基于真空LHPEF结合胰蛋白酶降解猪血红蛋白

在真空及低压高频脉冲（LHPEF）条件下,结合胰蛋白酶降解猪Hb,利用高效凝胶色谱、Native-PAGE蛋白电泳及紫外扫描来测定其降解效果。结果：在37℃温度下,1.88 V、200 kHz的LHPEF处理猪Hb,电导率为3.45326 ×10^5 μs/cm（对照组为0.645×10^4 μs/cm）。紫外扫描曲线图中的真空LHPEF胰蛋白酶降物中有8个特征吸收峰,而对照组中为6个吸收峰,Native- PAGE蛋白质电泳图中有13个明显色带,而对照组中只有6个色带,高效凝胶色谱图中的特征吸收峰为48个,对照组中7个特征吸收峰。     

β-β交联的Fe(Ⅱ)-Co(Ⅱ)杂化血红蛋白玻尔(Bohr)效应的研究

本文使用500MHz ~1H NMR谱仪研究了β—β交联的β_1 82Lys—β_2 82Lys不对称Fe(Ⅱ)Co(Ⅱ)杂化血红蛋白在去氧状态下其四级结构与溶液 pH的相互关系.实验结果证明,溶液中H~+浓度的减少,有利于血红蛋白从束缚态(T态)向松弛态(R态)方向转化.在可交换质子区(9.0—15.0PPm)由pH的改变所引起的[2(Co)β(Fe)]_A[α(Co)β(Co)]_cXL的~1H NMR谱峰的变化比[α(Fe)β(Co)]_A[α(Co)β(Co)]_cXL的~1H NMR谱峰的变化大.这为研究血红蛋白四个亚基的构象随pH改变而变化的先后次序提供了一定的依据,可以认为,当溶液中H~+浓度减少时,首先使蛋白构象发生改变的应在α—亚基上,而不在β—亚基上.此外,从它们的~1H NMR谱图随pH的变化可推测,溶液中除了 T态和R态之外,还存在着一些中间过渡态.o     

猪血红蛋白的酶解及氨基酸含量的研究

猪血是一种营养价值高而价格低廉的蛋白质资源.猪血中含有丰富的蛋白质,其中血红蛋白占主要部分.因此,对血红蛋白及其水解产物的研究受到了国内外众多学者的关注.为选出适合于水解猪血红蛋白的蛋白酶,笔者采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶对猪血进行单酶和复合酶水解试验,确定碱性蛋白酶为水解猪血的适用酶.通过质谱仪测定,碱性蛋白酶酶解产物分子量集中在800～2400道尔顿,而800～1260道尔顿区间占主要部分;经全自动氨基酸分析仪测出其产物含有17种氨基酸,其中含8种必需氨基酸,必需氨基酸占总氨基酸量的50.93%,说明碱性蛋白酶酶解产物是制作食品和饲料添加剂的理想资源.     

脉冲电场和磁场对高血粘和高凝血影响的比较研究

比较研究脉冲电场和脉冲磁场对高血粘和高凝血的影响,探寻降低血液粘度,抑制凝血过快、过强的物理方法.每份血样等分9份,1份作对照,对另外8份分别作不同的脉冲电场或磁场处理.结果显示不同上升沿速率的脉冲电场和磁场对高血粘和高凝血的影响程度不同,上升沿速率为2.5 × 105T s-1的脉冲磁场使全血表观粘度η降低(P＜0.01)、复钙凝血时间tr变长(P＜0.01),血块的最大剪切应力τax变小(P＜0.01).脉冲磁场作用能改善高血粘和高凝血状况.     

