蛇毒类激肽释放酶的研究进展

蛇毒丝氨酸蛋白酶是蛇毒中一类丰富的蛋白水解酶,具有重要的临床应用价值。其中一种丝氨酸蛋白酶一类激肽释放酶,作用于激肽原释放激肽,引起血管舒张,改善微循环,从而逐渐受到关注。对蛇毒中类激肽释放酶的分布、分离制备、生化性质、结构研究和药效研究等方面进行了综述,同时指出了目前存在的问题及今后的发展方向,以期为进一步的基础研究提供理论基础。     

中国蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒中舒缓激肽增强肽的研究

1.中国浙江产蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒中至少含有两种以上的舒缓激肽增强肽,对其中之一的组分进行了分离提纯,经鉴定为11肽,N 端为环谷,其氨基酸组成与日本蝮蛇(Agkistrodon halys bromhoffii)蛇毒中舒缓激肽增强肽的组分A 极相似,仅多一个脯氨酸。2.豚鼠回肠纵行肌中含有能使舒缓激肽降解的各种激肽酶,经鉴定其中包括有氨肽酶,激肽酶Ⅰ及其他肽酶,但不具有激肽酶Ⅱ的活力,它们都属于含金属的外切酶,经邻二氮菲处理后活力不可逆地丧失。3.豚鼠回肠纵行肌经邻二氮菲处理后,其所含的激肽酶活力虽丧失,但对舒缓激肽增强肽的效应却仍保留,这说明在体外舒缓激肽增强肽的效应与激肽酶的活力无关。     

浙江蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒激肽释放酶Ⅰ的分离纯化及其性质的研究

浙江产蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒中含有激肽释放酶,不需活化即可水解激肽原,释放激肽,并具有较弱的精氨酸酯酶的活力。粗毒经DEAE纤维素(DE-22,DE-52)和Sephadex G-75分离纯化后,可得到两个激肽释放酶的组分:Ⅰ与Ⅱ,二者电泳行为与酶活力有所不同,激肽释放酶Ⅰ在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈一条带,而组分Ⅱ中还杂有少量组分Ⅰ。激肽释放酶Ⅰ为一糖蛋白,含糖量20.3%,约由221个氨基酸残基组成,凝胶过滤和SDS电泳测定其分子量分别为31,000和30,000。此酶具有严格的底物专一性,能作用于激肽释放肽的专一底物Z-Phe-Arg-MCA及Bz-Pro-Phe-Arg-PA,不作用于一般蛋白质底物酪蛋白,对TAME的水解速度仅是对BAEE的14%。以BAEE为底物时,其最适pH为8～9,K_m值为2.85×10~(-4)M。本文测定了不同pH和不同温度下酶的稳定性,pH低于5或大于9,温度在40℃以上,酶活力迅速下降。其精氨酸酯酶及激肽释放酶的活力均能被丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF和DFP所抑制,两者呈平行关系,但都不被胰蛋白酶的专一抑制剂TLCK所抑制,慈菇抑制剂与大豆(Kunitz)抑制剂对此酶有部分抑制作用。经磷酸纤维素等阳离子交换树脂层析或交联的慈菇抑制剂Sepharose-4B亲合层析也能提纯激肽释放酶Ⅰ,但提纯后精氨酸酯酶活力下降,激肽释放活力几乎全部丧失。经圆二色光谱测定表明,酶的构象已发生改变。     

舒缓激肽体系的生理生化特性及其临床意义

舒缓激肽是属于多肽类的组织激素,在各种动物体内起着很重要的生理作用。它能使毛细血管舒张和通透性增加,从而导致血压降低;又能使离体平滑肌收缩;还能致痛。因而在烧伤、炎症、水肿和休克等病理过程中起着重要的作用。在生物体内除舒缓激肽外,尚有各种与其性质类似的物质,统称为激肽(kinin)。它们系由激肽原(kininogen)经激肽释放酶(kallikrein)降解后产生。     

激肽释放酶-激肽系统在阿尔茨海默病发病中的作用

激肽释放酶-激肽系统的异常变化与阿尔茨海默病、脑血管病、多发性硬化和癫痫等神经系统疾病的发生均有较大关系,这一系统与体内其它神经内分泌系统之间的关系错综复杂。通过激肽释放酶裂解激肽原、再不断地产生激肽,而活性激肽与体内多种激肽受体结合、并通过下游多条信号通路和众多细胞因子发挥生物学效应。在阿尔茨海默病患者的血液和脑脊液中均有凝血因子XII驱动的血凝接触系统的活化。本文重点综述激肽释放酶-激肽系统的异常变化与阿尔茨海默病发生的相关性问题。     

