中国人群家族性高胆固醇血症LDLR基因突变研究进展

家族性高胆固醇血症(Familial hypercholesterolemia,FH)主要是由于低密度脂蛋白受体(Low-density lipoprotein receptor,LDLR)基因突变导致的单基因显性遗传性疾病。FH患者LDLR基因突变导致细胞膜表面LDLR减少或缺如,机体代谢胆固醇能力降低,血浆胆固醇增高并沉积在不同的组织和器官,常伴有全身黄色瘤和早发冠心病,因此FH也是最常见的严重代谢性疾病。世界范围内对LDLR基因突变的报道总共有1741种,经整理我国目前报道的140例FH指示病例,包括108种LDLR基因突变类型。文章对已报道的中国FH患者LDLR基因突变特点进行系统分析和综述,旨在为FH诊断治疗提供参考依据。     

家族性高胆固醇血症样表型遗传异质性的分子基础

家族性高胆固醇血症(FH)是由于低密度脂蛋白受体(LDL—R)基因突变,致使细胞表面LDL-R蛋白功能缺陷,导致血浆低密度脂蛋白(LDL)大幅度增高,并可导致早发冠心病。“FH”已经成为携带LDL-R基因突变患者的同意词,但日益增多的研究证实,其他6种基因突变也可通过不同机制导致FH样表型。这些致病基因的发现．促进胆固醇代谢的研究进入新领域,有助于深入探讨胆固醇代谢的调节机制,并将为FH样表型的诊断和治疗提供新的理论依据。文章就有关FH样表型遗传异质性的分子基础研究的近况作一简要综述．以引起人们的关注。     

家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因复合杂合突变分析

目的:对1例临床确诊为纯合型家族性高胆固醇血症(FH)先证者及其核心家系成员进行基因检测分析,探讨患儿发病的分子病理基础.方法:收集先证者及父母血标本及临床资料,酚氯仿法提取基因组DNA,DNA直接测序方法检测低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因18个外显子和启动子及载脂蛋白B(ApoB100)R3500Q位点,核苷酸序列分析结果与Gen Bank比对寻找突变.结果:(1)先证者三尖瓣轻度关闭不全,先证者父母双侧颈总动脉内-中膜增厚,先证者母亲左侧颈内动脉起始处后壁多发混合回声斑块(2)该家系排除ApoB100基因R3500Q突变;(3)先证者LDL-R基因第13外显子发生A606T和D601Y复合杂合突变,前者第1879位G→A碱基置换,导致丙氨酸改变为苏氨酸,后者为1864位G>T碱基置换,导致天冬氨酸改变为酪氨酸,其父为携带A606T突变的杂合子,其母为携带D601Y突变的杂合子.结论:先证者LDL-R基因存在A606T和D601Y复合杂合突变,它们分别来源于父系及母系遗传.     

家族性高胆固醇血症HDL-miRNAs调节血单核细胞功能机制

本研究通过生物信息学方法分析家族性高胆固醇血症患者外周血单核细胞差异表达基因、HDL载体差异表达miRNA及其生物学功能,研究差异HDL-miRNA与单核细胞差异基因的相关性,探讨HDL-miRNA调控外周血单核细胞功能机制,寻找动脉粥样硬化防治新靶点。运用R语言分析GEO数据库共享平台家族性高胆固醇血症外周血单核细胞基因及HDL-miRNA探针芯片得到差异基因及差异miRNA,利用miRwalk2. 0预测miRNA靶基因,并利用STRING进行蛋白互作分析,构建差异miRNA与差异基因之间的调控网络。运用GO及KEGG分析研究基因功能。利用GEO数据(GSE6054)筛选出834个差异表达基因,利用GEO数据(GSE25108)筛选出HDL上差异miRNA28个。交叉匹配得到由19个差异miRNA和56个差异基因组配对的74对miRNA-靶基因。GO富集分析56个差异基因主要富集于肾上腺素受体信号等分子功能。KEGG分析56个差异基因主要富集于造血谱系通路上。家族性高胆固醇血症差异HDL-miRNA与外周血单核细胞差异mRNA具有相关性,HDL-miRNA有通过调控血单核细胞功能的可能性,可能参与高胆固醇血症导致动脉粥样硬化过程。     

