二甲亚砜作为氨基酸分析中茚三酮试剂的溶解剂

乙二醇甲醚已广泛作为氨基酸分析中茚三酮试剂的有机溶剂。然而,经常使用一种试剂有许多不利,乙二醇甲醚有毒性,易产生过氧化物。二甲亚砜试验就是在为得到一种化学性质更好,相对乙二醇甲醚无毒代用品的情况下,经过连续试验产生的。该试验证明:二甲亚砜较之乙二醇甲醚对还原性茚三酮是一种更好的溶剂。它能以等体积替换乙二醇甲醚,在茚三酮试剂的混合液中能产生和乙二醇甲醚相等的效应,同时还可增强稳定性。本结果采用75％二甲亚砜、25％、4M、pH5.2的醋酸锂缓冲溶液配成茚三酮和还原性茚三酮溶液。这类含有一定量还原性茚三酮的混合溶液用来代替原含有乙二醇甲醚的茚三酮溶液在氨基酸自动分析仪和人工茚三酮法的氨基酸定量测定中已受到人们的欢迎。     

混合醇体系中测定氨基酸的茚三酮光度法

氨基酸一般利用自动分析仪定量测定,但需高精密仪器,而基层研究单位一般难以采用,而且分析也不需要如此精密。利用茚三酮能够定量测定氨基酸,除脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮形成黄色化合物外,其它所有氨基酸均与茚三酮反应形成蓝紫色物质,溶液颜色深浅与氨基酸含量成正比。据此本文对氨基酸的茚三酮光度法测定进行了研究和改进。在混合醇体系中以醋酸钠-醋酸为缓冲溶液,加入抗坏血酸以增加反应的灵敏度,100℃水浴20分钟完成显色反应。并对酸度、试剂用量、反应时间等因素进行了研究,拟定了用于混合氨基酸总量测定的操作程序。     

高压液相色谱法分析氨基酸

<正> 自从1958年Spackman Stein和Moore建立了最初的氯基酸自动分析技术以来,随着HPLC的出现和发展,氨基酸分析方面的探讨中更加广泛和深入。衍生剂的不断更新,进一步展示了新一代氨基酸分析技术的活力。从最初的荧光胺、茚三酮,茚三酮/苯乙醛,发展到如今的邻苯二甲醛/二疏基乙醇,邻苯二甲醛/疏基     

氨基酸纸层析中茚三酮显色改良法

本文报道氨基酸纸层析中茚三酮显色与展层同时进行的改良方法,此方法克服了以前操作上的烦琐和斑点模糊等不足点。自1944年Consdon、Gordon和Mortain提出用滤纸来分离氨基酸、糖、肽类等物质以来,在国内外均用茚三酮喷雾法和浸湿法来显色,作为定性、定量的检测方法之一。目前国内在氨基酸研制和生产方面大多数还是采用纸层析法、而层析法中其重要的环节是显色,显色主要采用茚三酮喷雾和浸湿二法,此法不易掌握,我们根据目前生产上和氨基酸研制工作上急需解决的问题,提出了一个改良的显色法,即展层和显色同时进行,达到了较满意的效果。     

氨基酸显色剂茚三酮试剂的实验研究（一）茚三酮显色剂在不同存放时间内对氨基酸含量的影响

本项目采用新的技术,对茚三酮显色试剂进行了研究,利用国内新引进的６３００黄金系列氨基酸分析仪对不同存放时间内的节三酮显色剂对氨基酸含量的影响进行了实验研究。观察了第１天,第７天,第１４天,第２１天,第２８天内进口茚三酮显色剂与自制茚三酮显色剂对氨基酸含量的影响。并对３８种氨基酸与自制茚三酮试剂和进口茚三酮试剂反应后的实验结果进行了观察。实验结果表明,第１天至第２８天内,自制茚三酮试剂的稳定性、灵敏度,重度性,分辨率等项指标均优于进口的茚三酮试剂,统计结果,说明用自制的茚三酮试剂取代进口的茚三酮试剂是可靠和可行的。     

氨基酸的离子交换色谱(理论原理和实践)(续)