低频脉冲电场对胰岛素介导的细胞增殖影响及其作用机理研究

本文以胞外信号分子胰岛素为研究对象,从细胞信号系统与电磁场相互耦合角度,通过MTT比色法和间接免疫荧光技术研究脉冲电场(f=50Hz,τ=20μS,Epp=1V/m)对人肝细胞(L-02细胞株)的增殖能力以及胰岛素与细胞表面受体的专一结合特性的影响。MTT比色分析结果发现在脉冲电场对细胞增殖的直接作用中,处理5、10、20分钟对细胞增殖的抑制百分率分别为10.13％、18.10％和11.85％;脉冲电场对细胞增殖的间接作用中,胰岛素经脉冲电场处理20、40分钟,对细胞增殖的抑制百分率分别为10.31％和14.12％;流式细胞术检测结果表明细胞悬液和胰岛素共同经脉冲电场处理20分钟组其平均荧光强度降低22.74％,仅胰岛素受电场处理组和仅细胞受电场处理组的平均荧光强度分别下降12.96％和10.51％。本实验结果显示 脉冲电场对人肝细胞的作用体现在两个方面:一是电场直接作用于细胞膜上的胰岛素受体及其他膜成分;二是脉冲电场还可通过改变培养基中的胰岛素分子的构像,影响胰岛素与受体的结合能力,进而影响细胞的增殖等活动。     

研究脉冲竞争系统周期解新的单调迭代方法(英文)

文章研究了一类正常细胞和癌细胞相互作用的竞争系统周期解的存在性.数学模型包括竞争型的Lotka-Volterra方程组与描述周期性化疗的脉冲条件.文章建立了一类新的单调迭代方法,该方法是构造性的,周期解可以由一个线性迭代过程得到,每一步迭代只需求解一个脉冲微分方程初值问题.文章获得了系统至少存在一个严格正的周期解的充分条件.     

脉冲电场下肿瘤细胞的窗口效应

基于多层电介质模型,对于适应于球形生物细胞的脉冲电场,提出了一种等效电路模型,在相同频域下,内膜和外膜的变化趋势相同,频域分析表明,不同频谱场将引起不同的生物医学效应．我们针对癌症细胞计算了跨膜电压,并讨论了脉冲和跨膜电压以及阻抗的关系．结果表明不同的频域和不同的持续时间对细胞的内膜和外膜有选择性的影响,时域和频域的分析显示,在细胞上有一个窗口,当持续时间在10^-8～10^-6 s之间,细胞内膜的电压将高于细胞外膜的电压．窗口效应为解释生物细胞的脉冲电学效应提供了一种参考思路．     

脉冲电场对鸡胚脑细胞Ca~(2 )和cAMP含量的影响

利用ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光方法和放射免疫方法分别研究了脉冲电场对１１天和１４天胚龄的悬浮鸡胚脑细胞内Ｃａ２＋和环腺苷酸（ｃＡＭＰ）含量的影响,并探讨了在脉冲电场作用下这两种信号物质变化的相关性。实验结果表明：当电激液中［Ｃａ２＋］为１ｍｍｏｌ／Ｌ时,在宽度为１００微秒．强度为０．５,１．０,２．０ｋＶ／ｃｍ的脉冲电场作用下,１１天胚龄的鸡胚脑细胞内钙离子浓度（以［Ｃａ２＋］ｉ表示）与对照相比显著上升,其升高值随着脉冲强度的增加而增加,而细胞内ｃＡＭＰ含量与对照相比显著降低;用ＥＧＴＡ络合电激液中游离Ｃａ２＋以后,虽然细胞内［Ｃａ２＋］ｉ显著上升,细胞内ｃＡＭＰ含量没有显著变化。１４天胚龄的鸡胚脑细胞内［Ｃａ２＋］ｉ在脉冲电场作用下显著上升,而细胞内ｃＡＭＰ含量没有显著变化。脉冲电场对１１天和１４天胚龄的鸡胚脑细胞膜和细胞内Ｃａ２＋库Ｃａ２＋转移系统的开放均有显著作用,此作用具有对脉冲强度的依赖性。为了解物理信号跨细胞膜传导的方式提供了初步的实验根据     

Hb D Punjab基因的鉴定——DNA 扩增在异常血红蛋白研究中的应用

本文应用作者设计的寡核苷酸引物和探针,通过聚合酶链反应(PCR)扩增β珠蛋白DNA序列,并通过限制酶EcoRI酶谱分析或寡核苷酸杂交,快速鉴定Hb D Punjab基因。应用这种技术先后对汉、藏、哈萨克等3个民族4个家系的Hb D Punjab基因进行了鉴定。     

