反义技术研究进展

反义技术利用DNA或RNA分子通过Watson Crick碱基配对原则与目的基因的mRNA互补结合 ,通过各种机制使其降解或抑制其编码蛋白的翻译 ,从而抑制目的基因的表达。与基因敲除(geneknockout)等功能缺失性研究方法相比 ,反义技术具有投入少 ,周期短 ,操作简单等优点 ,因此受到了广泛的关注。对几种常用反义技术的研究进展及存在的问题进行概述。     

反义核酸技术应用及研究进展

伴随着先进的基因克隆和基因测序技术的出现,以及DNA合成技术的迅速发展,反义核酸技术已经渗透到了生物学的各个方面,表现出了诱人的前景。综述了反义核酸技术的作用机理及其在抗病毒、抗肿瘤、细胞凋亡、信号机制、中枢神经系统以及眼科等方面的运用以及研究进展。     

反义核酸在肿瘤研究中的应用

反义核酸研究已活跃于肿瘤研究及基因治疗领域,反义核酸通过碱基配对待异性地抑制基因表达,因此为研究肿瘤中癌基因和生长因子的功能及癌基因突变检测提供了更为有效的手段,并为肿瘤的基因治疗提供了可能途径.文章综述了反义核酸在基因治疗中所面临的问题及部分解决办法.     

反义技术在抗HBV感染中的应用

反义技术是近些年来随着现代分子生物学技术的发展而产生的新的生物医学治疗技术。它采用反义核酸分子抑制、封闭或破坏靶基因组的技术手段,包括反义寡核苷酸、核酶及RNA干扰等。反义分子通过与靶基因异性互补配对结合,阻断靶基因的复制、转录或翻译过程,从而发挥抗病毒作用。针对乙型肝炎病毒的反义技术也有了广泛而深入的研究。根据反义技术在分子、细胞以及动物水平上的研究表明：反义技术能够高效、特异地抑制HBV的复制与表达。     

锁核酸——一种新的反义寡核苷酸

1978年 ,Ｚａｍｅｃｎｉｋ等[1] 开创了根据碱基互补配对原理 ,设计反义寡核苷酸以用于基因治疗的研究。相当时间内 ,反义治疗成为研究领域的热点。至今该研究已经进行了2 0多年 ,但所取得的成果一直不令人满意。其中的一个关键问题是反义寡核苷酸的易降解及杂交结合力不强。所以 ,近十几年来 ,科学家们一直在找寻一种强有力的核苷酸替代物质。这种物质既要有强大的杂交亲合力及抗核酸酶能力 ,又必须对人体没有毒性[2 ] 。已经有很多关于各种核苷酸类似物被用于反义研究的报道 ,如硫代磷酸寡核苷酸、甲基化寡核苷酸、肽核酸 (ＰＮＡ)等。近…     

反义技术应用在细菌代谢调控中的研究进展

随着基因工程技术的蓬勃发展和代谢调控研究的深入,反义技术作为一种温和调控的基因工程技术,开始向世人展示其无穷的魅力.与基因敲除等功能缺失性研究方法相比,反义技术具有投入少、周期短、操作简单等优点,受到广泛的关注,成为细菌代谢调控的有力工具.以下对反义RNA、反义寡核苷酸,核酶这几种反义技术在细菌代谢工程操作中的研究进展及存在的问题进行了概述.     

反义核酸抗肝炎病毒研究进展

病毒性肝炎的治疗一直是困扰人类的一个难题.目前可利用的药物仍屈指可数.反义核酸技术的发展为病毒性肝炎的治疗带来了新的希望.利用反义DNA,反义RNA和核酶技术来抑制乙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒,在体外已进行了大量的研究,体内也进行了一些研究,为临床应用反义核酸治疗病毒性肝炎奠定了基础.     

反义技术研究进展

过去几年目睹了反义技术的爆炸性发展,文章较全面地评述了反义技术的主要内容和近几年来的研究进展,它们包括几类受人注意的DNA类似物、RNA和Ribozyme.。此外,基于研究现状还展示了反义技术的前景。     

反义技术及其在G蛋白研究中的应用

反义技术至少包括反义寡核苷酸技术、反义RNA技术和核酶技术.在G蛋白研究中,反义技术在G蛋白受体及受体亚型研究、G蛋白转导信号特异性研究方面及对G蛋白耦联信号传导途径与其他信号传导途径之间“cross talk”认识方面的研究中,有着广泛的应用.     

动态增强磁共振监测VEGF反义核酸对兔颌面部VX2肿瘤放疗的增敏作用

目的:研究动态增强磁共振成像(dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging,DCE-MRI)监测VEGF反义核酸对兔颌面部VX2肿瘤放疗后的影响。方法:24只颌面部VX2荷瘤兔模型随机分4组:放疗组(A组):给予16Gy放疗;VEGF反义核酸治疗组(B组):肿瘤局部注入VEGF反义核酸150μg;VEGF反义核酸联合放疗组(C组):16Gy放疗后立即局部肿瘤内注射VEGF反义核酸150μg;对照组(D组):肿瘤内注射300μl5%葡萄糖水溶液。治疗后第3天、14天分别行DCE-MRI检查,计算MER(Maximal enhancement ratio,最大强化率)及SLE(Slope of enhancement,强化率斜率)值,14天处死动物行病理检查和VEGF免疫组化染色。结果:C组治疗后14天肿瘤体积明显缩小,与治疗前和治疗后三天及其它组比较差别具有统计学意义(P<0.01)。MER值降低和SLE值降低,与治疗前比较差别有统计学意义(P<0.05)。病理切片显示肿瘤细胞水肿、出血,坏死,血管壁增厚闭塞,VEGF免疫阳性表达下降,经IHS评分与A...     

