成分为：α-蒎烯（27.33%）、α-水芹烯（9.87%），十二烷醇（8.41%）、罗勒烯（7.24%）、4,4,6,6-四甲基-二环[3.1.0]己-2-烯（5.55%）、肉豆蔻脑酸（3.58%）、蛇麻烯（2.76%）等。结论：本实验采用GC-MS联用技术分析了法落海中所含挥发油成分，使用峰面积归一化法计算挥发油中的相对含量，该方法操作简单，灵敏度高，检测效果好。简要讨论主要成分中化学成分的药理作用，为开发利用法落海提供理论依据。     

人妊娠子宫平滑肌细胞的原代培养Transgelin蛋白的检测

为了建立最佳的人妊娠子宫平滑肌细胞的原代培养方法和初步检测子宫平滑肌细胞中Transgelin蛋白的表达,采用组织块贴壁法和酶消化法进行人妊娠子宫平滑肌原代培养.发现组织贴块培养的细胞呈典型的梭状肌细胞样生长,经过传代纯化,通过免疫细胞化学方法检测平滑肌肌动蛋白(smooth muscle acting,SMA)进行细胞鉴定及检测Trangsgelin(smooth muscle 22 alpha,SM22-α)蛋白,得到SMA、snd2-α荧光免疫细胞化学染色为阳性.结果表明组织贴块法对妊娠子宫平滑肌细胞损伤小,可获得状态良好的纯净的子宫平滑肌细胞,子宫平滑肌细胞中大量表达sm2-α,为进一步研究sm22-α在子宫平滑肌细胞中作用打下基础.     

一种直接用于蛋白质测序的快速电印渍技术

蛋白质印渍是指在一定的驱动力作用下将蛋白从凝胶上转移至某种印渍膜上的方法,有扩散印渍、真空印渍和电印渍三种。其中电印渍应用最为广泛,在理想条件下可将90％以上的蛋白质转移至印渍膜上。印渍膜有多种多样,如硝酸纤维素膜、阳离子化尼龙膜、DBM（diazo－benzy－loxymethy）、DPT（diazo－phenylthioether）、SGF（siliconnedglassfiber）和PVDF（polyvinylidenedifluoride）膜等“‘。近年来,又在此基础上发展了一种微量蛋白质N一端序列分析技术［’j。如果把蛋白质数据库资料与计算机结合起来,人们就有可能根据N一端序列…     

重复DNA顺序pRRD9在稻属中的拷贝数测定

本文应用狭缝印渍杂交方法,把水稻基因组总DNA和含水稻中度重复顺序片段的质粒(pRRD9)DNA分别转移到尼龙膜上形成狭缝印渍、然后用~(32)P标记的 pRRD9插入片段进行杂交、根据各狭缝印渍的放射性强度,测定水稻(Oryza)一些栽培种和野生种基因组中重复DNA顺序的拷贝数,并就拷贝数与水稻进化关系及基因组型的联系进行讨论.     

重复DNA顺序pRRD9在稻属中的拷贝数测定

本文应用狭缝印渍杂交方法,把水稻基因组总DNA和含水稻中度重复顺序片段的质粒(pRRD9)DNA分别转移到尼龙膜上形成狭缝印渍、然后用³²P标记的 pRRD9插入片段进行杂交、根据各狭缝印渍的放射性强度,测定水稻(Oryza)一些栽培种和野生种基因组中重复DNA顺序的拷贝数,并就拷贝数与水稻进化关系及基因组型的联系进行讨论.     

番木瓜环斑病毒PCR检测技术研究

建立了检测番木瓜环斑病毒(PRV)的免疫捕捉-PCR(IC-PCR)法、ELISA-PCR法和巢式-PCR法,它们分别能从10-4、10-7和10-14稀释度的番木瓜叶粗汁液(所含鲜叶组织的量分别0.5ug、0.5ng和5×10-6ng)中检测出PRV.     