家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体第13外显子突变分析

目的:探讨本课题组收集家族性高胆固醇血症(FH)患者中存在低密度脂蛋白受体(LDLR)第13外显子(E13)基因突变患者临床生化和心血管系统损害特点.方法:对9例临床诊断为FH、基因检测到LDLR基因E13突变的患者进行回顾性分析.结果:(1)临床诊断FH纯合子患者7名,其总胆固醇(TC)水平15.12～26.14 mmol/L,杂合子患者2名,TC水平11.30～11.75 mrnol/L.(2)均可见不同程度黄色瘤;(3)FH纯合子3例心电图出现ST-T改变;4例儿童和1例青年患者出现瓣膜损害,冠脉血流储备(CVFR)减低;杂合子心电图检查均正常,1例出现瓣膜损害,CVFR均正常.(4)核苷酸序列分析证实:9例E13突变患者中,A606T纯舍突变3名;D601Y纯合突变2名;A606T+、W462X和A606T+D601Y复合杂合突变各1名;A606T和D601Y杂合突变各1名.结论:FH严重损害患儿心血管系统和皮肤,LDLR基因E13出现的A606T和D601Y突变可能成为中国FH人群的高频突变位点.     

家族性高胆固醇血症患者管理策略的近况

家族性高胆固醇血症(FH)是一种常染色体显性遗传性疾病,是脂质代谢疾病中最严重的一种.FH引起动脉粥样硬化(As)病变,导致早期发生较为严重的冠心病(CAD).初步估计.目前世界范围内FH患者约10 000 000例,将其作为重点目标人群进行早期针时性干预对于CAD预防至关重要.FH已经成为世界性健康问题,国外已经制定相应的诊断、治疗指南来规范管理FH患者,而我国这方面的研究工作极为缺乏.因此,制定我国FH患者相应的管理指南迫在眉睫,本文综述FH患者管理相关的研究进展.     

家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因新突变位点的鉴定

家族性高胆固醇血症(hypercholesterolemia familial,FH)是由于低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)基因突变导致的常染色体显性遗传性疾病,临床上表现为多发黄色瘤、高水平血浆LDL、早发性冠心病及有阳性家族史。本研究通过临床症状结合血脂测定诊断出一个FH家系,其纯合子FH患者的血浆总胆固醇水平高达19．05mmol／L,LDL达17．06mmol／L,并有黄色瘤;而杂合子FH患者的血浆总胆固醇水平为7．96mmol／L,LDL为5．55mmol/L,并有心绞痛症状和黄色瘤。我们对该FH家系患者LDLR基因的PCR扩增DNA片段进行测序,发现纯合子FH患者LDLR基因Exon4区域内发生了GAG683GCG突变,即编码LDLR第683位的谷氨酸被丙氨酸替换,而杂合子FH患者该位点呈现杂合突变。此基因型与临床诊断遗传谱完全一致。同时,利用获得Epstein-Barr(EB)病毒转化型人永生淋巴细胞株(EBV-Ls)与荧光探针DiI标记的LDL结合反应,再通过流式细胞仪检测结果显示,具有功能性LDLR的EBV-Ls细胞比例,在纯合子FH患者(7．02％)和杂合子FH患者(62．64％)均比健康对照者(84．69％)低,纯合子FH患者LDLR活性仅为健康对照者的8．29％、而杂合子FH患者LDLR活性约为健康对照者的73．96％,前者呈现非常显著的降低。这些EBV-Ls细胞LDLR的功能变化分析,有力地支持了该FH家系的临床诊断和DNA测序结果。经查阅最新的UMD-LDLR完全版证实,本研究发现鉴定的GAG683GCG突变是人LDLR基因的新突变位点。     

