共查询到20条相似文献,搜索用时 31 毫秒
1.
大鼠诱导型一氧化氮合酶基因转录调控区的克隆与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
采用单特异引物PCR克隆法,得到大鼠诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转录调控区DNA片段。核酸序列分析证实,大鼠iNOS基因的5'-侧翼区含有IFN-γ和TNF-α应答元件及NF-kB结合位点的保守序列。这些保守序列的位置及排列显区别于人和小鼠的iNOS基因。电泳迁移率改变分析(EMSA)表达,VSMC受IL-1和IFN-γ刺激后,细胞核内产生某种可与iNOS基因5'-侧翼区特异结合的核蛋白因 相似文献
2.
优化mRNA翻译起始区提高人粒—巨噬细胞集落刺激因子在E.coli… 总被引:2,自引:0,他引:2
人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是一种重要的造血生长因子。利用基因重组技术构建两个hGM-CSF的E.coli表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对mRNA翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变(hGM-CSF(M)),另一个为未突变的对照(hGM-CSF(N))。经酶切电泳、DNA测序、SDS-PAGE和Western blot等未突变的对照(hGM-CSF(N))。经酶切电泳、D 相似文献
3.
采用单特异引物PCR克隆法,得到大鼠诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转录调控区DNA片段.核酸序列分析证实,大鼠iNOS基因的5′-侧翼区含有IFN-γ和TNF-α应答元件及NF-κB结合位点的保守序列.这些保守序列的位置及排列显著区别于人和小鼠的iNOS基因.电泳迁移率改变分析(EMSA)表明,VSMC受IL-1和IFN-γ刺激后,细胞核内产生某种可与iNOS基因5′-侧翼区特异结合的核蛋白因子. 相似文献
4.
几种细胞因子对HSV—1感染单核巨噬细胞的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
以HSV-1接种人单核细胞系U937和小鼠腹腔巨噬细胞,并在接种前后分别以不同的细胞因子处理,经病毒滴定,免疫荧光试验检测病毒抗原及多聚酶链反应技术检测病毒基因研究了细胞因子对HSV-1感染单核巨噬细胞的影响。结果证实,TNP-α50u/mL,M-CSF200u/mL,IFN-γ1000u/mL,IFN-α1000u/mL均能增强单核巨噬细胞对HSV-1的抗性,加速细胞对HSV-1DNA的清除,抑 相似文献
5.
福尔马林固定云南鲴的DNA提取及其细胞色素b基因序列分析 总被引:12,自引:0,他引:12
福尔马林固定云南鲴的DNA提取及其细胞色素b基因序列分析DNAEXTRACTEDFROMFORMALIN-FIXEDXenocyprisyunnanensisANDSEQUENCEANALYSISOFITSCYTOCHROMEBGENE关键词福尔马林... 相似文献
6.
通过RNA印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查TNF-α、IL-1β和LPS对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达及NO生成的影响.结果表明,TNF-α、IL-1β和LPS均能显著诱导VSMCiNOS基因表达和促进NO生成,其作用强度与浓度和作用时间有关;双因素(TNF-α+LPS,LPS+IL-1β)对诱导iNOS基因表达及NO生成产生协同作用.PolymyxinB和地塞米松可部分抑制TNF-α对iNOS基因表达的诱导作用及NO生成 相似文献
7.
一氧化氮合酶的研究进展 总被引:4,自引:0,他引:4
一氧化氮是由L-精氨酸和氧分子在一氧化氮合酶及其辅因子NADPH、FAD、FMN、CaM和BH4催化作用生成的;NOS分为原生型和诱生型NOS,原生型NOS活性依赖于胞浆内Ca^2+水平,诱生型NOS是Ca^2+/CaM非依赖性酶,其活性开关是胞内nNOS mRNA水平,NOS可在多个水平被调节;NOS可能在心血管疾病的发病中起重要作用。 相似文献
8.
选用烧伤复合内毒素血症大鼠模型,应用免疫组化LSAB法观察肝、肾组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的定位分布与含量变化。结果表明:在肝损伤中,iNOS主要定位于肝窦内皮细胞、枯否细胞和肝细胞胞浆,在损伤严重时,定位于多发性、溶解性坏死灶内残留的窦内皮细胞、巨噬细胞、中性粒细胞以及坏死灶基质内。在肾损伤中,iNOS主要定位于肾小管上皮细胞胞浆。并且iNOS与TNF-α、IL-6的蛋白和基因表达密切相关。提示:iNOS及合成产物NO在烧伤复合内毒素性脏器损伤中起着重要作用,并推测NO可能是单核/巨噬细胞激活反应的信号传导分子之一 相似文献
9.
高效毛细管电泳在DNA序列分析中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
高效毛细管电泳在DNA序列分析中的应用种康(兰州大学化学系,兰州730000)APPLICATIONOFHIGH-PERFORMANCECAPILLARYELECTCTORHORESISONDNASEQUENCING¥ChongKang(Depart... 相似文献
10.
TNF—α—IL—1β及LPS对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的… 总被引:1,自引:0,他引:1
通过RNA印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查TNF-α、IL-1β和LPS对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)诱导型一氧化氮合酶基因表达及NO生成的影响,结果表明,TNF-α、IL-1β和LPS均能显诱导VSMCiS基因表达和促进NO生成,其作用强度与浓度和作用时间有关;双因素(TNF-α+LPS,LPS+IL-1β)对诱导iNOS基因表达及NO生成产生协同作用,PolymyxinB和地塞米松可部分凶制 相似文献
11.