改良Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA

旨在建立一种从转基因农产品中快速提取DNA的方法.分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取转基因大豆GTS40-3-2基因组DNA,测其浓度和纯度,PCR扩增其内源基因(Lectin)、启动子(CaMV35S)和品系特异性序列,对两种方法进行比较和评价,并研究两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果,以及改良Chelex-100法在玉米、小麦和水稻等其他转基因农产品的应用效果.结果表明,改良Chelex-100法能够快速在1.5h之内从样品中提取DNA,所提取的DNA直接用于PCR扩增反应,产物电泳条带清晰明亮.两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果未见明显差别.该方法在玉米、小麦和水稻等转基因农产品的应用效果稳定.因此,改良Chelex-100法提取的DNA可以作为PCR扩增模板用于转基因农产品检测.该方法具有经济、简便、快速、安全的特点,适合转基因农产品大规模筛选和鉴别.     

罗格列酮对大鼠肺组织IL-4、IL-8和TNFα的影响

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活的受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对大鼠肺白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-4(IL-4)的影响.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组和罗格列酮组.制备肺组织匀浆和支气管肺泡灌洗液,用放免法检测IL-8、TNF-α,用ELISA法测IL-4.结果 罗格列酮组大鼠肺组织匀浆的IL-4含量[(5.36±1.08) ng/mL]高于正常对照组[(3.48±1.70) ng/mL],P＜0.01.其他指标差异无统计学意义.结论 激活PPAR-γ可诱导肺组织产生IL-4.     

索氏法提取姜黄挥发油及其成分的研究

本文以广西那坡县种植的姜黄为原料,分别以沸点为30-60℃,60-90℃的石油醚以及石油醚与乙醚的混合物作为溶剂,采用索氏提取法提取挥发油,并采用GC-MS分析法研究了这几种姜黄挥发油的主要成分,比较了不同的加工办法对挥发油的加工得率、主要成分、含量的影响。研究表明：用索氏提取法提取的广西姜黄挥发油其得率在7％以上,主要成分为：α-姜黄烯、（-）-姜烯、β-倍半水芹烯、芳姜黄酮、β-姜黄酮、α-姜黄酮、β-没药烯。     

PTEN基因突变及蛋白表达与胃印戒细胞癌的相关性研究

目的:探讨胃印戒细胞癌组织中PTEN基因突变及其蛋白表达异常与胃印戒细胞癌发生、发展和临床病理特征的相关性.方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析法检测36例胃印戒细胞癌组织和36例正常胃组织中PTEN基因突变情况,同时应用链霉菌抗生物蛋白一过氧化酶(S-P)免疫组化方法检测PTEN蛋白的表达并结合临床病理资料进行分析.结果胃印戒细胞癌组织PTEN的表达36.1%,明显低于正常组织94.4%,二者具有显著性差异(P<0.01);PTEN表达与性别和年龄无相关性(P>0.05).与浸润深度、淋巴结转移有相关性(P<0.05);36例胃印戒细胞癌组织中PTEN外显子5突变3例(8.33%),突变位点相对较集中,显示其突变热点主要位于161、162号密码子.结论:PTEN在胃印戒细胞癌组织中表达降低,与其浸润深度、淋巴结转移密切相关.胃印戒细胞癌中PTEN基因突变是其蛋白表达缺失原因之一.     

全自动直接定量法与定量比值法检测红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶活性的比较

目的:与定量比值法比较,探讨全自动直接定量法检测红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)活性的可行性。方法:同时采用定量比值法(即硝基四氮唑蓝定量法)和全自动直接定量法,检测219例肝素抗凝静脉血标本的红细胞G-6-PD活性。结果:定量比值法检测G-6-PD缺乏的阳性率为9.13%,全自动直接定量法检测的G-6-PD缺乏阳性率为9.58%,两种方法检测结果无显著性差异(P>0.05)。结论:定量比值法简单易行,适用于卫生条件有限的基层医疗单位;全自动直接定量法快速准确,是一种可批量检测的理想筛选方法。     

番木瓜环斑病毒PCR检测技术研究

建立了检测番木瓜环斑病毒 (PRV)的免疫捕捉 PCR (IC PCR)法、ELISA PCR法和巢式 PCR法 ,它们分别能从 10 - 4、10 - 7和 10 - 14 稀释度的番木瓜叶粗汁液 (所含鲜叶组织的量分别 0 .5ug、0 .5ng和 5× 10 - 6ng)中检测出PRV。     

