自发性高血压大鼠中血小板源生长因子—AA及其受体表达与血管平滑机细胞增殖的关系

为明确血小板源生长因子 AA(plateletderivedgrowthfactor AA ,PDGF AA)及PDGF α受体在自发性高血压大鼠 (spontaneouslyhypertensionrats,SHR)血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖中的作用 ,采用Westernblot、[3 H]TdR及 [3 H]Leu掺入率等方法 ,观察在SHR和WKY大鼠VSMC中PDGF AA及PDGF受体表达的差异 ;在PDGF AA刺激下VSMC增殖和肥大反应的变化。结果显示 ,SHR VSMC中PDGF AA、PDGF α受体蛋白表达明显高于WKY VSMC(P <0 0 1) ,而PDGF β受体蛋白表达在SHR VSMC与WKY VSMC无明显差异 ;在不同浓度PDGF AA刺激下 ,增殖细胞核抗原 (PCNA)及3 H掺入率在SHR VSMC明显增强且呈剂量依赖性增加 (P <0 0 1)。本研究表明PDGF A链及其α受体的自泌性增高 ,可能是导致SHR VSMC异常增殖和肥大 ,并导致血管构型变化的重要原因之一     

黄酒中抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移成分探讨

目的:探索黄酒中具有抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移作用的活性成分。方法:SD大鼠主动脉VSMCs原代细胞培养鉴定,取4~7代细胞用于实验。VSMCs分为control组、Hcy(浓度为1 mmol/L)组、低聚糖组(Hcy+黄酒低聚糖)、多肽组(Hcy+黄酒多肽)、多酚组(Hcy+黄酒多酚)、酒精组(Hcy+酒精)、黄酒组(Hcy+黄酒)共7组。MTT法检测各组VSMCs的增殖情况;划痕法和Transwell法检测各组VSMCs的迁移情况;Western blot法检测各组VSMCs中基质金属蛋白酶-2/9(MMP-2/9)、基质金属蛋白酶的组织抑制剂-2(TIMP-2)的表达情况;明胶酶谱检测各组VSMCs中MMP-2/9的活性。结果:与control组相比,Hcy组VSMCs增殖迁移增加、MMP-2/9表达和活性增加(P0.01)。与Hcy组相比,多肽组、多酚组、黄酒组VSMCs增殖迁移减少、MMP-2/9表达和活性减少(P0.05)。各组之间TIMP-2的表达没有显著差异。结论:黄酒中的多肽类和多酚类成分具有抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移的作用。     

羟基红花黄色素A抑制PDGF促大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

羟基红花黄色素A是从活血化瘀中草药红花中分离出来的黄酮类化合物,研究发现其对心血管疾病具有很好的治疗作用,但该化合物对血管增生性疾病的防治机理还不清楚。该研究通过采用大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)培养、MTT分析、Western blot、免疫组织化学等方法研究羟基红花黄色素A对VSMCs增殖的影响及其作用机制。实验结果表明,羟基红花黄色素A浓度依赖性地抑制血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导的VSMCs增殖,降低增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,阻断PDGF受体的激活和MEK/ERK信号通路的活化。该研究证实,羟基红花黄色素A通过降低PCNA表达和阻断MEK/ERK1/2信号通路抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

瘦素对血管平滑肌细胞核转录因子κB的影响

目的探讨瘦素(leptin)对血管平滑肌细胞(VSMCs)核转录因子(NF-κB)的影响。方法贴块法原代培养VSMCs;分别采用MTT法检测leptin对VSMCs增殖活性的影响,免疫荧光-共聚焦显微镜和蛋白印迹技术检测Lep-tin对VSMCs中NF?κB的细胞内定位和VSMCs核中NF?κB的蛋白含量。结果leptin对VSMCs具有促进细胞增殖的作用,这种促增殖活性具有剂量依赖性;Leptin能促进VSMCs中的NF?κB从胞质转移至细胞核,并且这种作用也具有剂量依赖性。结论Leptin能促进VSMCs增殖,能激活VSMCs中NF?κB,使其从胞质转位至胞核;同时,目前已有的研究已经证明NF?κB与平滑肌细胞的增殖和迁移关系密切,提示Leptin促进VSMCs的增殖作用中可能有NF?κB信号传导通路的参与。     

