脂类代谢与冠心病的关系——Ⅲ.从我国人血清外观、血脂水平和脂蛋白电泳分型图谱对高脂蛋白血症分型的初步认识

本文目的在于通过血清外观(包括乳糜微粒试验)、血脂水平和脂蛋白分型电泳图谱的综合分析,对我国人高脂蛋白血症分型提出初步认识。一、33例正常人血清外观,有3例轻度混浊,乳糜微粒试验全部阴性。二、43例男性和28例女性的胆固醇相应为166.6±23.5和176,4±29毫克/100毫升;34例男性和28例女性的甘油三酯分别为107.42±41和104.4±29毫克/100毫升,两者在性别上均无统计学显著差异。三、采用累加频数分布曲线计算出胆固醇、甘油三酯和各个脂蛋白的正常高限:胆固醇为198毫克/100毫升,甘油三酯137毫克/100毫升,α-脂蛋白240毫克/100毫升(44.5%),β-脂蛋白309毫克/100毫升(57%),前β-脂蛋白124毫克/100毫升(22.5%)。四、通过测定胆固醇、甘油三酯浓度及血清外观可将高脂血症按高脂蛋白血症分型。在所测33名正常人中血清胆固醇的升高与β-脂蛋白的相符率达85.4%,甘油三酯与前β-脂蛋白的相符率亦达2/3以上。五、鉴于血清外观、血脂浓度通常与一定脂蛋白的浓度有关,因此可用血清外观及血脂测定来筛选高脂蛋白血症及初步预测其类型;相反,依据脂蛋白电泳图谱,不仅可对高脂蛋白血症的类型作出初步判断,也可对血脂水平作出大致估计,两者互相补充,彼此对照,再结合临床资料,无疑会增强辨别高脂蛋白血症类型的可靠性。最后,按照我们的初步认识,对四个高脂蛋白血症的病例作了分型的尝试。     

琼脂糖凝胶电泳及其应用于人血清β脂蛋白的分离和分型

1.本文用自制琼脂糖进行人血清蛋白质和脂蛋白电泳及免疫电泳均获得较理想的结果。2.用酒精处理透析膜做为琼脂糖凝胶的载膜透明无色不吸附油红“O”染料,获得了较理想的载膜,便于长期保存和分析,极适宜于光密度描绘和测定各种脂蛋白组分和百分含量。3.在清蛋白的存在下以自制琼脂糖进行电泳获得了清晰透明整齐,分辨力强的电泳图谱,可将人血清脂蛋白分为五种主要的脂蛋白,乳糜微粒,β脂蛋白,前β_2脂蛋白,前β_1脂蛋白和α脂蛋白五种,以及两种不经常出现的脂蛋白,极慢速的前β_3脂蛋白和前α脂蛋白。4.根据前β脂蛋白的出现与否,泳动的速度,出现的多少,染色的深浅以及乳糜微粒存在与否可将高脂蛋白血清电泳图谱分为八种不同的类型:即Ⅰ,Ⅱ_1,Ⅱ_2,Ⅱ_3,Ⅱ_4,Ⅲ,Ⅳ,及Ⅴ八种。5.自制琼脂糖电泳重复性较好,光密度测定同一标本获得了满意的结果。     

琼脂糖凝胶电泳及其应用于人血清β脂蛋白的分离和分型

1.本文用自制琼脂糖进行人血清蛋白质和脂蛋白电泳及免疫电泳均获得较理想的结果。2.用酒精处理透析膜做为琼脂糖凝胶的载膜透明无色不吸附油红“O”染料,获得了较理想的载膜,便于长期保存和分析,极适宜于光密度描绘和测定各种脂蛋白组分和百分含量。3.在清蛋白的存在下以自制琼脂糖进行电泳获得了清晰透明整齐,分辨力强的电泳图谱,可将人血清脂蛋白分为五种主要的脂蛋白,乳糜微粒,β脂蛋白,前β_2脂蛋白,前β_1脂蛋白和α脂蛋白五种,以及两种不经常出现的脂蛋白,极慢速的前β_3脂蛋白和前α脂蛋白。4.根据前β脂蛋白的出现与否,泳动的速度,出现的多少,染色的深浅以及乳糜微粒存在与否可将高脂蛋白血清电泳图谱分为八种不同的类型:即Ⅰ,Ⅱ_1,Ⅱ_2,Ⅱ_3,Ⅱ_4,Ⅲ,Ⅳ,及Ⅴ八种。5.自制琼脂糖电泳重复性较好,光密度测定同一标本获得了满意的结果。     

