大肠杆菌热稳定性肠毒素的分离纯化和氨基酸顺序测定

上海市儿童医院婴儿腹泻病患中分离到产肠毒素的菌株,该菌株只产热稳定性肠毒素,经CAD-44树脂吸附,SephadexG-25凝胶过泸,DEAE-Seharose CL-6B离子交换层析,反相高压液相层析分离纯化后,用手工固相DABITC/PITC双偶合Edman降解法测定其氨基酸顺序为:Asn·Ser·Ser·Asn·Tyr·Cys·Cys·Gly·Leu·Cys·Cys·Asn·Pro·Ala·Cys·Thr·Gly·Cys·Tyr。     

发现胰岛β细胞所分泌的一种新激素

早在1900年,有人发现,胰岛内有淀粉样的蛋白质存在。但近一个世纪来,对它的化学性质、生理作用和临床意义却一直不十分了解。1987年,美国Westermark等从胰岛瘤患者的胰岛淀粉样蛋白中分离出一种分子量为3850、由37个氨基酸组成的多肽,称其为胰岛淀粉样多肽(Islet amyloid polypeptide,IAPP或Amylin),结构如下:Lys—Cys—Asn—Thr—Ala—Thr—Cys—Ala—Thr—Gln—Arg—Leu—Ala—Asn—Phe—Leu—Val—His—Ser—Ser—Asn—Asn—Phe—Gly—Ala—Ile—Leu—Ser—Ser—Thr—Asn—Val—Gly—Ser—Asn—Thr—Tyr     

血清胸腺因子的固相合成及抗血清的制备

通过Bpoc·Ser(tBu)·Asp·OtBu的β-羧基上树脂和依次用Fmoc·Gly·Gly·OHFmoc·Gln·ONP,Fmoc.Ser(tBu).OH,Fmoc.Lys(Boc)·OH,Fmos·Ala·OH及pGlu·OH伸长,接着氨解和酸解的策略,我们用固相方法合成了血清胸腺因子(FTS,Thymulin),pGlu·Ala·Lys·Ser·Gln·Gly·Gly·Ser·Asn;制备了具有最大生物活性的该因子和Zn~(2+)的复合物,FTS-Zn;用该复合物与牛血清白蛋白(BSA)结合所形成的免疫原免疫家兔,获得了抗FTS-Zn~(++)的抗血清,通过酶联免疫吸附分析法(ELISA)测得其滴度高达1:12800。     

LH-RH及其类似物的垂体外作用

经典的看法认为下丘脑分泌的黄体生成素释放激素(LH-RH)仅仅作用于垂体,调节促性腺激素的释放。但是,目前又有许多新的实验结果证明,LH-RH 及其高活性类似物具有垂体外抑制作用,从而动摇了最初的一些观     

甲硫氨酸脑啡肽类似物对大鼠增重作用的观察

根据鲍威斯(Bowers)等报道,在大鼠垂体离体培养液中,如加入甲硫氨酸脑啡肽类似物(酪·D-色·甘·苯丙·甲硫酰胺Tyr·D-Trp·Gly·Phe·MetNH2)能促进垂体细胞分泌生长激素。此外,还证实它对促黄体生长激素(LH)、促甲状腺激素(TSH)、催乳激素(PRL)和促肾上腺皮质激素(AC/H)无交叉反应。     

固相法合成LRH的D—色氨酸类似物及结构与功能的初步探讨

<正> 自从促黄体生成素释放激素(LRH)的发现和合成,近十年来,国内外对LRH的结构与功能进行了广泛的研究和探讨。目前已合成数百种的LRH的类似物,大部分类似物的生物活性均比夭然的LRH高几十倍至上百倍。实验证明,这类LRH类似物对治疗人     

促黄体素释放激素类似物（LRH—A）生物活性的测定

引言哺乳动物下丘脑分泌的促黄体生成激素释放激素(LRH),具有促使垂体前叶分泌黄体生成素(LH)和促卵泡素(FSH)的作用,故在医学临床和畜牧业生产中有着重要的应用价值.近几年来中国科学院上海生物化学研究所采用新工艺,人工合成了一系列LRH及其激动性类似物.[D丙~6][去甘酰胺~(10)]LH—RH乙基酰胺(LRH—A),即LRH—A是第一个被合成的LRH激动剂,为了测定这类多肽物质的生物活性,我们曾摸索了使用诱导雄性(或雄蟾蜍)排精测其活性的方法.皖南医学院计划生育研究室为了便于临床应用,     