激肽释放酶—激肽系统

新近的研究证明,激肽释放酶-激肽系统(Kallikrein-kinin系统,简称K-K系统)是机体的一个重要的体液调节系统。它参与循环、血液凝固、水盐代谢、免疫活动以及许多器官的功能。特别是肾脏的激肽释放酶-激肽系统,构成与肾素-血管紧张素的平行系统。虽然早在20年代就知道了激肽的存在,但直到最近十多年来,这个系统才引起人们的广泛注意。随着研究的深入,愈来愈显示出激肽释放酶-激肽系统在生化、生理、病理、药理和临床上的重要性。激肽释放酶-激肽系统包含激肽释放酶和激肽两个基本成份,可区分为血浆激肽释放酶-激肽系统和     

菜花烙铁头蛇毒中一种具有激肽释放酶与纤维蛋白原溶酶活性的Jerdonase

通过DEAESephadexA 5 0阴离子交换、超细SephadexG 10 0分子筛和反相高效液相C4 色谱层析 ,从菜花烙铁头蛇毒冻干粉中纯化出一种具有激肽释放酶活性和α纤维蛋白原溶酶活性的丝氨酸蛋白酶 ,命名为Jerdonase。在 12 .5 %胶浓度的SDS还原电泳条件下 ,该酶分子量大约为 5 5kD ,在非还原电泳条件下 ,分子量大约为 5 3kD。此酶是一种糖蛋白 ,含有约 35 .8%的中性糖。它的N末端氨基酸序列为IIGGDEENINEHPFLVALYDA ,其序列和蛇毒中其他丝氨酸蛋白酶具有非常高的序列相似性。Jerdonase能够催化BAEE、S 2 2 38和S 2 30 2的水解 ,其水解活性可被PMSF抑制 ,但是EDTA对此没有影响。Jerdonase能优先水解人纤维蛋白原的Aα链 ,同时伴随有微弱的Bβ链水解活性。另外 ,此酶能够水解牛低分子量的激肽原 ,释放舒缓激肽。总之 ,所有的结果表明Jerdonase是一个具有多功能活性的蛇毒丝氨酸蛋白酶     

中国江西蝮蛇蛇毒中舒缓激肽增强肽的分离纯化

应用乙醇提取,经柱层析及纸层析等方法,从中国江西蝮蛇毒中分离纯化获得三个BPP组分,为九肽,十肽和十六肽。在离体豚鼠回肠都有增强舒缓激肽的作用,其肽链脯氨酸含量都很高。结构特点与日本及中国浙江蝮蛇毒BPP极为相似。     

人组织激肽释放酶基因在哺乳动物细胞中的表达

克隆人胰腺组织激肽释放酶基因 (hKK) ,构建融合荧光蛋白基因的真核表达载体 ,在CHO细胞中表达 ,为开发激肽释放酶基因工程产品以及开展基因治疗高血压研究奠定了基础。提取人胰腺组织总RNA后 ,RT PCR扩增KK ,构建中间载体KSKK。从KSKK中切出激肽释放酶基因 ,插入真核表达载体pEGFP C2 ,构建出激肽释放酶带有荧光蛋白报告基因的表达载体pEGC KK ,测序分析后转染CHO细胞 ,荧光显微镜观察激肽释放酶基因表达。并进行SDS PAGE及Westernblot分析。成功克隆激肽释放酶基因 ,并在CHO细胞获得表达 ,克隆的人组织激肽释放酶基因可用于激肽释放酶基因工程产品开发以及基因治疗研究。     

激肽系统活性产物

随着研究的不断深入,发现激肽释放酶-激肽系统参与了机体众多的生物学过程,除了对机体心血管系统、凝血系统、纤溶系统和肾功能等正常生理过程的调节作用外,在高血压、炎症、疼痛、血管生成、细胞增殖、凋亡和肿瘤发生等诸多的病理生理过程中也陆续发现有着不可替代的作用。有关激肽释放酶等上游活性物质的生理功能报道较多,本文从人激肽释放酶-激肽系统开始,重点对下游活性产物缓激肽、活性高分子量激肽原等在生理及病理过程中的作用和调节作一综述。     