不同浓度血府逐瘀汤含药血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的观察不同浓度血府逐瘀汤含药血清对大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMCs）增殖、迁移及侵袭的影响,以及其生成一氧化氮（NO）的情况。方法用MTT法观察VSMCs的增殖,Transwell小室法观察VSMCs的迁移、侵袭,并检测培养上清液一氧化氮（NO）的含量。结果与空白对照组比较,5%血府逐瘀汤组能显著促进VSMCs的增殖（P〈0.05）,20%,30%血府逐瘀汤组能显著抑制VSMCs的增殖（P〈0.05）;与空白对照组比较,培养48 h的培养上清液中,血府逐瘀汤组的NO水平有显著升高（P〈0.01）,且与血府逐瘀汤含药血清的浓度有剂量依赖关系。结论低浓度（〈10%）血府逐瘀汤含药血清有促进VASMCs增殖和迁移、侵袭的作用,高浓度（〉10%）血府逐瘀汤含药血清有抑制VASMCs增殖、迁移和侵袭的作用,其作用可能与上清液的NO水平有关。     

血管损伤的新靶点：干扰素调节因子

内膜增生是血管损伤后动脉重塑过程中普遍存在的现象。血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）的增殖、迁移、表型转换是血管损伤性疾病高血压、动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄等的共同病理生理学过程。干扰素调节因子（interferon regulatory factors,IRFs）是一类能对干扰素基因表达起到免疫调节作用的转录因子。近来研究发现,其在血管损伤病理过程具有调节作用,其中IRF1与细胞生长、分化和损伤密切相关,IRF3与IRF7可以抑制新生内膜的形成,而IRF8和IRF9则促进VSMCs增殖、迁移及血管内膜增生。本文重点介绍了IRFs的结构特征、信号途径及在血管重塑过程中作为新型调控因子的功能。     

外加直流电场对血管平滑肌细胞形态及迁移行为的影响

在外加直流电场(electricalfields,EFs)作用下血管平滑肌细胞(VSMCs)膜表面细胞生长因子受体表达发生明显的变化,并影响细胞形态、迁移的特性。通过EFs干预装置干预体外培养的大鼠主动脉VSMCs,记录和分析细胞图像,研究不同强度电场、不同作用时间下VSMCs迁移和细胞形态的变化,并用免疫细胞化学或免疫荧光染色方法检测与VSMCs迁移相关的血小板衍化生长因子受体(PDGFR)、血管紧张素II1型受体(AT1R)和2型受体(AT2R)等受体的表达情况,研究EFs影响VSMCs形态及迁移的机制。研究结果提示,在EFs干预作用下,VSMCs膜PDGFR表达增加,部分细胞呈不对称分布,在EFs阴极面较集中;细胞中AT1R表达亦增加,但无明显不对称分布现象;AT2R表达没有改变;EFs长时间作用下,培养的VSMCs有明显的电场趋化性,细胞向阴极迁移的距离明显高于无EFs作用对照组,细胞膜向阴极方向伸展,发生形状改变,定向迁移依赖于EFs强度。EFs作用下,部分细胞生长因子受体的表达上调和重分布,可能与细胞定向迁移的启动和维持有关。     

血小板来源的生长因子通过ERK/p38/PI3K促进人视网膜色素上皮细胞的增殖、迁移

目的:探讨血小板来源的生长因子(PDGF)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(RPE)增殖和迁移的影响,并对参与其中的信号通路做初步研究.方法:体外培养的人视网膜色素上皮细胞与含有重组人血小板来源的生长因子的培养基(含有或不含2％(v/v)胎牛血清)共培养,用MTT法检测PDGF对RPE细胞增殖的影响,利用细胞爬片和免疫荧光技术检测PDGF对RPE细胞迁移等影响;另外分别向细胞培养物中添加PD98059,SB203580和PI3K等不同的信号通路分子抑制剂,判断参与PDGF激活的细胞活动相关的信号通路.结果:外源性PDGF能促进体外培养的人RPE的增殖和迁移.ERK1/2选择性抑制剂PD98059和PI3K抑制剂LY294002能显著的降低PDGF-BB诱导的人RPE细胞的增殖(P＜0.05),p38抑制剂SB203580没有明显的抑制作用.而对PDGF-BB诱导的RPE细胞的迁移,SB203580和LY294002有显著的抑制作用(P＜0.05),PD98059抑制作用不显著.结论:PDGF对RPE细胞的影响提示其在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的发展中有重要的作用,其可能为PVR提供一种新的毒副作用小的治疗手段.     

