生物防治

961860 对夜蛾科害虫具高活性的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白[英]/Lambert,B.…//Appl.Environ.Microbiol.-1996,62(1).-80～86[译自DBA,1996,15(4),96-02167] 从苏云金芽孢杆菌血清变种tolworthiBTS02618A中分离出一种新型晶体蛋白(CP)     

苏云金芽孢杆菌毒蛋白发掘方法的研究进展

自上世纪初发现苏云金芽孢杆菌对昆虫有杀虫活性以来,如何发掘利用苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白服务于农业生产和人类的卫生防控就成为一个重要课题。从早期的分离菌株使用菌体的复合物喷施到使用分子手段转化植物特定表达,人类在苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的利用精准度上在不断提高,但随之而来就是抗性的产生。因此不断发掘可使用的新的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因资源就是一个很重要的话题。本综述就苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的发掘方法研究做一系统论述。     

苏云金芽孢杆菌Cry1Ac杀虫晶体蛋白及其分子设计

cry1Ac编码的杀虫晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌(Bt)产生的多种杀虫晶体蛋白中对鳞翅目昆虫有很高毒性的蛋白.第一个Cry1Ac杀虫晶体蛋白最早在库斯塔克亚种HD73中以伴胞晶体形式分离获得,其编码区为3 534 bp,编码蛋白分子量为133 kD,含1 178个氨基酸,等电点为4.84.自此以来,Cry1Ac杀虫晶体蛋白结构、功能以及应用研究一直是Bt杀虫晶体蛋白研究的重要方向.本文介绍了苏云金芽孢杆菌中应用最广泛的Cry1Ac杀虫晶体蛋白家族的结构、功能及其基因分类,并进一步就基于苏云金芽孢杆菌Cry1Ac杀虫晶体蛋白的基因工程研究做了分析,提出了持续利用BtCry1Ac杀虫晶体蛋白的一些见解.     

生物防治

931716苏云金芽孢杆■6一内毒素片段的基因扩■槭达[英]/Roy,P./Biochem.Biophys.Res.Commun.-1992,187(2).-641--,64T[译自D:l}A,1992,11(23),92-13064] 用两种合成的寡核苷酸作为扩增晶体蛋白CryIA(b)基因N一端部分聚合酶链反应的楱板,这两种合成的寡核苷酸分别对苏云金芽孢杆菌HD一1变种kurstaki~体蛋白基因5,端和630氯基陵区有特异性。蛋白的N。端部分负责蛋白的昆虫特异性和毒性。用整个细菌作模板,得到一个1.9kb的DNA,r段,将之克隆到质粒pUCl9中。枉大肠杆菌DH一5口转化体中没有测到免疫活性晶体蛋白的表达。将扩增的基因转…     

利用PCR技术直接鉴定苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因型的快速方法

根据PCR程序中热变性温度可使菌体裂解,释放出DNA的原理,利用苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白不同基因型的特异混合引物,对苏云金芽孢杆菌营养体直接进行PCR分析。根据不同基因型的特异扩增产物片段的分子量大小便可直接确定该苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的基因型。本文对本室筛选天然菌株和苏云金芽孢杆菌克隆菌株分别进行了cryl基因的PCR分析。表明,该法结果可靠快速易行,在方法学上,为苏云金芽孢杆菌菌株鉴定、新菌株的筛选和基因型分析提供了极大的方便。     

杀蚊苏云金芽孢杆菌及其晶体蛋白研究进展

自从发现苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensis(Bt)具有杀蚊活性以来,目前已发现多种Bt亚种或血清型对蚊虫具有杀虫活性,同时也发现了一些新的杀蚊晶体蛋白。在对杀蚊晶体蛋白的分子结构进行研究的基础上,对其的作用机理有了一定的了解。近年来利用DNA重组技术显著提高杀蚊晶体蛋白的合成和将不同菌种的杀蚊晶体蛋白进行联合表达,为有效控制蚊虫危害展示广阔前景。     

利用原生质体融合技术选育防治植物病虫害的基因重组菌株

本试验选用抗菌蛋白产生菌枯草芽孢杆菌(B.subtilis) TG26和晶体蛋白产生菌苏云金芽孢杆菌(B.thuringiesis subsp,pacifeus) AS1.904的营养缺陷型衍生株,在聚乙二醇的诱导下进行原生质体种间融合,获得了表现双亲遗传性状的种间融合菌株。融合率为7.52×10~6,融合子经传代10次,稳定率为19.5%。融合菌株的菌落和细胞形态与亲本株明显不同。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,融合菌株表达了亲本的抗菌蛋白和毒素蛋白。抑菌杀虫试验表明,融合重组菌株具有抑制多种植物病原菌和毒杀鳞翅目幼虫的能力。     

