Gβ类似蛋白-WDR26对细胞增殖的影响

WD40重复序列蛋白是一类结构保守、功能复杂的蛋白．关于此类蛋白和细胞内信号传导途径的研究显示,该家族成员很可能通过调控胞内信号转导而影响细胞基本生命活动．在此前的研究中,我们报道了一个新基因WD40 repeat protein26的克隆．其初步研究结果显示WDR26蛋白与MAPK信号途径的负调控相关．在最近的研究中,我们构建了稳定转染pCMV—WDR26表达载体的HeLa细胞系,结果显示WDR26蛋白在HeLa细胞系中的过度表达,能够促进细胞分裂,加快细胞的倍增速度．因此,WDR26很可能具有通过MAPK信号途径调节细胞增殖的功能．     

WDR91-WDR81复合体调控内吞体-溶酶体运输及神经发育

WD40重复序列蛋白在真核生物中广泛存在,并参与胞内运输、信号转导、凋亡发生、转录调控等生命过程.通过以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)为模式动物进行遗传筛选,本课题组发现了两个新基因,其人类同源基因编码WD40重复序列蛋白WDR91和WDR81,然而此前对这两种蛋白的功能知之甚少.本课题组后续工作发现, WDR91和WDR81形成复合体,作为晚期内吞体的特征性小GTP酶Rab7的效应因子被招募到内吞体上,与Ⅲ型磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)复合体的Beclin 1亚基相互作用,抑制内吞体上磷脂酰肌醇3-磷酸(PtdIns3P)的合成,使早期内吞体向晚期内吞体转化,从而确保内吞体-溶酶体运输得以实现. WDR91-WDR81复合体与神经发育紧密相关,具体表现在特异性敲除WDR91的小鼠神经突起生长受损,而WDR81通过内吞体SARA-TGFβ信号通路影响成体神经发生.此外, WDR81还可作为衔接蛋白结合p62和LC3C,以不依赖于WDR91-WDR81复合体的形式促进蛋白聚集体的选择性自噬.这些发现为揭示WDR91和WDR81相关的神经系统疾病致病机制提供了重要理论依据.     

G_β类似蛋白─WDR26对细胞增殖的影响

WD40重复序列蛋白是一类结构保守、功能复杂的蛋白.关于此类蛋白和细胞内信号传导途径的研究显示,该家族成员很可能通过调控胞内信号转导而影响细胞基本生命活动.在此前的研究中,我们报道了一个新基因WD40repeatprotein26的克隆.其初步研究结果显示WDR26蛋白与MAPK信号途径的负调控相关.在最近的研究中,我们构建了稳定转染pCMV-WDR26表达载体的HeLa细胞系,结果显示WDR26蛋白在HeLa细胞系中的过度表达,能够促进细胞分裂,加快细胞的倍增速度.因此,WDR26很可能具有通过MAPK信号途径调节细胞增殖的功能.     

RNAi干扰WDR79基因对肺腺癌A549细胞增殖的抑制效应

通过RNA干扰技术沉默端粒酶关键组分WDR79的表达,采用PCR法、Western blot、免疫荧光共聚焦、Southern blot、MTT、流式细胞术(FCM)分别检测WDR79 siRNA瞬时转染A549细胞后WDR79基因和蛋白的表达水平、端粒酶和端粒的结合情况和端粒长度变化、细胞生长增殖变化、细胞周期的变化及细胞凋亡率,探讨该基因的沉默表达对A549细胞的抑制作用。结果表明,WDR79 siRNA瞬时转染A549细胞显著降低WDR79 mRNA及蛋白水平(P0.05),端粒和端粒酶的结合水平明显减少(P0.05),细胞增殖的活力被抑制(P0.05),干扰后停留在S期的细胞减少(P0.05),停留在G1期的细胞增多(P0.05)。提示WDR79 siRNA的瞬时转染可显著降低WDR79基因及蛋白的表达,并有抑制肺腺癌A549细胞的生物学效应,进一步探索了WDR79基因在肿瘤发生发展中的重要作用,并在为肺癌的治疗中寻找更有效的靶点提供了实验证据。     