Myocardin在血管平滑肌细胞表型转化中的作用

近年来大量的实验研究表明,血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖和迁移是各种血管疾病,包括动脉粥样硬化斑块形成、高血压、血管成形术后再狭窄等的病理基础。而血管平滑肌细胞的表型转化在其增殖和迁移中发挥着重要的作用。心肌素(myocardin)是迄今为止发现的最关键的促血管平滑肌细胞分化的转录因子,能有效激活平滑肌细胞(SMCs)的分化程序。近年来,人们对心肌素在平滑肌细胞表型转化过程中的功能进行了深入研究。现对血管平滑肌细胞的表型转化以及心肌素在血管平滑肌转化中的作用作一综述。     

Gαq/11 和 PDGF依赖性信号转导通路在大鼠主动脉再狭窄中的作用

采用大鼠主动脉球囊内皮剥脱术制备主动脉狭窄模型,观察Gαq/11和PDGF信号转导通路在大鼠主动脉球囊损伤后狭窄时血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移中的作用.实验分假手术组、损伤1 d组和损伤14 d组,观察形态学变化,检测血管紧张素转换酶(ACE)活性和主动脉磷脂酶C(PLC)活性,用免疫印迹法测定主动脉血小板源生长因子(PDGF)受体β和Gαq/11蛋白含量.结果显示:损伤1 d,主动脉内皮完全剥脱,VSMC无明显增殖和迁移,内膜无增厚.与假手术组比较,ACE活性增加382.7%(P＜0.01),PDGF受体β表达和PLC活性无明显变化,Gαq/11蛋白含量下降20.0%(P＜0.05).损伤14 d组,主动脉局部有新生内皮出现,中层VSMC大量增殖并向内膜下迁移,内膜显著增厚.ACE活性、PDGF受体β表达和PLC活性分别较假手术组升高420.2%(P＜0.01)、85.0%(P＜0.05)和186.2%(P＜0.05),Gαq/11蛋白表达下降33.1%(P＜0.01).结果提示,PDGF介导的信号转导通路可能是再狭窄时VSMC增殖的重要信号转导机制.     

Caveolin-1蛋白在17β-雌二醇抑制内皮素-1诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用

本工作旨在研究Caveolin-1在17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)抑制内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用.在培养的VSMCs上,使用[3H]Thymidine([3H]TdR)掺入法、荧光免疫组化方法和Western blot观察E2处理VSMCs前后ET-1对DNA合成和caveolin-1蛋白表达的影响.结果显示,ET-1可以刺激VSMCs增殖.E2作用24 h后,可明显抑制ET-1的上述作用.免疫荧光证实,在VSMCs上有caveolin-1分布,ET-1刺激VSMCs增殖的过程中,VSMCs上caveolin-1蛋白荧光强度下降,而事先给予E2可逆转这种下降.Western blot证实,ET-1可抑制caveolin-1蛋白的表达而E2则可增加caveolin-1蛋白的表达.以上结果表明E2抑制ET-l诱导的VSMCs增殖可能与其增加caveolin-1蛋白表达有关.     

血小板源生长因子-AA对高血压血管平滑肌细胞钙信号的影响

目的 :明确自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞 (SHR VSMC)增殖与血小板源生长因子 AA(PDGF AA)、PDGF α受体表达的关系及钙信号在其中的作用。方法 :在培养的血管平滑肌细胞模型中 ,采用免疫印迹 (Westernblot)、3 H TdR及3 H Leu掺入、荧光探针标记测定单细胞内钙浓度等方法 ,观察不同来源大鼠 (SHR/WKY)VSMC ,PDGF AA、PDGF α受体和PDGF β受体表达的差异性以及在PDGF AA刺激下 ,VSMC增殖肥大反应、胞内 [Ca2 ]i变化和钙离子阻断剂 (nimodipine)对其的影响。 结果 :与WKY VSMC相比SHR VSMC中PDGF AA、PDGF α受体蛋白表达明显增加 ,而PDGF β受体蛋白表达在SHR VSMC与WKY VSMC无明显变化。在PDGF AA刺激下 ,增殖细胞核抗原 (PCNA)、3 H掺入率及胞内 [Ca2 ]i浓度在SHR VSMC明显增强 ;钙离子阻断剂 (nimodipine)明显抑制PCNA表达及3 H掺入 ,胞内 [Ca2 ]i浓度明显下降。结论 :自发性高血压大鼠VSMCPDGF A链及其α受体的自发性增高 ,可能是导致SHR VSMC异常增殖、肥大 ,从而触发血管反应性和血管构型变化的重要原因之一 ;细胞膜钙通道在调控VSMC的钙内流时起主要作用     