RNA干扰在植物中的作用机理及其应用研究进展

RNA干扰(RNAi)是广泛存在于生物中的一种现象,它是小干扰RNA诱导的转录后基因沉默,是生物抵抗异常DNA的一种保护机制,同时在生物生长发育过程中调控基因的表达.本文综述了近年来有关RNA干扰的发现、作用过程及其机理,分析了它与反义寡核苷酸、核酶、脱氧核酶的小同,并介绍了RNA干扰在植物基因功能、植物抗病毒、作物品种改良等方面的应用,为siRNA干扰的进一步利用提供参考资料.     

Strategies for the suppression of peroxidase gene expression in tobacco. I. Designing efficient ribozymes

Five short hammerhead ribozymes (Rzs) were constructed and tested, using a range ofin vitro reaction conditions, for catalytic activity against the mRNA encoding the lignin-forming peroxidase (TPX) of tobacco. Although all 5 Rzs were shown to be able to cleave the RNA substrate, percentage cleavage varied with pre-denaturation of Rz and substrate, incubation temperature, length of incubation and ribozyme (Rz)-to-substrate ratio. One Rz with two catalytic units and 60 nucleotides of complementary sequence in 3 regions was shown to most efficiently cleave the substrate under allin vitro conditions tested. This ribozyme cleaved better than the two single ribozymes from which it was made. The superior cleaving ability of this Rz was shown to be due to the accessibility of the chosen target site and to the increased length of the hybridizing arms spanning this accessible region of the RNA.     

基于核酸自组装纳米结构的siRNA药物递送研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)作为转录后调节机制,可靶向mRNA进行剪切降解从而发挥基因沉默效应.siRNA (small interference RNA)因其高效性和特异性而被广泛应用于药物研究中.目前,研究者们已开发了多种阳离子载体用于siRNA递送.但由于siRNA双链结构具有相对较强的刚性结构,且阴离子电荷密度较低,无法与阳离子载体形成稳定、致密的复合物,使得siRNA的应用仍面临诸多挑战,如细胞摄取率低、靶向特异性差、递送过程不稳定、潜在的细胞毒性以及易诱发免疫反应等.近年来,核酸自组装纳米结构由于其结构灵活且负电荷密度较高而受到广泛关注,有望实现siRNA药物的高效递送和基因沉默.本文综述了近年来基于核酸自组装纳米结构的siRNA递送的研究进展及其应用.     

软件预测和MAST技术筛选mRNA反义核酸靶点的比较

基因mRNA的结构靶点筛选是反义核酸药物研发的一个难题 .兔 (Oryctolaguscuniculus) β珠蛋白基因mRNA的结构靶位点通过运用MAST技术筛选获得 ,和计算机软件RNAstructure3 71模拟分析的位点进行了比较 ,也和寡核苷酸微阵列杂交技术筛选获得的靶点结果 (M .Natalie ,1 997)进行了比较 ,显示 :据MAST技术获得的兔 β珠蛋白基因 2个反义核酸结合靶位点 ,和用RNAstructure3 71软件给出的模拟分析的 2个靶位点相同 ,且它们与寡核苷酸微阵列杂交技术的结果完全一致 .运用MAST技术筛选获得绿色荧光蛋白 (GFP)mRNA有 4个结构靶位点 ,体外分析表明这 4个靶位点均有效 ,其中有 3个与RNAstructure3 71软件分析的靶点相同 ,但计算机模拟推荐的结构靶位点较多 ,而且随着基因长度增加确认靶位点的难度增大 ,获得的靶位点还需要实验验证 ,计算机软件模拟分析对实验筛选靶点、设计反义核酸有辅助价值 .MAST方法能筛选各种长度基因mRNA的全部可及位点和准确给定核苷酸的起止位置以供设计反义核酸 ,具有简单快捷的优点 ,将能为反义核酸设计起重要作用 .     

Strategies for the suppression of peroxidase gene expression in tobacco. II.In vivo suppression of peroxidase activity in transgenic tobacco using ribozyme and antisense constructs

Several strategies involving the use of antisense and ribozyme constructs in different expression vectors were investigated as methods of suppressing gene expressionin planta. We had previously identified an efficiently cleaving ribozyme (Rz), with two catalytic units and 60 nucleotide (nt) of complementary sequence, to the ligninforming peroxidase of tobacco (TPX). This Rz was cloned behind the 35S CaMV (35S) and nopaline synthase (NOS) promoters, and into a vector utilising the tobacco tyrosine tRNA for expression. For comparison with more traditional antisense strategies, full-length TPX antisense (AS) constructs were also constructed behind the NOS and 35S promoters. Populations of transgenic tobacco containing these constructs were produced and compared to control plants transformed with the vector only. Significant suppression of peroxidase expression in the range of 40–80% was seen in the T₀ and T₁ populations carrying 35S-AS, 35S-Rz and tRNA-Rz constructs. Co-segregation of the suppressed peroxidase phenotype and the tRNA-Rz transgenes was demonstrated. Northern blot analysis indicated that levels of TPX mRNA were lower in the Rz plants. No evidence of mRNA cleavage was observed and thus it was unclear if the Rz constructs were acting as Rzsin vivo. Transgenic plants containing the tRNA-Rz construct had significantly lower levels of peroxidase than the other transgenic plants. There was no significant difference in levels of suppression of TPX between the short Rz in the 35S vector and the full-length AS constructs. Although peroxidase levels were significantly reduced in transgenic plants carrying 35S-AS, 35S-Rz and tRNA-Rz constructs, no significant difference in lignin levels was observed.