枯草芽孢杆菌中性植酸酶的纯化和酶学性质

从土壤中分离到了产中性植酸酶的枯草芽孢杆菌菌株并对所产植酸酶进行了分离纯化。此中性植酸酶的反应最适 pH为 7 5,最适温度为 55℃ ,在 37℃下以植酸钠为底物的Km值为 0 1 9mmol/L ,植酸酶活性依赖Ca2 +的存在。酶蛋白的分子量大小约为 45kD ,纯酶蛋白N端序列为Lys His Lys Leu Ser Asp Pro Tyr His Phe Thr。     

湖南烙铁头蛇毒中一个新的舒缓激肽增强肽（TmF）

通过 70 %冷甲醇抽提、SephadexG 15分子筛和反相高效液相色谱C1 8层析 ,从湖南产烙铁头蛇毒 (Trimeresurusmucrosquamatus)冻干粉中纯化得到一个新的舒缓激肽增强肽 (BPP) ,命名为TmF。该小肽的氨基酸序列为pGlu Gly Arg Pro Leu Gly Pro Pro Ile Pro Pro (pGlu表示焦谷氨酸 )。序列结果分析表明 ,TmF和已经分离得到的BPPs有很高的序列同源性。MSI MS测定其分子量为 1.110 7kD。TmF的生物学活性和药理学活性检测的结果表明 ,它增强舒缓激肽 (BK) ( 1mg L)诱导的离体豚鼠回肠纵行肌收缩的活性为 ( 1.13± 0 .3)单位 (mg L) ;TmF ( 5 .0× 10 - 4mg kg)可以增强约 ( 14± 2 )mmHg的由BK( 5 .0× 10 - 5mg kg)诱导的舒张压下降 ;在抑制剂试验中 ,不同剂量的TmF和 5× 10 - 2 mg的血管紧张素转化酶保温 30min ,结果表明大约2 .0× 10 - 3mg的TmF表现出对ACE水解活性的半数抑制率 (IC50 )。     

芹菜素对雌性大鼠生殖轴的影响

目的：探讨芹菜素在10-9mol/L浓度时对雌性大鼠生殖功能的影响。方法：应用侧脑室注射方法观察芹菜素对雌性大鼠生殖轴激素含量的影响。在侧脑室注射后第3天取血浆,采用放免技术测定血浆中促性腺激素释放激素（GnRH）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、孕酮（P）的含量。结果：在给药后第3天血浆中促性腺激素释放激素（GnRH）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）的含量增加而雌二醇（E2）、孕酮（P）的含量降低,差异有显著性。结论：芹菜素抑制雌二醇（E2）合成中芳香化酶的活性实现对雌二醇（E2）、孕酮（P）分泌的抑制。芹菜素通过影响雌激素受体而使下丘脑的促性腺激素释放激素（GnRH）和腺垂体的卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）分泌增加。     

γ-氨基丁酸 (GABA) 毛叶茶品质成分分析

以毛叶茶为研究对象,通过真空厌氧处理将其制作成γ 氨基丁酸(GABA)毛叶茶,探求毛叶茶经厌氧处理后的品质成分变化。结果表明：(1)厌氧处理后的毛叶茶,其GABA含量显著提高,达到GABA茶标准。游离氨基酸、黄酮和生物碱含量也显著升高,但茶多酚和水浸出物含量降低。同时,真空处理还能促进儿茶素的转化。简单儿茶素含量呈降低趋势,ECG和CG含量显著提高,EGCG、GCG含量及酯型儿茶素总量却先增加后降低,最终总量与对照样无明显差异。(2) 毛叶茶中除含有一般的蛋白质氨基酸外,还含有普通茶树品种所特有的特征氨基酸Thea,以及微量的GABA。游离氨基酸中含量较高的有Thea、Glu、Asp,较低的是Met、Cit、α ABA、Tau、Gly。Cysthi和EOHNH2是GABA毛叶茶中特有氨基酸。在真空厌氧条件下,GABA毛叶茶的游离氨基酸由于蛋白质发生降解而总量增加。其中P Ser、Thr、Ser、Asn、Pro、Gly、Cit、α ABA、Val、Cysthi、Ile、Leu、Tyr、Phe、GABA、Trp、Lys、His含量上升,Asp、Glu和α AAA含量均降低,而Ala 和Arg含量却呈现先增后降的趋势,Thea、Cys、Met等游离氨基酸含量在真空处理后无明显变化。     