脂蛋白的研究 Ⅰ.人血清β脂蛋白的大量分离的新方法及其某些性质的研究

(1)本文利用大分子D.S.与β脂蛋白复合物的性质对血清β脂蛋白的大量分离及其某些性质进行了研究。(2)自制D.S.可以在中性pH与人血清β脂蛋白形成不溶的复合分子。该复合分子可以溶解于12%NaCl溶液中,并可用纯化学的方法分离,释放自由β脂蛋白。(3)该脂蛋白溶液经纸上电泳、琼脂凝胶电泳及琼脂免疫电泳的鉴定均证实为纯净的β脂蛋白,只有一种免疫性,不再含有可觉察出的D.S.。经超速离心分析,主要含有S,2—6的低密度脂蛋白及少量S_f值较高的β脂蛋白。(4)新鲜的β脂蛋白为草黄色液体,平均浓度为1克/100毫升,在可见光400—500mμ波长有三个明显的吸收峰,在紫外光275mμ波长有一吸收峰。于2℃冰箱保存二周或在4℃浓缩均不致产生沉淀。(5)本文对D.S.-β脂蛋白复合分子的性质进行了初步研究,并对其结合方式作了简单的讨论。(6)本文提供了一个简单、温和、不用长时间超速离心而可大量分离和浓缩血清β脂蛋白的化学方法。     

江豚血液学的初步研究

本文对从长江中获得的江豚进行了血液学、血液化学特征的测定和血红蛋白、血浆蛋白电泳图谱的研究。发现江豚的嗜中性粒细胞所占百分比较高,淋巴细胞的百分比较低,具有嗜碱性粒细胞。江豚血红蛋白的电泳类型为Ⅰ-Ⅱ,即电泳相对迁移率在人类Hb S和Hb F之间,并有4条非血红素蛋白带(NHP)。用醋酸纤维薄膜作支持物进行电泳,血浆的总蛋白(TP)带可分成8条主要的区带,从阳极到阴极依次是:前白蛋白(ζ)、白蛋白(A)和6条后白蛋白带(PA);然而用聚丙烯酰胺凝胶作支持物共可分成16条区带,其中14条后白蛋白带。脂蛋白(Lp)在聚丙烯酰胺凝胶上可分成4条区带:α_1-脂蛋白、α_2-脂蛋白和β-脂蛋白,分别相当于聚丙烯酰胺凝胶上总蛋白带电泳图谱中的PA9、PA10和PA11,而前-β-脂蛋白和乳糜微粒在起点处。运铁蛋白(Tf)的电泳图为一条区带,相当于PA6。     

上海市健康人血脂调查报告

在毛主席革命路线的指引下,我院医务工作者走出医院大门,深入工厂车间,街道里弄,为劳动人民查病、防病。本文报告我院自1973年10月至1974年12月调查1385名以工人为主的上海市健康人(自新生儿到102岁老年人)的血脂改变,所得结论如下: 1.血脂含量的频率分布:各年龄组胆固醇含量基本上呈正态分布,甘油三酯和β脂蛋白含量多数年龄组均呈偏态分布。2.血脂含量与年龄和性别的关系:一般均有随年龄而增高的趋势。胆固醇在50岁以前男女并无差别,50岁以后女性高于男性。甘油三酯50岁以前男性略高于女性,50岁以后女性显著增高超过男性。3.根据统计分析,求得健康劳动人民血胆固醇、甘油三酯和β脂蛋白的正常上限分别为180毫克/100毫升、110毫克/100毫升和500毫克/100毫升;过高界限分别为220毫克/100毫升、160毫克/100毫升和610毫克/100毫升。按国际暂行的分类标准,本组中出现的高脂蛋白血症以II_a、II_b和IV型最为多见。4.β脂蛋白含量与胆固醇和甘油三酯含量之间存在着密切关系。认为β脂蛋白测定是一项预测高脂血症的简便有效的方法。初步调查表明,我国人民血脂改变规律与西方资本主义国家不尽一样,可能与社会制度、民族特点、饮食习惯不同有关。     

