前列腺素F-(2α)与促黄体素对黄体功能的调节控制——颗粒黄体细胞的亚显微结构研究

我们在黄体的组织化学研究中,已经指出了前列腺素F_(2α)(简称为PGF_(2α))有抑制黄体3β-OH-脱氢酶和激活酸性磷酸酶的明显效应。相反,促黄体素(简称LH)能使摘除垂体的孕鼠黄体保持正常3β-OH-脱氢酶活性[中国科学院北京动物研究所内分泌研究室细胞组(以下简称细胞组)1974]。最近黄体的亚显微结构工作逐渐增多,但观察前列腺素对黄体亚显微结构的影响报道较少,结果且不一致,因而,我们在黄体组织化学研究的基础上,进一步阐明PGF_(2α)和LH对黄体的调节控制机理,着重对内质网、线粒体、类脂滴和溶酶体等细胞器进行观察,了解它们是怎样影响细胞结构和这种改变与孕酮合成的形态与功能之间的关系,这可能对于探索前列腺素在控制生育方面的作用机理及临床实践有一定的指导意义。     

糖尿病大鼠肋间肌酶组织化学研究

目的探讨糖尿病早期肋间肌酶组织化学变化。方法应用酶组织化学方法观察糖尿病2周和4周大鼠肋间肌组织脱氢酶、水解酶和氧化酶活性变化。结果糖尿病2周大鼠肋间肌组织琥珀酸脱氢酶、谷氨酸脱氢酶和辅酶Ⅰ黄递酶活性较对照组增强,乳酸脱氢酶活性较对照组减弱,苹果酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、酸性磷酸酶、酸性-α-萘酸性酯酶和细胞色素氧化酶无变化。糖尿病4周大鼠肋间肌组织琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、谷氨酸脱氢酶、辅酶Ⅰ黄递酶、酸性磷酸酶和酸性-α-萘酸性酯酶活性较对照组增强,乳酸脱氢酶和细胞色素氧化酶活性较对照组减弱,异柠檬酸脱氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶无变化。结论糖尿病2周大鼠肋间肌组织有氧氧化代谢能力增强,糖酵解能力减弱。糖尿病4周大鼠肋间肌组织有氧氧化能力增强、糖酵解能力减弱及能量代谢紊乱。在糖尿病早期呼吸肌存在代谢异常。     

消旋15甲基前列腺素F_(1a)甲酯的抗生育作用和黄体溶解作用

目前用于临床中期引产和早孕流产的前列腺素(简称PG),主要是PGE_2和PGF_2α及其衍化物。国外资料中虽也有PGF_(1α)对实验动物抗生育作用的报告,但未见PGF_(1α)药理活性的详细资料,也无临床用于中期引产或抗早孕的成功报道。国内试以PGF_(1α)甲酯治疗奶牛持久黄体症及用于家畜同步发情等,效果卓著。     

百合花粉母细胞间染色质穿壁运动前次生胞间连丝形成的研究

百合花粉母细胞间染色质穿壁运动前(细线期到偶线期)的花药,用一般电镜制片法和铅沉淀法对酸性磷酸酶活性的细胞化学反应产物的定位实验,其结果总结如下:(1)形成次生胞间连丝通道水解作用所需的酶可能是由“类溶酶体”小泡或由内质网腔直接分泌的;(2)次生胞间连丝通道的水解作用,可在细胞壁的两边细胞同时开始,先形成半胞间连丝,然后贯穿??在一起;或从一侧开始,一直穿孔到另一边,最后两者都能形成胞间连丝;(3)用铅沉淀法进行的酸性磷酸酶细胞化学的定位实验表明:在质膜、内质网、类溶酶体小泡中的酶活性反应产物沉积的部位与一般电镜法制备的切片上看到的电子致密度物质的分布情况完全一致,(4)用X-射线微区能谱分析的结果表明:沉淀物中含有铅元素,确实是磷酸铅。因此我们推测所谓“类溶酶体”以及内质网所分泌的水解酶,可能具有果胶酶、纤维素酶和半纤维素酶的性质,它们都能降解、穿孔各自的细胞壁形成胞间连丝。     