人血小板生成素(hTPO)的cDNA克隆,序列测定及其在COS—7细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
本文利用反转录PCR技术从人胎肝mRNA中分别扩增出hTPO N-端和C-端两个cDNA片段,然后经酶切分别连接重组到质粒pUC19中进行序列分析,在确证其序列与国外文献报道完全一致的基础上,酶切、回收、连接其N-端、C端cDNA,并以此为模板,用PCR法扩增出全长TPOcDNA片段,并将其重组到穿梭质粒pSVK3中,在COS-7中进行了瞬时表达并检测出表达产物的活性 相似文献
12.
逆转录病毒载体介导诱导型NO合酶在神经细胞中表达 总被引:4,自引:0,他引:4
为了深入研究诱导型一氧化氮合酶基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用,采用脂质体介导基因转染技术,将iNOS cDNA重组逆转录病毒载体导入NG108-15神经细胞,获得G418抗性克隆,命名为NG-LNCXiNOS细胞。DNA印迹杂交,PCR扩增及RT-PCR和蛋白质免疫印迹杂交分析,证实NG-LNCXiNOS细胞有外源iNOS基因整合,转录和表达;NADPH黄递酶(NADPH diaphorase 相似文献
13.
以HSV─1接种人单核细胞系U_(937)和小鼠腹腔巨噬细胞,并在接种前后分别以不同的细胞因子处理。经病毒滴定、免疫荧光试验检测病毒抗原及多聚酶链反应技术检测病毒基因,研究了细胞因子对HSV─1感染单核巨噬细胞的影响。结果证实,TNF─α50u/mL 、M─CSF200u/mLIFN─γ1000u/mL、IFN-α1000u/mL均能增强单核巨噬细胞对HSV─1的抗性,加速细胞对HSV─1DNA的清除,抑制病毒抗原的表达;并能拮抗LPS对HSV─1在单核巨噬细胞中表达的促进作用。 相似文献
14.
利用人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)cDNA3′端非翻译区(3′-UTR)中存在的DraⅠ酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除3′-UTR不同长度,构建了四种hG-CSFcDNA瞬时重组表达质粒。转染COS-7细胞后,生物活性测定结果提示,hG-CSFcDNA3′-UTR对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子TGA下游的65bp范围内,3′-UTR对hG-CSFcDNA表达的影响与转录水平的差别有一定关系。 相似文献
15.
利用人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF()cDNA3'端非翻译区(3'UTR)中存在的DraI酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除3'-UTR不同长度构建了四种hG-CSF cDNA瞬时重组表达质粒,转染COS-7细胞手,生物活性测定结果提示,hG-CSFcDNA3'-UTR对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子TGA下游的65bp范围内,3'-UTR对hG-CSF cDNA表达的 相似文献
16.
老年大鼠单核/巨噬细胞分泌和表达肿瘤坏死因子增多 总被引:2,自引:0,他引:2
为研究老年时肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌及表达的改变,在内毒素(LPS)1.0μg/ml刺激大鼠单核/巨噬细胞后,用酶联免疫法(ELISA)测定培养液中TNF-α含量,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCK)测定TNF-αmRNA。同时测定培养液中一氧化氮(NO)和前列腺素I2(PGI2)的含量。结果显示:老年鼠TNF-α分泌量及其mR-NA明显高于青年鼠。NO产量在老年鼠与青年鼠之间无明显差异。老年鼠PGI2分泌明显低于青年鼠。由于PG能抑制TNF-α释放,从而推测,PGI2产生能力的降低可能是老年大鼠单核/巨噬细胞TNF-α分泌量明显高于青年鼠的原因之一。 相似文献
17.
18.
利用酸性异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法从人胎儿基底前脑中提取总RNA,用逆转录与聚合酶链反应相结合的RT-PCR法,扩增出人神经生长因子低亲和力受体p~(75)NGFR基因cDNA,在限制性内切酶SmaⅠ存在下的连接体系中,将扩增出的cDNA片段克隆入pUC12的SmaⅠ位或,经限制性内切酶EcoRⅠ和PstⅠ酶切鉴定是否插入以及HindⅢ酶切鉴定方向。将重组质粒中的p~(75)NGFR的cDNA再次亚克隆至pUC12载体中后,以其双链DNA为模板,用末端终止法测出其全部核苷酸顺序,证实其核苷酸编码的p~(75)NGFR除两个碱基突变外,其余与文献完全一致。完整的p~(75)NGFR的cDNA分两步克隆到逆转录病毒表达载体pXT-1,经PA317包装细胞株体外包装后、收集病毒上清转染条件不死性大鼠小脑神经细胞系R2.初步结果表明转染了p~(75)NGFR的R2细胞株去除NGF培养时出现程序化死亡的典型特征梯型DNA带。 相似文献
19.
20.
人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是一种重要的造血生长因子.利用基因重组技术构建两个hGM-CSF的E.coli表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对mRNA翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变(hGM-CSF(M)),另一个为未突变的对照(hGM-CSF(N)).经酶切电泳、DNA测序、SDS-PAGE和Westernblot等分析鉴定,证明两者均能表达特异性的14.6kDhGM-CSF,但hGM-CSF(M)的表达水平较hGM-CSF(N)提高了1.26倍,占菌体总蛋白的16.9%.mRNA翻译起始区二级结构预测分析表明,优化突变后生成自由能ΔG从原来的-10.2提高至-9.4Kcal,AUG从部分配对状态变为非配对状态. 相似文献