人类新基因WDR24的研究初报

WD40家族是一类结构保守、功能复杂的蛋白.目前很多研究显示该家族成员通过参与MAPK信号途径调控细胞内信号转导而影响细胞的基本生命活动.为了鉴定参与细胞生命活动的新基因,运用同源基因克隆法,通过PCR技术扩增获得一个新的人类基因WDR24, 其cDNA全长3 302 bp,2 373 bp长的开放阅读框编码由790个氨基酸残基组成的蛋白质.生物信息学分析表明,WDR24蛋白在进化上高度保守,与其他脊椎动物中的同源蛋白组成了一个功能未知的亚家族.蛋白序列分析显示其中有6个WD40重复序列和1个ERK的停泊位点D-domain.RT-PCR分析表明,该基因在所有被检测的人类胚胎组织中表达.     

人类新基因WDR70的克隆及初步研究

运用基于基因组数据库的特定基因同源新基因的克隆策略得到一个人类新基因WDR70 ,该基因编码一个包含 12个WD4 0结构域的蛋白。WDR70的cDNA序列长 2 2 6 6bp ,预测编码蛋白含 6 30个氨基酸 ,理论分子量为 70× 10 3 u ,染色体定位为 17p13.1。以小鼠胚胎为模型进行整体原位杂交 ,结果显示WDR70基因在 8.5d小鼠胚胎中没有表达 ,而在 9.5d和 10 .5d的小鼠胚胎的脑部有特异表达。由此推断该基因对胚胎期脑部的发育有重要的影响。     

WD-重复蛋白

 WD基元又称Trp-ASP或WD40,由40个左右的氨基酸残基组成,具有保守的GH和WD序列.WD基元存在于很多具有调控功能的蛋白质中,介导蛋白质之间的相互作用,在信号转导、蛋白运输、染色体修饰、转录或RNA加工等过程中具有重要作用.WD重复蛋白(WD-repeat protein)是含有多个保守的WD基元的蛋白质.近年发现,WD-repeat基因突变与人的几种疾病相关.本文对真核生物WD-重复蛋白的研究进展进行了综述,阐明了WD 重复蛋白的β-propeller结构特征及其作用机制,并对WD-重复蛋白的未来研究方向进行展望.     

一个莱茵衣藻WD40蛋白正向调控油脂的积累

WD40蛋白(WD40-repeats)一般存在于真核生物中,具有广泛的生理生化功能。本研究以莱茵衣藻一个WD40(Cre12.g552900)蛋白为研究对象,通过遗传转化的方法实现对该基因的敲除和过量表达。转基因藻株检测结果显示Cr WD40 RNAi转基因藻株油脂含量减少了11%~24%,而Cr WD40过量表达转基因藻株油脂含量增加了14.3%~75%,正反两方面实验说明Cr WD40对油脂积累起到正向调控的作用。     

基于氧化应激研究苦豆子不同提取物的肝毒性机制

基于亚急性毒性实验对苦豆子不同提取物肝毒性机制进行研究,为苦豆子临床安全使用提供理论依据。分别采用75%乙醇回流法(ER)、水煎煮法(WD)、75%乙醇超声法(EU)和水超声法(WU)制备苦豆子提取物,通过不同提取物的亚急性毒性实验测定大鼠肝组织中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽酶(GSH)、丙二醛(MDA)水平以评价其肝毒性;应用免疫组织化学和蛋白免疫印迹方法测定氧化应激相关蛋白红系衍生的核因子2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)表达,进一步探讨其肝毒性机制。结果显示,与空白组相比,AST在雄性大鼠各给药组血清中显著性升高,ALT在雌雄大鼠血清中均呈升高趋势,尤其在雄性WD、ER组、雌性WD、WU、EU组中有显著性差异。与空白组比较,雄性给药大鼠肝脏SOD和GSH在各组中均显著性降低,GSH在雌性大鼠肝组织中呈升高趋势,其中WD组有显著性差异,MDA在雌、雄给药大鼠肝脏中均显著升高。给药后,对Nrf2/HO-1氧化应激通路中相关蛋白检测后发现,Nrf2蛋白相较空白组在肝组织中表达均呈降低趋势,其中雄性WD、WU、EU组和雌性WD、EU、ER组最为显著,HO-1在雌雄各组肝组织表达中均发生显著性降低。SOD1在雌性各组中均有显著性降低,而在雄性中WD和ER组有显著性降低。本研究发现苦豆子不同提取物对大鼠肝脏都有一定的毒性,其毒性机制主要是通过调控Nrf2/HO-1通路中相关蛋白造成机体氧化应激而发生。     