S180腹水癌小鼠体液脂蛋白的探讨

 通过对患S(180)腹水癌小鼠的血清脂蛋白琼脂糖电泳分析,表明患癌小鼠的β蛋白逐渐增多,电泳的迁移率有减慢的趋势。通过对无细胞的腹水研究,发现其中相当于极低密度脂蛋白部分对癌细胞有较高的杀伤活性,而对正常的骨髓细胞无明显作用。该部分脂蛋白电泳迁移率比血清各种脂蛋白的迁移率均快。     

皂荚果实中皂苷O的分离鉴定及毒性研究

采用乙醇提取、正丁醇萃取、常压硅胶柱反复层析的方法,并结合杀鼠活性追踪,从豆科植物皂荚(Gleditsiasinensis Lam.)的果实中分离到一个含有7个糖基的三萜皂苷,通过TLC、mp、IR、MS、1 H-NMR和13 C-NMR等方法鉴定为3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基齐墩果酸28-O-β-D-吡喃木糖基-(1→3)-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[(6S,2E)-6-羟基-2,6-二甲基-2,7-辛二烯醇-(1→3)-(6′S,2′E)-6′-羟基-2′,6′-二甲基-2′,7′-辛二烯醇-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖酯[即皂荚皂苷O(GleditsiosidesO)]。对小鼠的急性毒性测定结果表明,试鼠对皂荚皂苷O经口灌胃的耐受量为160～400mg/kg,半数致死剂量LD50=249.52mg/kg,95%可信区间为224.81～276.95mg/kg;皂荚皂苷O对小鼠的急性毒性大于皂荚皂苷A。研究结果表明,皂荚皂苷O为皂荚的主要杀鼠活性成分。     

高纯度T4DNA连接酶的简便快速纯化

我们采用简便、快速、重复性好的肝素-琼脂糖和蓝色葡聚糖-琼脂糖柱两次亲和层析方法,纯化得到了高纯度的T4-DNA 连接酶。纯化了近690倍,比活高达5900单位/毫克蛋白。没有检测到脱氧核糖核酸酶的污染。聚丙烯酰胺-S.D.S.电泳显示清晰的一条蛋白带。     

高纯度T4DNA连接酶的简便快速纯化

我们采用简便、快速、重复性好的肝素-琼脂糖和蓝色葡聚糖-琼脂糖柱两次亲和层析方法,纯化得到了高纯度的T4-DNA连接酶。纯化了近690倍,比活高达5900单位/毫克蛋白。没有检测到脱氧核糖核酸酶的污染。聚丙烯酰胺-S.D.S.电泳显示清晰的一条蛋白带。     

多不饱和脂肪酸饮食对载脂蛋白E缺失小鼠含载脂蛋白B100脂蛋白代谢的影响

探讨不同多不饱和脂肪酸饮食对载脂蛋白E(apoE)缺失小鼠含apoB100脂蛋白代谢的影响.2月龄雄性载脂蛋白E缺失小鼠添加2%紫苏籽油或红花油饮食干预6周,检测其血脂和血清apoB100水平;测定肝脏组织中HMG-Co A还原酶活性;使用实时定量PCR分析肝组织中含apoB100脂蛋白代谢相关基因表达;蛋白质印迹(Western blot)检测PPARα蛋白表达;油红O染色检测肝细胞中脂质积累.结果显示,紫苏籽油饮食干预可降低血清LDL-C和apoB100水平,降低肝组织中HMG-Co A还原酶活性以及apoB100、FAS、HMG-Co AR、ACAT2、LRP、LDLR和SREBP-1c基因mRNA的表达,显著升高转录因子PPARα的mRNA和蛋白质水平,明显降低肝脏中脂质沉积.而红花油饮食干预后升高了小鼠血清甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇以及肝脏apoB100的mRNA表达水平,降低PPARα的mRNA和蛋白质水平,明显促进肝脏中脂质积累.结果提示在饮食中添加紫苏籽油可有效降低含apoB100脂蛋白的代谢,对动脉粥样硬化以及脂肪肝等疾病有更好的保护作用,对于正常人群以及家族性Ⅲ型高脂蛋白血症患者的日常膳食提供理论依据.     