生物防治

950608 用球形芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌防治蚊虫[英]/Priest,F.G.…∥J.Appl.Bacteri01.-1992,72(5).-357~,369[译自DBA,1992,11(15),92-08601q 综述。 (1)害虫的生活周期、取食习性及栖息环境; (2)化学防治与生物防治比较I (3)苏云金杆菌作为鳞翅目与双翅目幼虫的生防因子(B.t菌分类学,质粒与毒素基因(晶体蛋白基因cryI、Ⅱ、Ⅲ、11f),以色列变种毒素作用机制,发酵等, (4)球形芽孢杆菌作为生防因子,毒素作用机制,发酵J (5)生防因子制剂与应用I (6)前景展望(制剂的优化,通过基因工程扩大生防因子的杀虫范围、提高生防因子的持久性,如…     

植物遗传工程

941564正在分解的转基因植株对土壤微生物数量种群的影响[会,英]/Donegan,K.K.…∥Abstr.Gen.Meet.-386[译自 DBA,1993,12(25),93-14508] 将不同品系遗传工程棉花(Gossypium hirsutum)(产生苏云金芽孢杆菌(Kursfaki变种的)晶体蛋白(CP)的组织置于土壤中,对当地土     

抗虫性增强的重组Bt晶体蛋白

为了获得具有新特性的苏云金芽孢杆菌晶体蛋白(Cry)并鉴定其参与杀虫活性的区段,植物育种和繁殖研究DLO-中心的Dirk Bosch及其同事经体内重组制备了含cryIC和cryIE的杂合基因。苏云金芽孢杆菌中的一些蛋白在菌体内以晶体形式累积并对多种昆虫幼虫有毒性,研究人员把这一现象用于植物遗传工程,以期能够提高植物对害虫的抗性。     

苏云金芽孢杆菌BMB005的代谢动力学

建立了苏云金芽孢杆菌BMB005的代谢动力学模型,成功地模拟了该菌株的生长、葡萄糖、聚-β-羟丁酸(PHB)、吡啶二羧酸(DPA)和毒蛋白(ICPs)变化过程,得到了菌体最大比生长速率、菌体对葡萄糖的得率系数、PHB对葡萄糖的得率系数、DPA和晶体蛋白的最大比生成速率以及DPA和晶体蛋白对PHB的得率系数等一系列重要动力学参数,为优化苏云金芽孢杆菌BMB005的发酵过程提供了基础。     

苏云金杆菌δ-内毒素、芽孢及苏云金素A对棉铃虫毒性及拒食性的比较

苏云金杆菌库斯塔克变种HD-1的晶体蛋白与芽孢、HD-1无晶体突变株(Cry-)的芽孢以及苏云金素A对棉铃虫Helicoverpa armigera毒性和拒食性的比较研究显示,HD-1晶体蛋白对棉铃虫的杀虫毒力高, 拒食作用强; HD-1芽孢对棉铃虫具有一定的杀虫活性和生长抑制作用, 并有很强的拒食作用; HD-1无晶体突变株(Cry-)芽孢对棉铃虫无毒也无拒食作用;苏云金素A对棉铃虫的生长发育有极显著的抑制作用, 但对棉铃虫无拒食作用,由此证明晶体蛋白是苏云金杆菌杀虫活性和拒食作用的主要来源。苏云金素A与苏云金杆菌芽孢晶体混合物一起使用, 可使棉铃虫的死亡率显著提高。     

苏云金芽孢杆菌Cry1Aa和Cry1Ca结构域交换对晶体形态和杀虫活性影响

通过体外重组的方法,实现了苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Aa和Cry1Ca的功能性结构域Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的互换,得到了6株苏云金杆菌重组菌株BT-ACC,BT-AAC,BT-ACA,BT-CAA,BT-CCA和BT-CAC。SDS-PAGE和Westernblot分析表明,重组菌株BT-CAA和BT-CCA能表达产生135kDa左右的杂交晶体蛋白Cry1CAA和Cry1CCA,但其蛋白表达量较野生型Cry1Aa和Cry1Ca低。用牛胰蛋白酶对杂交晶体蛋白Cry1CAA、Cry1CCA及野生型Cry1Aa和Cry1Ca进行消化,证明所有晶体蛋白都能产生65kDa的活性毒素。电镜观察发现,野生菌株BT-Cry1Aa和BT-Cry1Ca形成典型的菱形晶体,而重组菌株BT-CCA和BT-CAA则形成球形或颗粒状杂交晶体。纯化晶体的生物测定显示,杂交晶体蛋白Cry1CAA和Cry1CCA对甜菜夜蛾的毒力比野生型晶体蛋白降低3~5倍,对棉铃虫的毒力比野生型晶体蛋白降低了190~260倍。研究结果表明,苏云金杆菌晶体蛋白不同结构域的相互作用会影响杂交晶体蛋白的表达、晶体形态和杀虫活性。     