Krüppel样因子5介导血管平滑肌细胞的增殖和迁移

Krüppel样因子5（krüppel-like factor 5,KLF5）是KLF家族中与胚胎发育、细胞增殖和肿瘤发生密切相关的转录调节因子。为观察KLF5在体外培养的大鼠血管平滑肌细胞（vascularsmooth muscle cells,VSMCs）增殖和迁移活性中的作用,通过构建KLF5腺病毒表达载体并感染细胞以过表达KLF5或用特异性siRNA敲低KLF5,用MTT、流式细胞术以及免疫细胞化学染色和伤口愈合实验检测其对VSMCs增殖和迁移活性的影响。结果发现,KLF5过表达可加速细胞由G0/G1期向S期转变,促进细胞增殖和迁移;反之,敲低KLF5后细胞增殖活性明显低于转染无关序列NS-siRNA对照组细胞,G0/G1期细胞数所占比例增多,S期细胞数所占比例减少,VSMCs迁移活性也明显降低。结果表明KLF5可参与介导VSMCs的增殖和迁移。     

自发性高血压大鼠中血小板源生长因子-AA及其受体表达与血管平滑肌细胞增殖的关系

为明确血小板源生长因子-AA(platelet derived growth factor-AA,PDGF-AA)及PDGF-α受体在自发性高血压大鼠(spontaneously hypertension rats,SHR)血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用,采用Western blot、 [3H]TdR及 [3H]Leu掺入率等方法,观察在SHR和WKY大鼠VSMC中PDGF-AA及PDGF受体表达的差异; 在PDGF-AA刺激下VSMC增殖和肥大反应的变化.结果显示,SHR-VSMC 中PDGF-AA、PDGF-α受体蛋白表达明显高于WKY-VSMC(P<0.01),而PDGF-β受体蛋白表达在SHR-VSMC与WKY-VSMC无明显差异; 在不同浓度PDGF-AA刺激下,增殖细胞核抗原(PCNA)及3H掺入率在SHR-VSMC明显增强且呈剂量依赖性增加(P<0.01).本研究表明PDGF-A链及其α受体的自泌性增高,可能是导致SHR-VSMC异常增殖和肥大,并导致血管构型变化的重要原因之一.     

平滑肌22α蛋白在血管稳态和血管重构中的作用

有关血管稳态和重构的分子机制一直是近年来的研究热点,也被视为治疗血管损伤性疾病的突破点.大量研究证实,血管损伤修复及病理性重构过程与血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的表型转化、异常增殖与迁移、细胞衰老关系密切.平滑肌22α(smooth muscle 22α,SM2...     

胚胎干细胞SM22α-EGFP表达克隆的建立及平滑肌细胞体外发育的动态观察

为探讨血管发育早期血管平滑肌细胞(VSMCs)募集和增殖特点,构建了含有SM22α启动子序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码序列的质粒,建立了平滑肌特异性蛋白SM22α启动子控制下稳定表达EGFP的胚胎干细胞株(ESCs),以研究VSMCs的发育特点.实验发现,起源于SM22α-EGFPESCs形成的胚胎小体(EBs)在第11天开启SM22α启动子并表达EGFP.此后EGFP阳性细胞持续增加,在第30天达到高峰.VSMCs多起源于EBs中细胞密集处,应用免疫荧光染色及RT-PCR观察到EGFP阳性细胞表达多种平滑肌特异性标志物.在贴壁培养的胚胎小体中VSMCs形态可分为纺锤形及上皮样的多角形,慢速视频显微摄像测得纺锤形细胞迁移速度较上皮形细胞快.以上结果表明,SM22α-EGFPESCs分化形成的EBs可以模拟体内早期胚胎血管形成过程,从形态学上获得VSMCs募集分化的证据.     