治疗高血压药物的研究 海南岛萝芙木根总硷对狗冠脉血流的影响

气泡流量计法测定麻醉狗冠脉血流量。给药前11只狗血压、冠脉血流量及冠状血管阻力的平均数±标准差分别为:83±13毫米汞柱,80±14毫升/100克心肌/分及1.06±0.28毫米汞柱/(毫升/100克心肌/分)。静脉注射萝芙木根总硷0.2毫克/公斤后,血压降低了原水平的30—40%,对冠脉血流无明显影响,而冠脉阻力则显著降低。冠状动脉内注射0.1毫米未引起变化。因此认为萝芙木根总硷能使冠状动脉扩张,对高血压病人冠状循环机能不全情观可能有益。     

β_2微球蛋白的微量测定和应用

β_2微球蛋白(简称β_2mG)分子量小,因电泳显于β_2区带而得名,广泛存在于人各种体液中,是免疫球蛋白和移植抗原的一个组成成分,在生物学、免疫学和医学中已日益受到重视。本室建立血清β_2mG 放射免疫分析法(RIA),方法简便、特异性、灵敏度和重复性符合要求,对研究β_2mG的生理代谢及临床上诊断肾脏、肝脏及血液系统疾病是一种有用的辅助指标。一、材料和方法 1.人β_2mG 的提纯肾移植急、慢性排异期患者尿液,经硫酸铵粗提和凝胶 G100 层析、DE52 离子交换层析,收集洗脱液,     

活血化瘀中药复方治疗急性脑出血的疗效及对相关血清指标的影响

目的:探讨活血化瘀中药复方治疗急性脑出血的疗效及对星形胶质源性蛋白(S100β)、N-末端脑钠素原(NT-proBNT)、血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)及白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。方法:选择2015年3月到2016年7月84例在我院接受治疗的急性脑出血患者,随机分为对照组(n=42)和试验组(n=42)。对照组患者给予抗血小板、降脂、营养神经、抗凝、自由基清除、降低颅内压、静脉滴注依达拉奉等常规治疗,试验组在此基础上给予活血化瘀中药复方,疗程均为14d。观察并比较两组患者临床疗效、不良反应及治疗前后脑血肿体积、欧洲脑卒中评分(ESS)。检测并比较两组患者治疗前后血清S100β、NT-proBNT、hs-CRP及IL-6水平。结果:两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。试验组总有效例数37例,对照组总有效例数28例,总有效率高于对照组,有统计学差异(P0.05)。两组患者治疗后ESS评分高于治疗前,脑血肿体积小于治疗前,并且试验组患者ESS评分高于对照组,脑血肿体积小于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。两组患者治疗后血清S100β、NT-proBNT、hs-CRP及IL-6水平低于治疗前,试验组上述指标为(1.02±0.21)ng/mL、(120.26±19.47)pmol/L、(8.33±1.45)mg/L、(11.25±2.71)pg/mL,低于对照组的(1.45±0.24)ng/mL、(219.68±22.51)pmol/L、(16.92±2.70)mg/L、(20.07±4.62)pg/mL,有统计学差异(P0.05)。结论:对于急性脑出血患者,采用活血化瘀中药复方治疗其临床疗效确切,降低炎症反应,改善血清S100β、NT-proBNT水平,安全性较好,值得临床推广应用。     

复合诱变选育高效转化DHEA为7α,15α-diOH-DHEA的菌株及其转化工艺优化

结合酮康唑抗性筛选法,采用亚硝基胍和低能氮离子注入复合诱变方法筛选得到一株高效生物转化去氢表雄酮(D H E A)为3β,7α,1 5α-三羟基雄甾-5-烯-1 7-酮(7α,1 5α-d i O H-D H E A)的菌株亚麻刺盘孢C o l l e t o t r i c h u m l i n i S T-1,该突变株在底物D H E A投料浓度为1 0 g/L时产物摩尔得率达到3 4.2%,较出发菌株提高了4 6.2%。在此基础上进行培养基组分的优化,采用P l a c k e t t-B u r m a n实验设计考察转化培养基中各组分对产物摩尔得率的影响,有效筛选出葡萄糖、酵母粉和M g S O4·7 H2O浓度对产物摩尔得率影响显著,继而采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,并利用中心组合响应面设计实验对3个显著性因素的最佳水平进行研究,得到最适转化培养基组分为(g/L):葡萄糖2 6.3 4;酵母粉1 2.1 5;玉米浆3.0 0;F e S O4·7 H2O 0.0 1 5;M g S O4·7 H2O0.1 4;K H2P O40.9 0。采用该优化培养基,菌株C.l i n i S T-1的产物摩尔得率达到4 9.3%,较优化前提高了4 4.2%。     