SCF泛素连接酶靶蛋白识别组分FBW7

FBW7（F-box and WD repeat domain-containing7）是F-box蛋白家族成员,为SCF（SKP1-CUL1-F-box）型泛素连接酶的靶蛋白识别组分。FBW7通过靶降解周期蛋白E、Myc、Jun等多种癌蛋白,对细胞周期进程、细胞生长、分化起重要调控作用。在多种人类肿瘤中已发现FBW7突变,FBW7功能缺失会引起染色体不稳定及肿瘤发生,表明FBW7是一种肿瘤抑制因子。在FBW7缺失所致的肿瘤发生过程中,周期蛋白E、Myc等靶蛋白活性升高、p53功能缺失有重要作用。     

WDR1在PC9细胞对AZD9291抗性形成中的影响

[目的]探究WDR1在PC9细胞形成对AZD9291耐药中的作用。[方法]构建PC9耐奥西替尼(AZD9291)细胞株(PC9/AR),通过qRT-PCR和Western Blot检测PC9/AR细胞中WDR1的水平;通过siRNA敲降Wdr1后,用CCK8实验检测细胞存活率;在敲降Wdr1的基础上过表达cofilin,通过CCK8检测细胞的存活率;在PC9细胞中过表达Wdr1,在AZD9291的处理下检测细胞存活率。[结果]WDR1和Cofilin在PC9/AR细胞中与正常细胞相比蛋白水平上分别有2.5倍和1.5倍的上升;敲降Wdr1,细胞活性显著下降(P 0.05)。敲降Wdr1后,过表达cofilin,细胞的存活率显著提高(P 0.05)。[结论]WDR1能显著性增强PC9细胞对AZD9291的抗性,并且通过ADF/cofilin介导的肌动蛋白动力学来促进这一过程的。     

小颅畸形症致病机制研究的重要进展

正WDR62基因突变被发现与小颅畸形症(microcephaly,MCPH)和智力低下密切相关,WDR62基因突变已被公认是造成MCPH的第二大主因。但是,有关WDR62在大脑发育过程中的功能和作用机制,以及WDR62突变如何导致小颅畸形症的致病机制目前尚不清楚。     

LCM纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的定量蛋白质组学研究

间质在肿瘤发生发展中的作用越来越受到重视．为寻找与鼻咽癌( nasopharyngeal carcinoma,NPC )发生发展相关的特异性间质蛋白,采用激光捕获显微切割技术( laser capture microdissection,LCM )纯化鼻咽癌间质和正常鼻咽黏膜间质,荧光差异双向凝胶电泳( fluorescent two-dimensional difference gel electrophoresis 2-D,DIGE )结合质谱技术分离鉴定间质相关蛋白．Western blot及免疫组织化学技术验证了其中3个差异蛋白(CapG、L-plastin和S100A9),证实了2D-DIGE结果的可靠性．建立了LCM 纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的荧光差异蛋白表达图谱,高通量筛选与肿瘤发生相关的间质蛋白,共得到34个有统计学意义的蛋白质点,质谱鉴定得到20个差异蛋白．研究结果提示：这些差异表达的蛋白质将有助于阐明鼻咽癌细胞和周围间质的关系．对间质蛋白功能的进一步研究,将有助于解析间质在肿瘤发生中的作用机制,并为从间质途径寻找肿瘤治疗靶标提供新思路．     