磷脂酶C第二信使系统参与牛小黄体细胞甾体激素生成

黄体生成素(LH)是黄体细胞孕酮合成的主要调节因子,以cAMP作为它的第二信使。LH与其受体相互作用后除激活腺苷酸环化酶(AC)系统外,还能启动cAMP合成步骤以外的一个负调节信号。由于黄体溶解因子前列腺素F_(2a)(PGF_(2a))在抑制牛小黄体细胞孕酮分泌的同时,增加细胞IP_3的水平;而且LH也能     

秦岭地区大林姬鼠(Apodemus peninsulae)的酯酶和苹果酸脱氢酶同工酶的研究

用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分析了大林姬属(Apodemus peninsulae)心、肝、脾、肾和腿肌的α—酯酶、β—酯酶和苹果酸脱氢酶同工酶。结果表明3种同工酶的活性在5种器官组织中均有明显差异,其中以肝组织的酯酶活性最高;不同器官组织的酶谱也有明显差别,如脾的β—酯酶仅有B区带;同一器官组织通常以α—酯酶活性高于β—酯酶。苹果酸脱氢酶在碱性溶液中染色,肝组织有明显的AB区。心肌与腿肌的苹果酸脱氢酶活性略高于其他组织。     

GnRH-a对卵巢黄体期生殖激素水平及卵泡募集的影响

目的:探讨黄体期垂体生理性抑制的情况下,应用GnRH-a后对于垂体和卵巢激素分泌水平及卵泡发育过程的影响.方法:选择体外受精(IVF)或单精子卵胞浆内注射(ICSI)治疗的不孕妇女,给予常规长方案促排卵,并随机分为短效达菲林组(14人)及长效达菲林组(6人),两组分别于黄体中期开始给予每日短效达菲林0.05mg皮下注射或长效达菲林1/3支(1.25mg)单次注射处理.测定患者注射0、2、4日(对应于排卵后第7、9、11日)以及下一月经周期第2日外周血促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌激素(E2)及孕酮(P)水平.结果:两组FSH,LH水平在用药后第2天均达到最高值,随后呈现逐渐下降趋势,不同时间点问差异有显著性(P＜0.01).两组E2水平在用药后呈现逐渐下降的趋势,但是不同时间点间差异无显著性.短效达菲林组P水平用药前后无明显变化,长效达菲林组P水平在用药后呈现逐渐下降的趋势,但是各时间点无显著性差异.结论:自然周期黄体期或服用短效避孕药周期应用GnRH-a是否能使FSH及LH升调节,从而使得卵泡过早募集.     

密度梯度离心分离大鼠卵巢卵泡膜细胞

探讨用密度梯度离心法快速、有效地分离大鼠卵泡膜细胞.选取23～25 d雌性大鼠卵巢,用Percoll密度梯度离心法将卵泡膜细胞分离纯化,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)组织化学染色用于卵泡膜细胞纯度检测.分别用0.1 U/mL和1.0 U/mL卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)及黄体生成素(luteinizing hormone,LH)处理细胞,无血清培养48 h后,酶联免疫法检测培养液中雄烯二酮和雌二醇的水平.分离所得细胞中,3β-HSD染色阳性细胞与总细胞数之比大于90％; LH组的雄烯二酮水平显著高于对照组和FSH组(P＜0.05),LH组中1.0 U/mL组的雄烯二酮水平又高于0.1 U/mL组.各组均未检测到雌二醇及孕酮.3β-HSD组织化学染色可快速有效地检验所分离的卵泡膜细胞的纯度,分离所得的卵泡膜细胞可对LH产生反应,且其中几乎没有混杂颗粒细胞.     

粉红单端孢Trichothecium roseum对雄甾-4-烯-3,17-二酮的生物转化

雄甾-4-烯-3,17-二酮（4AD）是甾体化合物合成过程中的关键中间体,其羟化产物通常具有良好的药理活性或作为工业生产甾体药物的重要中间体。利用粉红单端孢Trichothecium roseum对4AD进行生物转化,从其发酵提取物中共分离鉴定了3个4AD羟基化产物：6β-羟基-雄甾-4-烯-3,17-二酮（6β-OH-4AD,1）,14α-羟基-雄甾-4-烯-3,17-二酮（14α-OH-4AD,2）,6β,14α-双羟基-雄甾-4-烯-3,17-二酮（6β,14α-di-OH-4AD,3）,表明T. roseum对4AD的C-6β位和C-14α位具有较强的羟化能力,其中14α-OH-4AD(2)可作为合成强心甾类化合物毛地黄毒素的重要中间体,6β,14α-di-OH-4AD(3)可作为合成具有抗肿瘤活性的14α-羟基-雄甾-4-烯-3,6,17-三酮的重要中间体。提供了1株能够高效制备活性甾醇中间体14α-OH-4AD和6β,14α-di-OH-4AD的菌株,同时可为研究其他甾醇药物奠定基础。     