青少年家族性高胆固醇血症患者血浆同型半胱氨酸和高敏C 反应蛋白水 平的临床价值及与血脂相关性研究

目的:探讨血浆同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)、高敏C反应蛋白(Hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)在家族性高胆固醇血症(FH)的纯合子和杂合子患者中的水平及其与临床生化指标的相关性。方法:入选在2013.10~2015.7期间在动脉硬化门诊随访、确诊的家族性高胆固醇患者34人(纯合子14例,杂合子20例)。根据FH纯合子、杂合子、健康体检者分成三组,分别测定其总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(Glu)、Hcy、hs-CRP水平,并比较FH患者血浆LDL-C、非高密度脂蛋白(non-HDL)水平Hcy、hs-CRP水平的相关性。结果:FH组的TC、LDL-C、non-HDL、Hcy水平显著高于正常对照组(P0.05)。FH根据基因型亚组分析中,青少年纯合子组HDL-C[(0.78±0.21)vs(1.25±0.40)mmol/L]小于杂合子组(P0.001),而TC[(16.11±2.66)vs(7.30±2.54)mmol/L]、LDL-C[(14.06±2.22)vs(5.25±2.16)mmol/L]、non-HDL[(15.33±2.60)vs(6.05±2.61)mmol/L]、Hcy[(19.3±11.58)vs(11.29±3.42)μmol/L]水平显著高于杂合子组(P0.05)。Pearson相关性分析显示,FH患者血浆LDL-C、non-HDL水平与Hcy水平呈正相关(P0.05),而与hs-CRP无相关性。结论:FH患者,特别是青少年的纯合子患者,与对照组相较,具有较高的TC、LDL-C和Hcy水平,并且与血浆LDL-C、non-HDL水平呈正相关。FH患者hs-CRP的水平高于健康人,但差异无统计学意义,与血浆LDL-C、non-HDL水平也无明显相关性。     

pcsk9基因突变与胆固醇血症

  常染色体显性高胆固醇血症（ADH）是家族早发性动脉粥样硬化的最主要的危险因素.在与ADH有关的基因突变中,LDL-R、apoB100基因突变导致ADH的机制已经比较明确,而pcsk9基因突变与ADH相关是最近发现的.pcsk9基因编码神经凋亡调节转化酶即NARC-1, 它通过在蛋白水平降低肝细胞上LDL受体的数量,使血液中LDL不能被清除,从而与高胆固醇血症相关联.研究pcsk9与LDL之间的关系,探索pcsk9在高胆固醇血症以及动脉粥样硬化发生中的作用及机制,将有助于高胆固醇血症和动脉粥样硬化发病机制的研究,也能为防治高胆固醇血症和动脉粥样硬化提供新思路.     

LDL受体基因内含子15结构分析及其在家族性高胆固醇血症基因诊断中的应用

为了解人类ＬＤＬ受体基因内含子１５的遗传背景,利用长链ＰＣＲ和锚定ＰＣＲ分离了ＬＤＬ受体基因外显子１５－内含子１５－外显子１６和内含子１５的３‘末端片段。利用Ｄｙｎａｌｂｅａｄｓ固相单链分离ＰＣＲ产物直接测序法测定了内含子１５ ３’末端１２２２个碱基序列。序列显示：３‘末端含有由１６个碱基组成的典型３’末端剪接位点;３‘端上游第３１个碱基处含有经典分支位点,除了经典分支位点外,在３’末端上游第２０     