人组织激肽释放酶成熟蛋白在大肠杆菌中的高效表达

将编码人组织激肽释放酶成熟蛋白的基因片段扩增并分别克隆到原核表达载体pET2 8(b)及分泌型表达载体pET2 0 (b)中 ,使其C端融合 6×HisTag序列 .转化不同受体菌 ,IPTG诱导表达后利用SDS PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析 .在 6株基因工程菌株中 ,均表达出分子量约30kD的激肽释放酶融合蛋白 ,其中激肽释放酶在pET2 8载体中的表达水平高于pET2 0载体 .pET2 8和pET2 0载体表达的重组激肽释放酶蛋白分别占菌体总蛋白约 2 6 %和 10 % .Western印迹分析表明 ,目的蛋白可与抗人血清KK单克隆抗体发生特异性反应 .未经纯化的激肽释放酶融合蛋白具有一定的水解苯甲酰精胺酸乙酯 (BAEE)的能力 .在大肠杆菌中获得了人组织激肽释放酶的高效表达 ,表达产物具有免疫原性和生物活力 ,这为研究其生物功能和开发基因工程药物奠定基础     

组织激肽释放酶相关肽酶的作用和治疗潜力的研究进展

组织激肽释放酶家族由15种分泌型丝氨酸蛋白酶组成,是由人类基因组中最大的蛋白酶基因簇编码。在过去10年间,关于激肽释放酶的底物、内源性抑制剂以及在体内功能方面的研究已取得巨大进步。研究表明,这些蛋白酶在不同组织中具有病理生理学作用,并且目前认为激肽释放酶是研发气道、心血管、牙齿、皮肤和肿瘤疾病新型药物的潜在靶点。因此,阐述激肽释放酶生理功能和病理意义方面认识的新进展,并了解鉴定激肽释放酶抑制剂中的进步,有助于我们在特定疾病环境下更好地靶向激肽释放酶。     

清栓酶（蝮蛇抗栓酶）的药理研究与临床应用进展

清栓酶（蝮蛇抗栓酶）的药理研究与临床应用进展中国蛇协蛇毒研究所邓禄延,覃公平,胡征林自本世纪八十年代起,蛇毒抗凝制剂在我国研制及应用于临床以来,相继有尖吻蝮蛇毒制剂去纤酶,长白山陆生白眉蝮蛇毒制剂清栓酶（蝮蛇抗栓酶）及江浙蝮蛇毒制剂江浙蝮蛇毒抗栓酶（...     

浙江蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒中舒缓激肽增强肽的研究 Ⅱ.舒缓激肽增强肽组分Ⅰ结构与功能的关系

1.浙江蝮蛇毒冻干粉的70%甲醇提取液,经Sephadex G-15层析柱,可分离出三个舒缓激肽增强肽的组分。对其中BPP_1的结构进行了测定,其氨基酸顺序为: -Glu·Gly·Arg·Pro·Pro·Gly·Pro·Pro·Ile·Pro·Pro 2.研究了BPP_1结构与功能的关系。当用焦谷氨肽酶移去BPP_1N末端的焦谷氨酸残基时,对舒缓激肽的增强效应反而升高一倍左右;此后随着逐步进行Edman降解,活力也随之下降,但降解至C末端三肽时,生物活力仍保留约90%,至C末端二肽时,活力就骤然丧失。对BPP_1C末端用羧肽酶Y水解时,一小时后活力降低二分之一。这些都说明,BPP_1C末端结构的完整,是其生物活力所必需的。     

浙江蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒中舒缓激肽增强肽的研究——Ⅱ.舒缓激肽增强肽组分Ⅰ结构与功能的关系

1.浙江蝮蛇毒冻干粉的70%甲醇提取液,经Sephadex G-15层析柱,可分离出三个舒缓激肽增强肽的组分。对其中BPP_1的结构进行了测定,其氨基酸顺序为: (?)GIu·Gly·Arg·Pro·Pro·Gly·Pro·Pro·Ile·Pro·Pro 2.研究了BPP_1结构与功能的关系。当用焦谷氨肽酶移去BPP_1 N末端的焦谷氨酸残基时,对舒缓激肽的增强效应反而升高一倍左右;此后随着逐步进行Edman降解,活力也随之下降,但降解至C末端三肽时,生物活力仍保留约90%,至C末端二肽时,活力就骤然丧失。对BPP_1C末端用羧肽酶Y水解时,一小时后活力降低二分之一。这些部说明,BPP_1 C末端结构的完整,是其生物活力所必需的。     