研究: 多不饱和脂肪酸饮食对载脂蛋白E缺失小鼠含载脂蛋白B100脂蛋白代谢的影响

探讨不同多不饱和脂肪酸饮食对载脂蛋白E(apoE)缺失小鼠含apoB100脂蛋白代谢的影响．2月龄雄性载脂蛋白E缺失小鼠添加2%紫苏籽油或红花油饮食干预6周,检测其血脂和血清apoB100水平;测定肝脏组织中HMG-CoA还原酶活性;使用实时定量PCR分析肝组织中含apoB100脂蛋白代谢相关基因表达;蛋白质印迹(Western blot)检测PPARα蛋白表达;油红O染色检测肝细胞中脂质积累．结果显示,紫苏籽油饮食干预可降低血清LDL-C和apoB100水平,降低肝组织中HMG-CoA还原酶活性以及apoB100、FAS、HMG-CoAR、ACAT2、LRP、LDLR和SREBP-1c基因mRNA的表达,显著升高转录因子PPARα的mRNA和蛋白质水平,明显降低肝脏中脂质沉积．而红花油饮食干预后升高了小鼠血清甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇以及肝脏apoB100的mRNA表达水平,降低PPARα的mRNA和蛋白质水平,明显促进肝脏中脂质积累．结果提示在饮食中添加紫苏籽油可有效降低含apoB100脂蛋白的代谢,对动脉粥样硬化以及脂肪肝等疾病有更好的保护作用,对于正常人群以及家族性Ⅲ型高脂蛋白血症患者的日常膳食提供理论依据．     

HBV PreS2+S/IFN-α融合基因真核表达载体的构建及其表达

构建含HBV PrdS2+S和IFN-α融合基因的真核表达载体pcDNA3.1.S2S/IFN-α并在真核细胞中进行表达.应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension,简称SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段S2S/IFN-α,回收后直接克隆到pcDNA3.1 V5/His TOPO TA克隆载体,得到真核重组载体pcDNA3.1.S2S/IFN-α.然后用脂质体法转染Vero E6细胞.对重组载体进行了限制性酶切及PCR鉴定,证明连接正确;经间接免疫荧光检测证实该重组载体能在真核细胞中表达插入的外源性基因编码的融合蛋白.真核表达载体pcDNA3.1.S2S/IFN-α的成功构建及在Vero E6细胞中的有效表达,为进一步探讨HBV感染的特异性免疫治疗提供了实验依据.     

一次密度梯度超速离心分离人血清的VLDL、LDL、HDL_2、HDL_3及无脂血清

本文将密度梯度、离心力和离心时间作适当的组合和配比:即不连续密度梯度1.000—1,400g/mlNaBr溶液、离心力168,000g、22小时,10℃,在Beckman L8-80型、区带头Ti-14一次超速离心将血清中四种主要脂蛋白和无脂血清相互分开,获得五个明显的蛋白峰。前四个峰经琼脂糖电泳,聚丙烯酰胺电泳,免疫双扩散和分析超速离心鉴定分别为VLDL、LDL、HDL_2和HDL_3,不含清蛋白。峰五为无脂血清,仅含0.046mg/dl胆固醇和0.2mg/dl甘油三酯,本法重复性佳,分离样品多(50ml),效果好,操作简单,并可延长离心机头的使用期限。已用于研究各种因素对脂蛋白含量的影响及其代谢间的相互关系。     

白木香内生真菌Fimetariella rabenhorstii的甾体类代谢产物

从白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg)内生真菌Fimetariella rabenhorstii A20的发酵菌丝体中分离得到4个甾体类化合物.通过波谱分析,分别鉴定为5α,8α-桥氧-(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(1)、3β,6β,7α-三羟基-(24R)麦角甾...     

AST同工酶的琼脂糖凝胶电泳NBT显色法

分布于细胞内线粒体及细胞质中的天门冬氨酸氨基转移酶(AST·EC·2·6·1·1)是人血清中含有的两种同工酶,分别称为AST-m和AST-c同工酶.AST-c电泳迁移率介于血清α-球蛋白与β-球蛋白之间.AST-m电泳迁移率相似于γ-球蛋白,琼脂糖凝胶电泳固蓝B染色法对m-AST检出率较低.用NBT显色法则可得到较好效果.