秦皇岛地区新生儿先天性甲状腺功能低下症的筛查及诊断分析

目的:分析秦皇岛地区新生儿先天性甲状腺功能低下症(congenital hypothyroidism,CH)患儿的筛查和诊断结果,为进一步提高新生儿筛查的管理及提高新生儿生命健康质量提供依据和参考。方法:回顾性分析秦皇岛地区2011年1月至2017年1月共184308例新生儿的CH筛查资料和诊断结果。统计确诊CH患儿的基本情况、体检情况、筛查检验情况、确诊检验情况及治疗随访情况。结果:共筛查184308例新生儿,其中92例为确诊CH患儿,发病率1/2003(0.499‰)。新生儿CH临床非特异性表现复杂多样,多表现为病理性黄疸,占72.8%,经治疗后黄疸消退时间17~48天;其次为前囟大、后囟未闭,占58.7%;少哭、喑哑次之,占51.1%;其他临床表现为消化道症状(腹胀、肠鸣减弱、便秘、脐疝)、特殊面容、粘液水肿等。CH患儿筛查检验促甲状腺激素(Thyroid Stimulating Hormone),TSH重度升高者占52.2%,中度升高者为26.1%,轻度升高者为21.7%。CH患儿绝大部分表现为TSH升高和甲状腺激素(thyroxine,T4)降低。经口服左旋甲状腺素钠片治疗2周后,患儿症状改善,并根据三碘甲状腺氨酸(Triiodothyronine,T3)、T4、TSH检测结果调整剂量,恢复后每三个月复查一次。36~48个月随访,患儿身高、体重基本达到正常参照标准。结论:秦皇岛地区新生儿CH发病率较全国水平(1/3120)稍高,需加强CH患儿非特异性临床表现的健康教育工作,通过新生儿CH筛查做到早发现、早诊断、早治疗,提高新生儿的生命健康。     

301例早产儿视网膜病变筛查结果及其高危因素分析

目的:调查早产儿视网膜病变(ROP)的发生情况并分析其高危因素。方法:选取2017年6月至2018年6月在我院进行眼底检查的301例早产儿,依据《早产儿治疗用氧和视网膜病变防治指南》和《中国早产儿视网膜病变筛查指南》对早产儿进行筛查和随诊,同时收集早产儿及其母亲的相应病历信息,采用多因素Logistic回归分析分析ROP的高危因素。结果:301例早产儿中,共检出ROP患儿43例,其中须接受治疗的患儿13例,所有患儿经过2-6个月的治疗和随诊后均好转。围产因素中,胎龄小、出生体重低、吸氧、输血、有急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的早产儿ROP检出率更高(均P0.05);母体因素中,多胎分娩的早产儿ROP检出率高于单胎分娩的早产儿(P0.05)。Logistic回归分析显示,胎龄小、出生体重低、吸氧、输血和有ARDS为早产儿ROP的高危因素(P0.05)。结论:早产儿ROP发病率较高,胎龄小、出生体重低、吸氧、输血和有ARDS是其高危因素,在临床实践中应给予重视,及早发现ROP并规范治疗,以降低早产儿ROP的发病率。     

宫颈癌差异表达基因筛选及功能分析

目的:筛选参与宫颈癌发生、发展的关键基因,为临床诊疗提供新的靶点。方法:在NCBI-GEO数据库中筛选多组宫颈癌基因表达检测数据集,利用GEO2R分析工具筛选各组数据集的差异表达基因;应用R分析筛选不同数据集之间共有的差异表达基因;利用DAVID在线分析对差异表达基因进行功能聚类和通路分析;利用STRING分析差异表达基因编码蛋白之间的相互作用关系。结果:共选择6组表达数据集,筛选得到59个差异表达基因(宫颈癌组织vs正常组织),表达差异至少达2倍,其中包含50个表达上调基因及9个表达下调基因。这些差异表达基因参与细胞周期、DNA复制、细胞分裂等生物进程。蛋白互作分析表明,这些差异表达基因多数存在相互作用。结论:利用生物信息学方法对不同来源的基因检测数据进行整合分析,有助于更准确的筛选对宫颈癌发生、发展过程具有重要作用的关键基因,本文筛选的宫颈癌差异基因为进一步研究宫颈癌发生、发展的分子机制及临床诊疗提供思路。     