脉冲磁场对神经系统的影响(上)

续前末梢神经的磁刺激导言１９８４～１９８５年间,上野照刚Ｓ．Ｕｅｎｅ等〔４,５〕,采用磁刺激法使神经出现兴奋,即用电磁感应磁场和脉冲磁场进行磁刺激的。传统上用电容器充放电法产生的脉冲磁场的波形,是一种衰减波,尚不能形成矩形波和正弦波。这样就无法对神经的磁刺激过程进行详细地研讨。为此上野等在１９８７～１９８８年间,发表了采用任意波形发生器所提供的矩形波磁场所开展的磁刺激研究〔６,７〕。上野等又对任意波形发生器所产生的梯形波进行放大,所用的８字形线圈,其匝数为１０,外径为１００ｍｍ,内径为６０ｍｍ。…     

高压脉冲电场法提取干松针总黄酮及其体外抗氧化性检测

主要研究了高压脉冲电场法提取干松针总黄酮的工艺条件,并对松针总黄酮体外抗氧化性能进行初步分析.结果表明,最优的高压脉冲电场提取条件为:电场强度20 kV/cm,脉冲数8个,料液比1:50.松针总黄酮提取率的影响因素:料液比＞电场强度＞脉冲数.松针落叶中总黄酮物质对自由基清除能力随浓度的增加而升高,松针总黄酮对Fe~(3+)的还原能力比抗坏血酸强.     

不同载体固定化胰蛋白酶酶学特性的研究

目的:研究以壳聚糖、复合硅胶、阴离子交换树脂为载体固定化胰蛋白酶的酶学特性。方法:通过测定不同载体固定化胰蛋白酶的活力得其最适反应温度值、最适反应pH值和米氏常数(Km)值。结果:以壳聚糖、复合硅胶、阴离子交换树脂为载体制备固定化胰蛋白酶的最适反应温度分别为70℃、60℃、60℃;最适反应pH值分别为7.5、8.0、8.0;表观米氏常数K’m分别为22.72mg/ml、25.12mg/ml、29.04mg/ml。结论:与游离酶相比,固定化胰蛋白酶均表现出一定的热稳定性、酸碱稳定性,利于工业化生产。     

Binding of the Bovine and Porcine Pancreatic Secretory Trypsin Inhibitor (Kazal) To Human Leukocyte Elastase: A Thermodynamic Study

Abstract

The effect of pH and temperature on the apparent association equilibrium constant (K_a) for the binding of the bovine and porcine pancreatic secretory trypsin inhibitor (Kazal-type inhibitor, PSTI) to human leukocyte elastase has been investigated. At pH8.0, values of the apparent thermodynamic parameters for human leukocyte elastase: Kazal-type inhibitor complex formation are: bovine PSTT – K_a = 6.3 × 10⁴M^?1, δ5G° = -26.9kJ/mol, δH° = +11.7kJ/mol, and δS° = +1.3 × 10² entropy units; porcine PSTI –K_a = 7.0 × 10³M^?1,δG° = -21.5kJ/mol, δH° = +13.0kJ/mol, and δS° = +1.2 × 10² entropy units (values of K_a δG° and δS° were obtained at 21.0°C; values of δH° were temperature independent over the range (between 5.0°C and 45.0°C) explored). On increasing the pH from 4.5 to 9.5, values of K_a for bovine and porcine PSTI binding to human leukocyte elastase increase thus reflecting the acidic pK-shift of the His57 catalytic residue from ?7.0, in the free enzyme, to ?5.1, in the serine proteinase: inhibitor complexes. Thermodynamics of bovine and porcine PSTI binding to human leukocyte elastase has been analyzed in parallel with that of related serine (pro)enzyme/Kazal-type inhibitor systems. Considering the known molecular models, the observed binding behaviour of bovine and porcine PSTI to human leukocyte elastase was related to the inferred stereochemistry of the serine proteinase/inhibitor contact region(s).     