酸性和碱性酶稳定性机制及其识别

了解酸性和碱性酶稳定性机制并对其进行识别具有重要理论和实践意义。通过分析105条酸性酶和111条碱性酶序列的氨基酸组成, 结果表明: 酸性酶中Trp、Tyr、Thr和Ser的含量明显高于平均值, 而Glu、Lys、Met和Arg的含量则明显低于平均值; 碱性酶中Trp、Ala和Cys的含量略高于平均值, 而Lys、Arg和Glu的含量则略低于平均值; 酸性和碱性酶中Ala、Glu、Leu、Asn、Arg、Ser和Thr的含量存在较大差异。在此基础上, 发展了一种加权氨基酸组成的方法对两种酶进行识别, 其自一致性检验的识别精度可达86.1%, 5倍交叉验证的精度为83.3%。建立了一种基于序列识别酸性和碱性酶的新方法。     

慈菇蛋白酶抑制剂A和B中Trp残基周围构象与酶抑制专一性的关系

通过定点诱变结合荧光光谱学方法研究了慈菇蛋白酶抑制剂A和B(APIA和APIB)Trp残基周围构象与酶抑制专一性之间的关系。研究表明APIB中的两个Trp残基 (93和 12 2位 )所处环境的疏水性要比APIA中的强。Trp定点诱变研究表明 ,在APIB中 ,Trp12 2 周围环境的疏水性要比Trp93 强。用Ser和Leu分别替代 82位Leu和 87位Arg ,使APIB中色氨酸荧光特性变得与APIA的基本相同 ,同时还发现其酶的抑制专一性也变得趋近APIA的 ,暗示Trp周围的构象与酶抑制剂的抑制专一性有关。     

γ-氨基丁酸（GABA）毛叶茶品质成分分析

以毛叶茶为研究对象,通过真空厌氧处理将其制作成γ-氨基丁酸（GABA）毛叶茶,探求毛叶茶经厌氧处理后的品质成分变化。结果表明：（1）厌氧处理后的毛叶茶,其GABA含量显著提高,达到GABA茶标准。游离氨基酸、黄酮和生物碱含量也显著升高,但茶多酚和水浸出物含量降低。同时,真空处理还能促进儿茶素的转化。简单儿茶素含量呈降低趋势,ECG和CG含量显著提高,EGCG、GCG含量及酯型儿茶素总量却先增加后降低,最终总量与对照样无明显差异。（2）毛叶茶中除含有一般的蛋白质氨基酸外,还含有普通茶树品种所特有的特征氨基酸Thea,以及微量的GABA。游离氨基酸中含量较高的有Thea、Glu、Asp,较低的是Met、Cit、α-ABA、Tau、Gly。Cysthi和EOHNH2是GABA毛叶茶中特有氨基酸。在真空厌氧条件下,GABA毛叶茶的游离氨基酸由于蛋白质发生降解而总量增加。其中P-Set、Thr、Ser、Asn、Pro、Gly、Cit、α-ABA、Val、Cysthi、Ile、Leu、Tyr、Phe、GABA、Trp、Lys、His含量上升,Asp、Glu和仪．AAA含量均降低,而Ala和Arg含量却呈现先增后降的趋势,Thea、Cys、Met等游离氨基酸含量在真空处理后无明显变化。     

凤眼莲根分泌物氨基酸组分对根际肠杆菌属F2细菌的趋化作用

凤眼莲(Eichhornia crassipes)的根分泌物中含有Met等多种氨基酸,其中Met、GABA、Gly、Ala、Asp、Ser、Val和Leu(10^-7～10^-2mol·L^-1)均对凤眼莲的根际肠杆菌属F₂(Enterobacter sp.F₂)细菌有强烈的正趋化作用;Glu、Thr和His(10^-7～10^-3mol·L^-1)也对该菌有一定的正趋化作用;而Lys、Cys、Arg、Tyr、Pro、Asn、Gln、Ile、Phe和Typ则对该菌表现出一定的负趋化作用.对细菌的正趋化作用存在一个趋化物的最适浓度范围.具有正趋化作用的氨基酸在凤眼莲根际的浓度都较高,而具有负趋化作用的浓度则较低,这正是凤眼莲与该根际细菌结合为根际微生态系统的原因之一.     