Affymetrix基因表达谱芯片在新疆维吾尔族与汉族胰腺癌组织样本间差异表达基因筛选中的运用

目的:运用基因表达谱芯片筛选并分析新疆维吾尔族与汉族胰腺癌组织样本间的差异表达基因。方法:收集我院2014年1月至2016年6月间行手术切除的维吾尔族与汉族胰腺导管细胞癌组织并提取总RNA,选取经Nanodrop 2000与Agilent 2100仪器质检合格的样本总RNA采用Affymetrix基因表达谱芯片筛选出差异表达基因并绘制统计图,运用基因本体(GO)分析及信号通路(Pathway)分析对这些差异表达基因的生物信息进行汇总分析。结果:通过基因表达谱芯片分析,新疆维吾尔族与汉族胰腺癌组织样本间共检测到1063个基因存在差异表达,在维吾尔族胰腺癌标本中显著上调表达的基因共281个,差异表达倍数最高的为IGLV1-44基因(差异倍数:9.99)下调表达的基因共782个,差异表达倍数最高的为CPB1基因(差异倍数:33.76);在Gene Ontology数据库中共检索到815个上述差异表达基因具有明确的GO分类,差异表达倍数最高的为CPB1基因(差异倍数:33.76);Pathway分析中共检测到30条信号通路包含有上述差异表达基因,共涉及196个基因,其中以FAK信号通路差异表达基因富集程度最高,差异表达倍数最高的基因为COL11A1基因(差异倍数:5.02)。结论:基因表达谱芯片分析结果显示,在新疆维吾尔族与汉族胰腺癌组织样本间存在大量的差异表达基因,这些基因与胰腺癌的增殖分化、侵袭转移及多药耐药等特性密切相关,且参与了多条生物体内重要信号转导通路的调控。     

常染色体显性遗传性先天性白内障的基因突变研究

摘要 目的：从收集的两个来自中国的常染色体显性遗传性的先天性核性白内障家系中,确定与其白内障致病相关的基因遗传突变位点,以明确致病原因。方法：首先通过记录详细的家系成员患病史、白内障手术史和其他临床资料,通过眼科常用的视力、眼压、裂隙灯检查以及眼底检查,排除家系成员的其他眼科疾病。并在取得家系成员的知情同意下,从家系成员的外周血白细胞中提取基因组DNA,最后通过对已知的先天性白内障候选基因进行测序,以筛选出致病的突变位点。并通过软件分析突变位点的高保守性。结果：通过眼科常用的裂隙灯仪器检查,两个家系的先天性白内障临床表型均被确定为核性白内障类型。通过对先天性白内障就候选基因直接测序,发现了在晶状体蛋白γD基因（CRYGD）中,核苷酸位置c.193处,发现了一个G>A的突变。该突变与两个家系中所有患病的个体共分离,未患病的成员和120名无关对照成员中未观察到该突变。共保守分析表明,一个高度保守的区域序列位于CRYGD的第65位密码子（P.65）。结论：在两个常染色体显性遗传性先天性核性白内障的中国家系中发现了CRYGD基因的一个新突变D65N,这是第一次在CRYGD基因的第193位核苷酸处,发现突变G→A。导致了第65位密码子的天冬氨酸（D）突变为天冬酰胺（N）,这些结果提供了强有力的证据,证明了晶状体蛋白γD基因（CRYGD）是先天性白内障的致病基因,并与核性的先天性白内障临床表型高度相关。     