组织型激肽释放酶及相关肽酶在中枢神经系统中的作用

组织型激肽释放酶1(kallikrein1,KLK1)和激肽释放酶相关肽酶(kallikrein-related peptidase 2～15,KLK2～15)是一类丝氨酸蛋白酶,具有广泛的生物学活性。在中枢神经系统中,它们不但在脑的生长、发育和学习记忆等方面起重要作用,同时也在多种脑部疾病中起重要作用,如帕金森病、痴呆、多发性硬化、肿瘤等,并在这些疾病的诊断、治疗和预后方面显示出潜在的应用价值。     

血浆激肽释放酶新底物PK—120的研究

血浆激肽释放酶新底物ＰＫ┐１２０的研究蒲小平（军事医学科学院基础医学研究所,北京１００８５０）关键词血浆激肽释放酶底物１．发现补体系统由２０余种血浆蛋白组成,在机体防御和炎症应答反应中起重要作用。１９８９年Ｈａｍｍｅｒ等在用Ｃ４ｂ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ...     

人组织激肽释放酶4在激素依赖性肿瘤中的研究进展

人组织激肽释放酶基因家族由KLK1-KLK15构成,编码一组丝氨酸蛋白酶。研究发现KLK基因家族涉及癌细胞的多种生物学功能,且其表达受类固醇激素的调节。人组织激肽释放酶4是丝氨酸蛋白酶家族的一个成员,在多种激素依赖性肿瘤如卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、子宫内膜癌中高表达,且表达量受雌激素、孕激素、雄激素不同程度的调节。近年来很多文献报道人组织激肽释放酶4涉及癌细胞的增殖、上皮间质转化及细胞外基质的降解等过程,可能促进了肿瘤的发生、发展,且与激素依赖性肿瘤的预后不良有关。这些研究显示人组织激肽释放酶4与激素依赖性肿瘤关系密切,是其潜在的肿瘤标记物和治疗靶点,随着研究的进一步深入,有望应用于激素依赖性肿瘤的早期诊断、病程监测和治疗。     

清栓酶的毒副作用及其防治

清栓酶的毒副作用及其防治陈智勇第一四五中心医院清栓酶是从陆生白眉蝮蛇毒中抽取的一种酶制剂,含有少量激肽释放酶和核苷酸、５－羟色胺酸,抑制纤维蛋白原形成,相对加强了纤溶作用。并可使小动脉毛细血管扩张,舒张平滑肌,能促进缺血区的血液循环和病变恢复,抑制血...     

湖南烙铁头蛇毒中一个新的舒缓激肽增强肽（TmF）

通过 70 %冷甲醇抽提、SephadexG 15分子筛和反相高效液相色谱C1 8层析 ,从湖南产烙铁头蛇毒 (Trimeresurusmucrosquamatus)冻干粉中纯化得到一个新的舒缓激肽增强肽 (BPP) ,命名为TmF。该小肽的氨基酸序列为pGlu Gly Arg Pro Leu Gly Pro Pro Ile Pro Pro (pGlu表示焦谷氨酸 )。序列结果分析表明 ,TmF和已经分离得到的BPPs有很高的序列同源性。MSI MS测定其分子量为 1.110 7kD。TmF的生物学活性和药理学活性检测的结果表明 ,它增强舒缓激肽 (BK) ( 1mg L)诱导的离体豚鼠回肠纵行肌收缩的活性为 ( 1.13± 0 .3)单位 (mg L) ;TmF ( 5 .0× 10 - 4mg kg)可以增强约 ( 14± 2 )mmHg的由BK( 5 .0× 10 - 5mg kg)诱导的舒张压下降 ;在抑制剂试验中 ,不同剂量的TmF和 5× 10 - 2 mg的血管紧张素转化酶保温 30min ,结果表明大约2 .0× 10 - 3mg的TmF表现出对ACE水解活性的半数抑制率 (IC50 )。