P120链蛋白与肿瘤

研究参与肿瘤发生的重要信号分子,对揭示肿瘤发生发展有重要意义。链蛋白(catenin)家族成员与肿瘤的发生密切相关,在保持细胞黏附中起着重要作用,其表达缺失或下降将导致细胞分化丧失和具有侵袭性,容易发生浸润和转移。链蛋白家族最早被分为α、β、γ三类,它们都能与E-钙黏着蛋白(E-cadherin)形成复合体。P120cat作为新发现的链蛋白家族成员之一,位于细胞连接处和细胞核内,与肿瘤的发生有着更密切和特殊的关系,在不同的条件下,它既可以作为肿瘤的促进物,又可成为肿瘤的抑制物。     

GIPC蛋白与肿瘤发生机制研究进展

GIPC蛋白即G蛋白信号调节体-G alpha相互作用蛋白C端,在蛋白流动、胞吞作用和受体聚集方面发挥重要作用。同时,GIPC蛋白在肿瘤发生中发挥重要的调节机制,可能是一个新的肿瘤相关抗原和治疗靶点。有关GIPC蛋白的研究近年在国际上形成了一个新的热点。我们以GIPC蛋白与肿瘤发生机制为重点,简要综述国内外关于该蛋白的研究现状。     

p21活化激酶在肿瘤中的作用

p21活化激酶(p21-activated kinase,PAKs)是小G蛋白Rac和细胞分裂调控蛋白42(Cdc42)的一类效应蛋白质.PAKs是一类进化保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在细胞骨架重排、细胞增生、细胞存活及增殖等方面发挥重要作用.在哺乳动物中根据结构特征可将PAKs分为2个亚家族I类(A组)和Ⅱ类(B组):I类包括PAK1、PAK2和PAK3,Ⅱ类包括PAK4,PAK5和PAK6.近年来,对PAKs在肿瘤发生发展中作用的研究成为焦点.本文对PAKs中各成员的结构功能,及其在肿瘤发生发展过程中的作用等方面进行简要综述.     

黄花蒿转录因子AaW D40的克隆

黄花蒿(Artemisia annua L.)是菊科(Asteraceae)蒿属(Artemisia)一年生草本植物。WD40转录因子基因与植物叶片表面腺毛发育、次生代谢相关。本研究利用RACE技术从黄花蒿中克隆出Aa WD40基因(GenBank登录号:KY411922),并对其进行了生物信息学分析。AaW D40基因的cDNA全长1 498 bp,其中5'末端非翻译区为209 bp,3'末端非翻译区为183 bp。开放阅读框(ORF)的长度为1 106 bp,编码368个氨基酸残基,DNAMAN分析预测其等电点为4.64,分子量为41.29 kD。对AaW D40氨基酸序列进行同源性分析,发现其与多种植物具有较高的同源性。生物信息学分析发现AaW D40氨基酸序列含有4个典型的WD40重复区域,符合WD40基因的特征,所以命名为AaW D40。利用Swiss-Model对AaW D40蛋白进行三级结构分析,AaW D40蛋白空间结构错综复杂,与多种植物WD40空间结构域非常相似。系统发育树分析AaW D40与其他WD40均源于同一祖先,并且AaW D40与DpWDR、GhTTG4的亲缘关系最为接近。荧光实时定量PCR分析显示,AaW D40在根、茎、叶中都可以检测到表达,其中根的表达量最高,其次为叶,再次为茎。本研究为进一步研究AaW D40与黄花蒿次生代谢的关系提供了理论基础。     

果蝇新基因CG7609的克隆与初步功能研究

通过生物信息学方法和分子克隆技术克隆了一个果蝇新基因CG7609．该基因属于WD40家族,具有7个典型的WD40重复结构域．与人类WDR24基因的同源度很高．胚胎原位杂交和RT-PCR显示其在胚胎早期的中胚层有弱表达,在胚胎晚期主要在肠中表达．通过心脏特异抗体检测CG7609突变体的表型,发现其心脏前体细胞的分化不受影响．但通过果蝇心力衰竭模型分析该基因在成体心脏中的功能,发现CG7609基因缺失后心力衰竭发生率明显高于野生型,而且在与pannier基因配对后心力衰竭率发生较大的变化,这个初步发现推测该基因可能在戍体心脏中具有功能．