Duchenne型肌营养不良患儿的临床特征和基因突变分析

摘要 目的：分析中国新疆地区Duchenne型肌营养不良（DMD）患儿的临床特征以及基因突变类型和分布。方法：回顾性分析2017年1月至2021年10月新疆医科大学第一附属医院收治的85例DMD患儿的病例资料,分析其一般资料、肌酶谱指标水平、核磁及肌电图表现、肌肉活检结果、认知功能差异以及基因变异分布特点。结果：85例DMD患儿中有5例是女性,其中汉族24例（28.24%）,少数民族61例（71.76%）,10例有家族史,9例有误诊经历。就诊原因以行走困难或运动倒退多见,其次为转氨酶、肌酸激酶异常升高。70例患儿行肌肉核磁检查,其中58例符合DMD,共有60例患儿完善肌电图,其中53例为肌源性损害。38例患儿完善认知功能评价,韦氏儿童智力量表第Ⅳ版总智商（FSIQ）得分45～110分,平均（79.93±18.31）,其中10例患儿存在认知功能障碍（FSIQ＜70分）,占26.31%。DMD患儿的言语智商（VIQ）、操作智商（PIQ）、FSIQ得分均显著低于正常儿童水平（P＜0.001）。16例患儿进行肌肉活检,15例符合DMD病理变化,1例组织学形态正常。71例患儿行多重连接探针扩增法（MLPA）检测,其中57例阳性,异常检出率为80.28%,其中基因变异类型分别为：50例是缺失,14例是点突变,7例是重复。缺失突变的高发位置是45～49号外显子,在DMD基因的2～9端多出现重复突变。结论：DMD患儿起病隐匿,首发症状多,需要临床各科医生共同协助进行早期诊断、早期治疗和预防。     

Identification of Novel Missense Mutation G571E,Novel Silent Mutation H229H,Nonsense Mutation C74X,and Four Single Nucleotide Polymorphisms in the Low-Density Lipoprotein Receptor Gene in Patients with Familial Hypercholesterolemia from St. Petersburg

Novel missense mutation G571E (c.1775 G > A), novel silent mutation H229H (c.750 C > T), and nonsense mutation C74X (c.285 C > A), earlier described in Japan but unknown in Russia, were identified in the low-density lipoprotein (LDL) receptor gene in St. Petersburg familial hypercholesterolemia patients. The analyzed group of patients was shown to be polymorphic in many positions of the LDL receptor gene, namely, c.1171 G/A, c.1773 T/C, c.2177 C/T, and c.2231 G/A.     

Autosomal Dominant Hypercholesterolemia: Needs for Early Diagnosis and Cascade Screening in the Tunisian Population

Autosomal dominant hypercholesterolemia (ADH) is characterized by an isolated elevation of plasmatic low-density lipoprotein (LDL), which predisposes to premature coronary artery disease (CAD) and early death. ADH is largely due to mutations in the low-density lipoprotein receptor gene (LDLR), the apolipoprotein B-100 gene (APOB), or the proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9). Early diagnosis and initiation of treatment can modify the disease progression and its outcomes. Therefore, cascade screening protocol with a combination of plasmatic lipid measurements and DNA testing is used to identify relatives of index cases with a clinical diagnosis of ADH. In Tunisia, an attenuated phenotypic expression of ADH was previously reported, indicating that the establishment of a special screening protocol is necessary for this population.     

K-ras基因突变及表达与胰腺癌的关系

目的:探讨K-ras基因突变及蛋白表达对胰腺癌的诊断价值。方法:采用突变等位基因特异性扩增(PCR-MASA)检测31例胰腺癌和22例非胰腺癌石蜡包埋组织中K-ras基因12密码子点突变情况,并通过免疫组化法检测其K-ras蛋白的表达。结果:胰腺癌患者K-ras基因12密码子点突变率为80.6%(25/31),K-ras蛋白表达阳性率为87.1%(27/31);而非胰腺癌患者K-ras基因12密码子点突变率为27.3%(6/22),K-ras蛋白表达阳性率31.8%(7/22)。胰腺癌患者K-ras基因突变率及K-ras蛋白表达阳性率均明显高于非胰腺癌患者(P均0.05)。K-ras基因突变与其蛋白表达呈正相关(r=0.542,P0.05),而与胰腺癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、临床分期及分化程度等临床病理特征均无显著相关性(P均0.05)。结论:胰腺癌K-ras基因突变的发生率升高,且K-ras蛋白表达异常上调,二者可能有助于胰腺癌的诊断。