黄体生成素释放激素关联肽广泛分布于大鼠胃肠道中

1985年,在脑中发现了黄体生成素释放激素关联肽(gonadotropin-releasing hormone associatedpeptide,GAP),它是一种56肽,由人类黄体生成素释放激素(GnRH)前体分子所衍生,对催乳素分泌和促性腺激素释放活性有强烈抑制作用。利用抗人类 GAP 的特异抗血清,美国 Penisula 实验室 Y.N.Wang 等发现,GAP 与其他很多神经     

茶树紫黄素脱环氧化酶基因的体外定点突变及其突变体的表达和活性鉴定

经Swiss Prot蛋白质数据库中查询发现茶树紫黄素脱环氧化酶 (VDE)蛋白结构中含有lipocalin特征区 ,利用重叠延伸法把该特征区中最保守的Gly(GGG)和Trp(TGG)分别定点突变为Leu(TTG)和Tyr(TAG) .构建了表达载体pET 32a G→L和pET 32a W→Y ,在E .coliBL2 1trxB(DE3)进行了诱导表达 ,并对表达蛋白进行His Tag亲和纯化 .结果表明 ,表达蛋白的分子量和预计的相等 ,为 5 8 9kD ,表达量占菌体总蛋白的 4 5 % .体外酶促反应分析得出 ,G→L或W→Y突变都能导致茶树VDE生物活性大幅度降低 ,证明了lipocalin特征区是VDE的主要活性中心之一 .     

促黄体激素释放激素在大肠杆菌中的表达

促黄体激素释放激素(LRH)是动物下丘脑分泌的一种十肽,分子量为1180,通过调节脑垂体分泌LH和FSH以及直接作用于性腺发挥生理作用,在控制机体生长发育和性周期活动中具有重要作用。在畜牧业生产上,促黄体激素释放激素能有效诱导和加速排卵,促进发情,提高动物繁殖率,能有效治疗卵巢囊肿。目前生产普遍使用化学合成的LRH类似物,但成本高。如果能人工表达LRH,将会在畜牧业     

枯萎病不同抗性黄瓜(Cucumis sativus L.)根系分泌物氨基酸组分与抗病的相关性

以5种对枯萎病不同抗性黄瓜品种为试材,对其根系分泌物氨基酸组分进行测定,并对氨基酸组分与黄瓜品种枯萎病抗病性之间的相关性进行了分析。结果表明：在中抗品种根系分泌中检测到的16种氨基酸：半胱氨酸Cys、苏氨酸Thr、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、异亮氨酸Lle、天冬氨酸Asp、亮氨酸Leu、苯丙氨酸Phe、甘氨酸Gly、甲硫氨酸Met、组氨酸His、谷氨酸Glu、酪氨酸Tyr、赖氨酸Lys、丝氨酸Ser和精氨酸Arg。其中的精氨酸在感病品种中没有被检出,组氨酸和精氨酸组分在抗病品种中没有被检出。根系分泌物中总氨基酸含量随品种抗性的增加而降低;精氨酸、丝氨酸和赖氨酸的含量与品种对枯萎病的病情指数呈负相关,其他13种氨基酸组分含量与品种对枯萎病的病情指数呈正相关,其中苯丙氨酸含量与病情指数呈显著正相关。丝氨酸与苯丙氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸的比值均与品种对枯萎病的病情指数呈显著负相关,其中Ser／Phe与品种对枯萎病的病情指数呈极显著负相关。     

圈养大熊猫粘液水解氨基酸含量的初步研究

收集了成都大熊猫繁育研究基地的 8只圈养大熊猫的 12个粘液样品并测定了其中 17种水解氨基酸(AA)的含量。结果如下 :粘液干物质中Glu含量最高 ,为 9 2 4 %± 0 4 7% ,其次为Leu、Asn、Thr、Ser、Pro、Val、Lys、Ala、Tyr、Arg、Gly、Ile、Phe、Cys、His,Met含量 (1 2 5 %± 0 18% )最低 ,不同样品中同一种AA的含量不同。样品中 9种非必需氨基酸 (NEAA)的总平均含量为 4 1 1%± 2 2 % ,8种必需氨基酸(EAA)的总平均含量为 2 9 8%± 1 8% ,NEAA/EAA的平均值为 1 38± 0 0 4 ,不同粘液样品的这些数值相近。不同样品中同一种EAA与该样品中Lys含量的比值存在不同程度的差异 ,样品中 (Tyr Phe) /Lys值最高 ,为1 79± 0 31;其次为Leu/Lys和Thr/Lys;而Met/Lys值最低 ,为 0 31± 0 0 5。各种氨基酸相对于总氨基酸含量的高低顺序与各AA绝对含量高低顺序完全相同 ,Glu含量最高为 13 0 %± 0 30 % ,Met含量为 1 76 %±0 2 5 %。结果表明 ,大熊猫粘液样品各种AA特别是EAA含量丰富 ,不同样品含量存在不同程度的差异 ;认为对排粘频繁和每次排粘量大的大熊猫 ,必须补充适量的优质蛋白以弥补由粘液排泄而造成的损失 ,以促进其体况的尽快恢复。