丛枝菌根真菌影响宿主植物蒺藜苜蓿根系酸性磷酸酶活性的跨世代效应

丛枝菌根真菌(AMF)能够通过增强宿主植物根系分泌酸性磷酸酶帮助其适应低磷环境,但这种可塑性改变能否跨世代传递并影响后代适应低磷环境,仍不清楚。本研究通过亲代实验(实验1)和子代实验(实验2),研究AMF影响宿主植物蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)根系酸性磷酸酶分泌的跨世代效应。实验1表明,土壤低磷水平下接种AMF的亲代宿主植物根系酸性磷酸酶活性显著提高,且根际土中有更高的酸性磷酸酶活性和有效磷含量。而高磷水平下,接种AMF处理的宿主植物酸性磷酸酶活性与不接种AMF的处理无显著差异。实验2表明,在当代低磷环境下,来自亲代低磷接种AMF的后代,其根系和根系分泌的酸性磷酸酶活性显著高于来自亲代低磷不接种AMF的后代,而亲代高磷处理的后代(有AMF和无AMF)之间酸性磷酸酶活性无显著差异。在当代高磷环境下,来自亲代不同处理的后代根系和根系分泌的酸性磷酸酶活性均无显著差异。本研究表明,AMF对宿主植物根系分泌酸性磷酸酶的生理可塑性能够跨世代传递,且该跨世代效应受到亲代磷水平的影响。     

岩原鲤促性腺激素基因的克隆和组织表达差异

通过RT-PCR技术从岩原鲤(Procypris rabaudi)卵巢组织中克隆了促性腺激素GtHα、FSHβ、LHβ3个亚基的mRNA序列。GtHα亚基开放阅读框长357 bp,编码118个氨基酸残基,第1～23个氨基酸为信号肽。FSHβ亚基开放阅读框长393 bp,编码130个氨基酸残基,第1～22个氨基酸为信号肽。LHβ亚基开放阅读框长444 bp,编码147个氨基酸残基,第1～28个氨基酸为信号肽。氨基酸序列比对结果表明,GtHα亚基在近缘物种间比较保守,其氨基酸序列的相似性要高于FSHβ和LHβ亚基。通过Real-time fluorescent quantitative PCR(FQ-PCR)分析发现,GtHα亚基在检测的6种组织中均有表达,卵巢中的表达量极高,肝、脑、心、垂体和肌肉中表达量依次降低;FSHβ亚基在除肌肉外的其余5种组织中均有表达,卵巢中的表达量最高,脑和心中表达量次之,肝和垂体的表达量明显偏低;LHβ亚基只在卵巢和垂体中表达,卵巢中的表达量要明显高于垂体。     

香菇多糖对小鼠骨髓树突状细胞表型和功能的影响

通过研究香菇多糖(Lentinan,LNT)对小鼠骨髓源树突状细胞(bone marrow dendritic cells,BMDCs)功能调节的机制,进一步阐明香菇多糖的免疫活性。本实验将BMDCs分成脂多糖(LPS)阳性对照组、LNT处理组和RPMI1640空白对照组,应用酸性磷酸酶活性检测、流式细胞仪检测技术、吞噬实验、酶联免疫吸附试验检测各组BMDCs表型和功能的各种指标。结果显示,LNT(50μg/mL)处理组BMDCs酸性磷酸酶活性降低;BMDCs吞噬能力比RPMI1640空白对照组明显下降;BMDCs表面MHCⅡ、CD40、CD83、CD80、CD86和DEC205的表达增加;BMDCs白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达增加。证明了适宜浓度的LNT可以促进BMDCs表型及功能的成熟。     