<正> 五、洗脱液中氨基酸的定量测定洗脱液中氨基酸的定量测定是根据洗脱液中各组分与各种显色试剂(见第一章)反应时产生的颜色强度借助光电比色计进行测量的。适合于此目的所有显色试剂中,象上面指出的最有效的是茚三酮。这种制备简单,使用方便,重复性好的茚三酮试剂由Moore 和Stein 首先提出。作为这种方法的还原剂采用氢化茚三酮—茚三酮的还原形。如所周知,在与氨基酸相互作用时茚三酮形成带颜色的物质—双配位茚酮胺(Ⅲ)和醛     

茚三酮与氨基酸显色反应再探

<正> 一、前言迄今为止,茚三酮与氨基酸显色反应的机理仍不十分清楚。尤其已报道的操作中,该反应对各种氨基酸选择性极低,因而使本法的应用受到了一定限制。此外,据文献报道:茚三酮与氨基酸显色反应不仅仅发生于α-氨基酸、对于β氨基酸、伯胺类等亦能进行;金属离子会干扰显色反应等。对茚三酮与氨基酸显色反应进行深     

蛋白质酸水解液用过甲酸氧化处理对胱氨酸的测定

<正> 蛋白质在酸水解过程中,其中的半胱氨酸和胱氨酸易受到氧化而破坏。特别是在用茚三酮显色反应来检测氨基酸的柱层析法中,半胱氨酸不与茚三酮产生显色反应,因而对它无法测定。所以在测定这两个氨基酸时,通常采用过甲酸氧化法。即用过甲酸将蛋白质中的这两个氨基酸氧化为半胱磺酸进行测定。但这一方法操作烦杂,其中的过甲酸不易除去,而会在酸水解过程中使     

稻米赖氨酸快速测定条件的探讨

以氨基酸自动分析仪测定稻米赖氨酸含量为参照标准。在“茚三酮测定赖氨酸含量”(A法)的基础上,对该法中大米蛋白质的提取温度和时间、色温度和时间及茚三酮用量等条件进行了探讨,提出了稻米赖氨酸含量快速测(B法)。提取条件为90℃5分钟,显色条件为90℃20分钟;茚三酮试剂用1 ml。用B法对10个大米样品进行测定,赖氨酸含量与氨基酸分析仪测得的赖含量基本上一致,无显著差异(P>0.05)。     

一种简易的picomole水平的氨基酸定量测定法

茚三酮显色法,是氨基酸分析仪最早使用和经常使用的检测方法,但是用此法检测,氨基酸分析仪,灵敏度通常限制在nanomole水平。Beckmen 121M和D-500型氨基酸分析仪的比色分析据称能在100p mol水平进行,但这已是灵敏度的极限。随着荧光技术的应用和发展,荧光检测技术与氨基酸分析仪相结合,与高效液相色谱相结合,使氨基酸、多肽和蛋白质的检测灵敏度达到Pmol水平。本文介绍一种简单易行的改进方法,即用邻苯二甲醛/β-巯基乙醇(OPA/ME)试剂代替     

茚三酮直接加入展开剂显色的探索

在纸层析和薄层层析中,经典显色法是用显色剂对晾干后的层析谱进行喷显。1984年,朱婉华用微晶纤维素薄层层析法分析氨基酸,将茚三酮直接加进展开剂内,在展开过程中显色,获得成功。最近,我们用纸层析     

纤维素板微量氨基酸的分离及几种显色方法的比较

氨基酸分析是研究蛋白质化学的最基本的实验技术之一。现在已经普遍地使用离子交换层析、纸层析、纸电泳、薄层层析等方法分离、分析氨基酸。其中自动化的离子交换层析方法分析具有快速、微量和准确等特点,但需要昂贵的仪器设备,在一般实验室里不易办到。纸层析和薄层层析的方法,设备要求简单,操作方便,操作熟练时也可达到定量的要求。也可以用纤维素薄层层析的方法分离分析氨基酸,并已用于尿和血样品以及其他蛋白质中的氨基酸测定。经我们初步摸索,使用一种小型的纤维素板层析,并将茚三酮试剂直接加入展层溶剂中,蛋白质经酸水解后,可得到完全分开的普通     