芽孢杆菌原生质体的形成、再生及种间融合的研究

原生质体融合技术不仅能使遗传基因高频率重组,而且可以集双亲优良遗传性状为一体.自Schaeffer等人成功地进行了微生物原生质体融合以来,这项技术便广为人们所接受.枯草芽孢杆菌分泌的抗菌蛋白能抑制多种植物病原菌的生长,苏云金芽孢杆菌生成的伴孢晶体蛋白可毒杀植物害虫.利用原生质体融合技术将这两种芽孢杆菌抑菌杀虫的遗传特性融为一体,选育出防治植物病虫害的新一代生防菌株成为可能,有关这方面的研究国内外尚未见报道.本文报道了抗菌蛋白产生菌TG26-10和晶体蛋白产生菌AS1.904-17原生质体的形成,再生及种间融合的影响因素,为进一步筛选目的融合子提供基础.     

芽孢杆菌原生质体的形成,再生及种间融合的研究

原生质体融合技术不仅能使遗传基因高频率重组,而且可以集双亲优良遗传性状为一体.自Schaeffer等人成功地进行了微生物原生质体融合以来,这项技术便广为人们所接受.枯草芽孢杆菌分泌的抗菌蛋白能抑制多种植物病原菌的生长,苏云金芽孢杆菌生成的伴孢晶体蛋白可毒杀植物害虫.利用原生质体融合技术将这两种芽孢杆菌抑菌杀虫的遗传特性融为一体,选育出防治植物病虫害的新一代生防菌株成为可能,有关这方面的研究国内外尚未见报道.本文报道了抗菌蛋白产生菌TG26-10和晶体蛋白产生菌AS1.904-17原生质体的形成,再生及种间融合的影响因素,为进一步筛选目的融合子提供基础.     

苏云金芽孢杆菌发酵液中晶体蛋白定量测定方法的探讨

探索了一种苏云金芽孢杆菌发酵液中晶体蛋白化学定量测定的方法。发酵液经离心技术处理后,其晶体蛋白由还原剂、变性剂组成的裂解液溶解,再用紫外光谱吸收法或考马斯亮蓝染色法定量。该方法测得的晶体蛋白量与经生物测定得到的毒力之间有较好的相关性,在苏云金芽孢杆菌的研究和生产上有一定的实用价值。     

苏云金芽孢杆菌的特异性结合蛋白研究

用3 2 P分别标记 3 0 8bpcry1A上游和 65 0bpcry1C上游片段 ,并将标记后的DNA与不同苏云金芽孢杆菌菌株的细胞粗蛋白进行凝胶阻滞反应。结果表明 ,cry1A和cry1C上游均能被苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种 (Bacillusthuringinensis subsp .kurstaki)的细胞粗蛋白特异性结合 ,而同一cry1基因上游序列可被不同多肽特异或非特异性竞争结合 ,不同的cry1基因上游序列也能同时被一种蛋白结合。说明苏云金芽孢杆菌某些特异细胞蛋白参与了cry1基因上游序列的转录调控作用 ,而不同的调节因子可能会竞争同一结合位点。库斯塔克亚种和鲇泽亚种 (B .thuringinensis subsp .aizawai)所含特异细胞蛋白在种类和作用上都有差异。     

生物防治因子

<正> 853243苏云金芽孢杆菌的产细菌素质粒[俄]/Ryabchenko,N.F.…//Genetika(Mosow).-1984,20(7).-1067～1070[译自DBA,1984,3(21),84-10124]苏云金杆菌莫氏亚种和苏云金杆菌栖肠亚种都是生防因子,它们所产生的细菌素分别称为turicin 8和turicin10。turicin 8和     

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白超量表达的机制

杀虫晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌主要杀虫成分,进一步提高杀虫晶体蛋白的表达量是苏云金芽杆菌高效工程菌构建的主要途径。本文讨论了ｃｒｙ基因启动子活性、ｍＲＮＡ稳定性、不同ｃｒｙ基因间的协同表达发及伴了孢晶体的形成等几个方面在转录水平或转录后水平上对杀虫晶体蛋白表达的影响。     

苏云金芽孢杆菌晶体蛋白的分子遗传学

本文综述了苏云金芽孢杆菌晶体蛋白研究的最新进展,着重阐述了晶体蛋白的分子遗传学,包括晶体蛋白基因的定位及分离、基因结构及其与蛋白质结构与功能的关系,基因在芽孢形成过程及在体外系统中的表达调节及其分子机制,指出了晶体蛋白基因研究在理论上的意义和在实际应用中的前景。