血管平滑肌细胞在自发性高血压大鼠颈动脉重构中的作用及替米沙坦的干预研究

观察血管平滑肌细胞(VSMCs)在自发性高血压大鼠(SHR)颈动脉重构中的作用及替米沙坦的干预效果.将30只12周龄的SHR随机分为高血压组(SHR)、替米沙坦高剂量组(TelH)、替米沙坦低剂量组(TelL),另设同性别、周龄的WKY大鼠为对照组(n=10),干预18周.观察各组大鼠收缩压(SBP)、颈动脉中膜厚度(MT)、中膜横截面积(MCSA)、中膜细胞平均核面积、颈动脉 VSMCs增殖指数(PI)及凋亡指数(AI)等的变化.结果显示: ①两周后TelH组SBP明显低于SHR组(P＜0.01),其降压作用持续至实验结束,而TelL组SBP与SHR组无显著性差异(P＞0.05);②SHR组的MT、MCSA分别明显高于WKY组(P＜0.01),TelH组的MT、MCSA分别明显低于SHR组(P＜0.01),TelL组的MT明显低于SHR组(P＜0.05);③SHR组中膜VSMCs平均核面积明显大于WKY组(P＜0.01),而TelH、TelL组分别小于SHR组(P＜0.05);④各组颈动脉中膜VSMCs的PI均无明显差异(P＞0.05);SHR组颈动脉中膜VSMCs的AI明显低于WKY组(P＜0.01),而TelH、TelL组明显高于SHR组(P＜0.01);SHR组颈动脉中膜VSMCs的PI/AI明显高于WKY组(P＜0.01),而TelH、TelL组明显低于SHR组(P＜0.01);⑤颈动脉中膜VSMCs的AI与中膜MCSA呈显著负相关(r = -0.871,P＜0.01 ).说明VSMCs的肥大和增殖/凋亡失衡可能在SHR颈动脉重构中起重要作用,替米沙坦除降压作用外,能通过减轻VSMCs肥大,增加VSMCs凋亡,使增殖/凋亡趋于平衡而减轻其重构.     

17β—雌二醇下调血管平滑肌内皮素A型受体的表达

为进一步探讨雌激素对心血管的保护作用,实验在双侧卵巢去势大鼠模型和培养的血管平滑肌细胞（VSMCs)上,观察17β－雌二醇（E2）对血管反应性及VSMCs增殖的影响,以RT－PCR和Western blot检测内皮素受体（ETAR）的表达,结果显示：去势雌性大鼠血管对内皮素（ET－1）的反应性明显增高,ETAR特异性受体阻断剂BQ123能完全阻断ET－1对VSMCs增殖的影响,E2能明显抑制ET－1对VSMCs增殖的作用,RT－PCR结果显示E2能抑制ETAR mRNA的表达,Western blot进一步证实E2能抑制ETAR蛋白表达,E2受体阻断剂Tamoxifen能部分抑制ET－1对VSMCs的增殖及ETAR的mRNA和蛋白 的表达。以上结果提示;ET－1促VSMCs增殖的效应主要是由ETAR介导的,雌激素能通过下调ETAR来抑制ET－1对VSMCs 促增殖的作用和血管对ET－1的反应,且此作用与雌激素受体有关。     

大鼠肺细小动脉平滑肌细胞培养新方法的建立及血小板衍生因子对其增殖迁移的影响

目的：建立一种操作简单、实验仪器要求低的大鼠肺细小动脉平滑肌细胞（PASMCs）分离和培养的方法,并且探索血小板衍生因子（PDGF）介导的增殖、迁移的情况。方法：向右心注射铁及琼脂糖,利用琼脂糖能同时粘附血管内皮细胞、平滑肌细胞及铁粉,再结合胶原酶I的消化,通过磁力架吸引铁,特异性地分选出带血管的肺组织,经过3~4周左右的培养及纯化,得到肺细小动脉平滑肌细胞。用倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学法和免疫荧光染色法进行α-平滑肌肌动蛋白鉴定。MTT实验和划痕实验检测PDGF诱导的肺动脉细小平滑肌细胞的增殖和迁移。结果：分离后第14天、第21天及传代后进行鉴定,均表明分离培养的细胞为PASMCs。MTT结果表明,与不加PDGF组相比,PDGF增殖明显增加（P<0.05）。划痕实验结果显示PDGF刺激组比不刺激组迁移显著增多。结论：本方法分离培养大鼠的PASMCs,操作方便,实验仪器要求低。PDGF能够促进肺细小动脉平滑肌细胞的增殖、迁移。     

Caveolin-1蛋白在171β-雌二醇抑制内皮素-1诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用

本工作旨在研究Caveolin-1在17β-雌二醇（17β-estradiol,E2)抑制内皮素-1（endothelin-1,ET-1)诱导血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs前后ET-1对DNA合成和caveolin-1蛋白表达的影响。结果显示,ET-1可以刺激VSMCs增殖。E2作用24h后,可明显抑制ET-1的上述作用。免疫荧光证实,在VSMCs上有cavellin-1分布,ET-1刺激VSMCs增殖的过程中,VSMCs上caveolin-1蛋白荧光强度下,而事称给予E2可逆转这种下降。Western bolt证实,ET-1可抑制caveolin-1蛋白的表达而E2则可增加caveolin-1蛋白的表达。以上结果表明E2抑制ET-1诱导的VSMCs增殖可能与其增加caveolin-1蛋白表达有关。