弱恒定电场对铁氮共掺二氧化钛纳米颗粒光催化灭活HL60细胞实验的影响研究

文章主要探讨弱恒定电场对铁氮共掺二氧化钛纳米颗粒光催化灭活HL60细胞实验的影响以及其机理。利用细胞计数法、CCK-8法检测、倒置显微镜、活性氧检测和荧光光谱等手段进行了分析研究,结果表明,在无电场作用下,此纳米颗粒光催化灭活HL60细胞的效率达到75.07%,然而在弱恒定电场的作用下,其效率将提高,在场强为600 m V/mm的电场作用下,其效率可达到80.13%,同时,对细胞膜的损伤程度也更大,产生的活性氧类物质也更多;荧光光谱分析推测,电场可能通过分离光生空穴电子对和提供能量给价带电子跃迁来使更多空穴和电子被利用,进而提高此纳米颗粒的光催化活性。     

弱激光对改善血红蛋白携氧功能的机理研究

本文用群论分析了卟啉的对称结构,并用量子力学导出激光－铁卟啉相互作用系统的自由能,改进了文献「２」的工作,对激光血管内照射能增强血液携氧能力的现象进行诠释。     

低频脉冲电刺激联合木丹颗粒对糖尿病周围神经病变的疗效

目的:探讨低频脉冲电治疗仪联合木丹颗粒对糖尿病周围神经病变的临床疗效。方法:收集我院收治的糖尿病周围神经病变患者90例,随机分为实验组和对照组。对照组患者给予甲钴胺片治疗,实验组患者给予木丹颗粒联合低频脉冲电刺激治疗。观察并比较两组患者治疗前后FBG、P2h BG及Hb Alc水平的变化情况,记录患者正中神经、腓神经的运动神经传导速度(MCV)及感觉神经传导速度(SCV),参照TCSS评分判定临床疗效。结果:治疗后,两组患者腓总神经及正中神经MCV、SCV均上升,与对照组比较,实验组上升显著,差异有统计学意义(P0.05);治疗后,两组患者TCSS评分均下降,与对照组比较,实验组下降更明显,差异有统计学意义(P0.05)。结论:低频脉冲电治疗仪联合木丹颗粒治疗糖尿病周围神经病变的疗效优于单用甲钴胺片治疗。     

Effect of Direct-Current Electric Field on Enzymatic Activity and the Concentration of Laccase

This work investigates the effect of direct-current electric field on the extracellular enzymatic activity, concentration and other experimental parameters of laccase from Trametes versicolor. The results showed that laccase could significantly contribute to the change of pH at the end of graphite electrode. In addition, it increased the electrical conductivity of the water. In the experiment, the optimum pH and catalytic pH range for laccase activity were 3.0 and pH 2.5–4.0. The application of 6 V direct current showed significant effects on the laccase enzyme activity. The activity of laccase was enhanced in the anodic region, but at the same time was strongly inhibited at the cathode. The electric charge characteristics of laccase were changed when exposed to electric field, and some laccases molecules moved to the anode, which produced a slight migration phenomenon. This study is the basis of combination of laccase and electrical technology, at the same time, providing a new direction of enhancing laccase activity. Compared to immobilization, using electric field is simple, no chemical additives, and great potential.     

Effects of High-voltage Electric Field Treatment on the Water Activity of Bread

Treating bread dough by a high-voltage electric field (HVEF) during the first fermentation enabled the bread dough to retain water in the gluten fibers. The microstructure of the gluten fibers was still visible even with an HVEF treatment at 50 kV for 20 min, but could no longer be observed when the gluten was treated for more than 30 min. The crumb temperature of the HVEF treated bread during baking began to rise a few minutes sooner than that of the untreated bread, but the maximum temperature reached was the same in both cases: 99°C. The fact that the water activity of the HVEF-treated bread was 0.987 ± 0.0056, being higher than that of the untreated bread by 0.011, is in good agreement with the growing tests of Rhizopus nigricans. Furthermore, a distinct decrease in the water loss of the baked gluten was observed after the HVEF treatment. These results suggest that the HVEF treatment increased the ability of the gluten fibers, rather than the starch granules, to absorb and retain water; the state of the remaining water is considered to have become immobile, so that migration of moisture to the starch granules in the bread could be minimized.