抑素特异性地降低垂体 FSHβmRNA 水平

澳大利亚 Mercer 等研究了牛卵泡液抑素对母羊(下丘脑和垂体间中断及卵巢已切除)垂体 LH 和 FSHβ、α亚基以及 PRL 等的 mRNA 浓度的影响。实验母羊预先给予 GnRH 脉冲,每2h 一次,共给一周,以维持垂体的功能。动物给予牛卵泡液(2ml/只)6h 后(牛卵泡液每 ml 相当于9～18kU 抑素),垂体 FSHβmRNA浓度下降约80%,同时血浆 FSH 浓度仅下降8%,30h 后,血浆 FSH 浓度下降50%时,垂体 FSHβmRNA浓度下降90%之多。说明抑素选择性地降低 FSHβ基因表达水平,而并不是简单地抑制 FSH 从垂体释放。     

不同作业方式对落叶松人工林土壤养分及酶活性的影响

本文以22年生落叶松人工林为研究对象,通过分析不同作业方式(对照:900株·hm-2;中度间伐:750株·hm~(-2);强度间伐:450株·hm-2;皆伐:0株·hm~(-2))不同土层(表层:0~10 cm;亚表层:10~20 cm)土壤养分、土壤酶活性的变化以及土壤养分和酶活性之间关系,揭示不同作业方式对落叶松人工林土壤肥力的影响。结果表明:(1)与对照相比,强度间伐显著降低表层土壤全氮和全磷含量,以及亚表层土壤的全碳、全氮、全磷含量和p H,皆伐仅降低表层土壤的全磷和亚表层土壤的全氮和全磷含量,但强度间伐与皆伐对土壤有效磷和无机氮无显著影响;(2)与对照相比,中度间伐显著提高表层土壤酚氧化酶、外切葡萄糖苷酶和β-葡萄糖苷酶活性,而强度间伐显著降低表层和亚表层土壤酸性磷酸酶活性,皆伐显著降低表层土壤的酸性磷酸酶活性;(3)与对照相比,中度和强度间伐均显著提高土壤多种酶(酚氧化酶、外切葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶和N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶)的相对活性,皆伐只显著提高酚氧化酶/全氮的活性;(4)相关分析表明:5种酶与土壤全碳、全氮、全磷、无机氮均呈极显著相关。综上,中度间伐既有利于提高土壤酶活性,又未显著减少土壤养分含量,为落叶松人工林生态系统的可持续经营提供科学依据。     

大鼠松果腺中前列腺素含量与卵巢功能的关系的初步研究

用放射免疫法测定松果腺中 PGF_(2α)、PGE_1含量;用放射受体法测定外周血浆和垂体组织的 LH 含量。实验结果表明,在静止期用雌激素、卵巢切除和卵巢切除加用雌激素的大鼠,PG_S、LH 含量皆明显高于正常静止期含量(p<0.01);在卵巢切除加用孕激素的大鼠,PG_S、LH 含量明显低于卵巢切除大鼠含量(p<0.01);卵巢切除同时加用雌激素和孕激素的动物,则 LH 含量不增加,而松果腺中 PG_S 含量则仍然高于对照。可见外源性卵巢甾体激素的变化将导致松果腺中 PG_S 含量的变化,即小剂量雌激素可增加松果腺中 PG_S 的合成或释放,而孕激素则抑制松果腺中 PG_S 的合成或释放,同时与垂体 LH 的释放相似。松果腺中 PG_S 的作用机理,作者在讨论中指出的假设认为:松果腺中 PG_S 释放,可通过血液或脑脊液,作用于下丘脑、垂体,从而参予下丘脑-腺垂体-性腺轴的调节。     

多巴胺能药物对虎纹蛙GnRH和LH分泌活动的影响

利用在体注射实验和放射免疫测定法,研究了多巴胺能药物对性腺处于再发育期虎纹蛙的促性腺激素释放激素（GnRH)及促黄体激素（LH)分泌活动的影响。结果是：多巴胺（DA）及其激素剂阿扑吗啡（APO）可显著降低血浆LH水平;而多巴胺的拮抗剂－地欧酮（DOM）可显著增加垂体LH含量。DA对脑中cGnRH-Ⅱ的合成有抑制作用,而OM对其mGnRH的释放有一定的刺激作用。结果表明：DA可在脑及垂体水平分别抑制虎纹蛙GnRH和LH的释放,DA对LH释放的抑制作用很可能是通过D2受体实现的。     