关于茚三酮法测定脯氨酸含量中脯氨酸与茚三酮反应之探讨

测定脯氨酸含量的方法通常用磺基水杨酸或酒精提取再与酸性茚三酮反应生成稳定的红色产物,然后于波长520 nm处比色,通过标准曲线或回归方程计算脯氨酸的含量.关于其测定原理,一些植物生理学实验指导明确指出:"在酸性条件下,脯氨酸和茚三酮反应生成稳定的红色产物,用比色法于520 nm波长下测定脯氨酸的含量."[1,2]然而,在各种生物化学教科书[3～6]中描述氨基酸茚三酮反应时,则为:"在弱酸性条件下,2个亚氨基酸--脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应并不释放NH3,而直接生成黄色化合物,其结构式如图1,最大光吸收在440 nm."为了对两种教材中不同的说法进行比较,我们查阅了各种文献,设计一些试验并进行了验证.     

氨基酸的气相色谱(一)

<正> 1.引言: 2.历史的或探索的方法,特殊的和有限的应用2.1.茚三酮氧化2.2.α氯氨基酸甲酯2.3.2.4—二硝基苯氨基酸甲酯2.4.苯乙内酰硫脲氨基酸2.5.N.N—二甲基氨基酸甲酯2.6.α—羟基氨基酸2.7.N—二乙基磷酸氨基酸甲酯     

氨基酸的气相色谱(一)

<正> 1.引言: 2.历史的或探索的方法,特殊的和有限的应用2.1.茚三酮氧化2.2.α氯氨基酸甲酯2.3.2.4—二硝基苯氨基酸甲酯2.4.苯乙内酰硫脲氨基酸2.5.N.N—二甲基氨基酸甲酯2.6.α—羟基氨基酸2.7.N—二乙基磷酸氨基酸甲酯     

植物组织内氨基酸组分和含量的测定

本文介绍应用氨基酸分析仪测定两种植物组织内游离氨基酸和组成蛋白质的氨基酸含量的基本方法。基本结构和分析原理氨基酸分析仪是由缓冲液和茚三酮输送泵、自动加样器、分析层析柱、反应器、比     

一种通用的氨基酸生产菌筛选法

<正> 在氨基酸育种工作中,高产菌株的筛选是项困难的工作。因为平板上的菌落分泌的氨基酸无法直接显色,所以通常不能在平板上直接筛选产生氨基酸的菌株。氨基酸生产菌的筛选一般是在平板上挑取带有定向育种标记的单菌落,接种到大试管或三角瓶中摇瓶发酵,发酵结束后取各个样品点在滤纸上,然后用相应氨基酸的待殊茚三酮显色反     

植物组织中游离氨基酸的微量滴定法

在植物营养及代谢的研究中,氨基酸的定量测定具有一定的重要性。过去文献所载的氨基酸测定法很多,如 S(?)renson 甲醛滴定法、Van Slyke 氮气测定法、水合茚三酮比色法及其它比色法等。但这些方法用来测定植物组织中的游离氨基酸时,常会因为样品含量过低而得不到满意的结果。Pope 及 Stevens 曾提出用碘量法来测定氨基酸的铜盐,后又由 Schroeder 等对他们     

黑龙江林蛙不同部位中氨基酸的含量分析

采用茚三酮柱后衍生-氨基酸分析法,对黑龙江林蛙油、卵、皮中17种氨基酸的组成和含量进行测定。结果显示黑龙江林蛙油、卵、皮均含有17种氨基酸,氨基酸总量分别为356.5 mg.g-1,525.1 mg.g-1,752.5 mg.g-1,其中必需氨基酸分别占氨基酸总量的46.06%,38.89%,33.33%。通过对黑龙江林蛙油、卵、皮中氨基酸含量的对比分析,表明林蛙油中氨基酸的营养价值最高。     

乌梢蛇氨基酸图谱研究

目的建立乌梢蛇的氨基酸指纹图谱。方法采用L-8800型全自动氨基酸分析仪提取乌梢蛇水解氨基酸。色谱条件:分离柱直径4.6mm×40mm,离子交换树脂型,缓冲液流速0.4ml/min,茚三酮流速0.3ml/min;缓冲液泵压力茚三酮泵压力8~11.5Pa;柱温56℃。结果建立16个共有特征峰的水解氨基酸指纹图谱。结论本研究有助于提高乌梢蛇药材的质量控制水平。