卡式微柱凝胶法在猴血型鉴定中的应用

灵长类动物的ABO血型抗原都表达在组织器官内,而不是在红细胞上,这给灵长类动物血型的鉴定带来很大的困难。为找到更加简捷、准确鉴定灵长类动物类人ABO血型的方法,采用近年来临床上广泛应用的卡式微柱凝胶正、反定型法对34只猕猴和16只食蟹猴的血型进行了鉴定,并与肾组织免疫组化法的检测结果进行比较。结果显示:卡式微柱凝胶正定型法的检测结果中无一例为阳性结果;血浆中的纤维蛋白原和人-猴种属间非特异性抗体都会对卡式微柱凝胶反定型法的部分检测结果产生干扰;采用经正常人O型红细胞吸附处理后的清亮血清,卡式微柱凝胶反定型法的检测结果明确,与免疫组化法判定结果一致。由此得出:卡式微柱凝胶反定型法可以用于灵长类动物血型的鉴定,其主要干扰因素为血浆内的纤维蛋白原和人-猴种属间非特异性抗体,在采用清亮血清及经正常人O型红细胞吸附处理后能消除其干扰。     

利用改良MSRV-MPN法对食品中沙门菌定量的研究

目的 目的建立一种操作简单、准确、快速的沙门菌定量方法,为食品安全风险评估提供数据支持.方法 从河南省肉鸡专项监测点在不同环节采集60份生鸡肉,分别利用常规MPN法和改良MSRV-MPN法进行沙门菌的定量检测.结果 两种方法的检测限均为0.3 MPN/g,常规MPN法计数结果有9份样品高于改良MSRV-MPN法,改良MSRV-MPN法计数结果有37份样品高于常规MPN法,有14份样品二者计数结果相等,经统计学分析(SPSS 10.1),Z=-4.019,P＜0.05,差异有统计学意义,改良MSRV-MPN法计数结果高于常规法.结论 改良MSRV-MPN法优于常规MPN法,值得推广使用.     

Chelex-100法及酚氯仿法提取阴道毛滴虫DNA的比较

目的-比较Chelex-100法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA。方法-分别用Chelex-100法和酚氯仿法提取阴道毛滴虫基因组DNA,用PCR法检测DNA提取的有效性。结果两种方法提取的DNA经PCR扩增均有特定的条带。结论-两种方法均能提取阴道毛滴虫DNA。Chelex-100方法简便、省时,较适用于分子生物学研究及临床PCR扩增使用。     

化学发光法检测体外HBV复制

目的:建立化学发光法检测体外HBV复制水平的方法,研究其灵敏度和稳定性.方法:用HBV DNA重组质粒pCH9转染到人肝癌细胞株HepG2和Huh7中,5d后收集细胞并抽提其HBV复制中问体DNA,转印后以地高辛标记HBV DNA为探针进行杂交,用化学发光法检测杂交结果,同时进行探针灵敏度的检测.结果:转染后HepG2和Huh7细胞提取HBV DNA中检测出较强的复制中间体的信号,分别为松散环状DNA(rcDNA),双链线性DNA(dslDNA),单链DNA(ssDNA),探针检测的灵敏度可达到lpg,接近同位素法检测的灵敏度.整个实验重复3次获得同样结果.结论:成功建立了稳定的化学发光法检测体外HBV复制水平的方法.     

化学发光微粒子免疫法和梅毒螺旋体颗粒凝集试验检测梅毒抗体的比较

目的评价化学发光微粒子免疫法（chemiluminescence microparticle immunoassay, CMIA）检测临床血清标本梅毒螺旋体抗体的敏感性和特异性。方法用梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TVeponema Pallidum particie agglutination test,TPPA）法作为对照标准,采用CMIA法检测2012年11月到12月1200例住院患者的血清标本,并用卡方检验评价两种检测方法对同一个样本的化验结果的一致性。结果1200例血清标本中用CMIA法检出阳性率为11.3%,TPPA法检出阳性率为10. 9% ,以TPPA为标准,CMIA法敏感性为96. 9%,特异性为99. 2%,其中CMIA法检测血清S/CO值〉 4. 00的110例,用TPPA确认107例阳性,阳性预测值（PPV）为97.3%;CMIA法S/C0值在1.0-9.0,TPPA可出现阴性结果。结论CMIA法可替代TPPA法进行梅毒螺旋体抗体检测,对于CMIA法检测S/C0值1. 0-4.0的需进一步复检。