抚仙金线鲃促性腺激素亚基基因克隆及组织表达分析

抚仙金线鲃Sinocyclocheilus tingi是云南抚仙湖特有种,虽然实现了人工繁殖,但在塘养环境下仍无法自然繁衍。鱼类的生殖活动受下丘脑-垂体-性腺轴的调控,其中促性腺激素在该过程中起重要作用。本实验利用实时荧光定量PCR和c DNA末端快速扩增技术从抚仙金线鲃垂体中克隆了GTHα、FSHβ和LHβ3种基因的c DNA序列,其中GTHα的开放阅读框(ORF)长度为357 bp,编码118个氨基酸,有10个半胱氨酸残基和2个N-糖基化位点;FSHβc DNA全长为856 bp,ORF长度为393 bp,编码130个氨基酸,有11个半胱氨酸残基和1个N-糖基化位点;LHβc DNA全长为930 bp,ORF长度为441 bp,编码146个氨基酸,有12个半胱氨酸残基和1个N-糖基化位点。实时荧光定量PCR结果显示,GTHα和LHβ都只在雄鱼和雌鱼的垂体中表达。FSHβ在垂体中表达量最高,在雌鱼和雄鱼的脂肪、肌肉和雄鱼的精巢和肝脏中有少量表达。本研究为抚仙金线鲃的人工繁育提供了重要的基础数据。     

处于性腺不同发育阶段斜带石斑鱼垂体的EST表达差异分析

斜带石斑鱼是重要的海产经济鱼类,在其个体发育过程中存在先雌后雄的天然性反转现象。垂体是调节生长和生殖等生理过程的重要内分泌器官。构建了斜带石斑鱼分别处于卵巢发育起始和性反转后期的垂体SMARTcDNA的质粒文库,并通过测序分别筛选到232个和258个表达序列标签(expressed sequence tags,EST)。将所得EST与GenBank数据库中的序列进行比对,结果表明,处于卵巢发育起始和性反转后期斜带石斑鱼垂体EST中,激素所占比例均为最高,分别为40.5%和34.9%。进一步比较分析了这两个性腺发育时期斜带石斑鱼垂体EST中各种激素相对表达丰度,表明生长/催乳激素家族(GH、PRL和SL)和阿黑皮素原(POMC)表达水平下降;促性腺激素α亚基(GTHα)表达水平急剧上升,促滤泡激素β亚基(FSHβ)、促黄体激素β亚基(LHβ)表达水平上升。     

15甲基前列腺素F_(2a)对在位兔子宫收缩和电活动的影响

前列腺素及其类似物用于催产和中期引产的效果是肯定的,在同内外都已积累了不少经验。用前列腺素终止早期妊娠的初步试验也是令人鼓舞的。因前列腺素在体内迅速被代谢破坏,临床上需在短时间内反复给药,方能取得较好效果。因前列腺素F_(2α)(PGF_(2α))的15甲基衍化物不被15羟基前列腺素脱氢酶灭活,所以作用强度和时间都有增加(Bundy等,1973;Bygdeman等,1972)。1974年上海市前列腺素科研协作组化学合成成功15甲基前列腺素F_(2α)(15甲基PGF_(2α))供药理和临床试验。经过初步药理试验后,临床上应用15甲基PGF_(2α)肌肉注射的方法进行中期引产已获成功,并正开展抗早孕试验。目前关于15甲基PGF_(2α)对子宫作用的药理研究报道尚不多见,既有的也多为离体实验的结果。为阐明15甲基PGF_(2α)的作用原理,本工作在整体情况下,就其对兔子宫收缩和电活动的影响进行了初步研究。     

促黄体素β基因表达中的转导通路及转录因子

促性腺激素释放激素 (GnRH)为下丘脑促垂体激素 ,其脉冲式地释放调节垂体促卵泡素(FSH)和促黄体素 (LH)的合成与释放 ,进而调节动物的生殖活动。LH是由α亚基和 β亚基组成的异二聚体糖蛋白激素 ,其中 β亚基决定激素的特异性。LHβ基因的表达是由GnRH诱发的 ,此过程主要依靠PKC和Ca2 两类信号通路 ,并调节LHβ基因的表达。目前已经发现 ,多种转录因子 ,如早期生长反应基因 (Egr 1)、核受体SF 1基因、Ptx1基因和Sp1基因等 ,通过与LHβ亚基基因的启动子区直接结合 ,而对该基因的表达进行调控。