应用双抗原ELISA夹心法检测破伤风抗毒素效力的试验

作者建立了一套适用于破伤风抗毒素效力检测的双抗原夹心ELISA法,对破伤风类毒素免疫后的豚鼠和马匹分别进行了血清效价测定,并和传统的小鼠攻毒法的效力检测进行了比较,结果表明：该检测方法与小鼠攻毒法对不同水平的破伤风抗毒素效力检测,结果是一致的,有很好的相关性;此法省时、特异、灵敏,可成为另一种检测破伤风抗毒素的有效方法。     

双抗体夹心ELISA法检测狂犬病疫苗抗原活性组分

采用多克隆双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法快速检测狂犬病毒抗原含量。结果表明,灵敏度达到１５μｇ／ｍｌ,同时特异性及变异系数均合乎要求。本方法用于精制狂苗制备过程中有效抗原活性组分的检测准确、快速、重复性好,且抗原的ＥＬＩＳＡ效价与ＮＩＨ动物法测定效价具有平行趋势。     

应用双抗体夹心ELISA法定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体中的IgG含量

采用山羊抗人IgG作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG作为标记抗体,建立一种双抗体夹心法用于定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体的IgG含量。以纯化的IgG作标准,用平行线法测得亲和层析纯化的人源破伤风毒素单克隆抗体G2的含量为0．512μg／ml,与分光光度法测得的结果基本一致。因而样品检测采用纯化G2作参考标准,制作标准曲线,测定了已知样品和未知样品的抗体含量。结果表明本法重复性好,特异性强,可定量测定培养及纯化样品中人源单克隆抗体的含量。     

双抗体夹心ELISA法检狂犬病疫苗抗原活性组分

采用多克隆双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法快速检测狂犬病毒抗原含量。结果表明,灵敏度达到１５μｇ／ｍｌ,同时特异性及变异系数均合呼要求,本方法用于精制狂苗制备过程中有效抗原活性组分的检测准确,快速,重复性好,且抗原的ＥＬＩＳＡ效价与ＮＩＨ动物法测定效价具有平行趋势。     

临床应用重组SARS病毒双抗原夹心诊断试剂盒的检测效果评价

严重急性呼吸综合征(severe acute respiralory syndrome,SARS)的临床表现为非典型性肺炎.继加拿大首次完成SARS病毒株Tor2的全基因组测序后[1],世界卫生组织(WTO)宣布一种新型的冠状病毒(coronavirus)是引发SARS的病原体[2,3].由于SARS具有极强的传染性和较高的病死率(5%～15%),且早期疾病体征较难与某些非SARS病毒引起的非典型肺炎相区分[4],由此导致大量疑似病例无法确诊,以及因误诊引起的交叉感染给人们造成巨大的心理压力和社会恐慌.所以,建立快速、准确的早期诊断方法显得尤为重要.目前的实验室诊断方法中,主要有基于病毒抗体检测的免疫荧光法和酶联免疫吸附试验(ELISA),以及基于基因检测的多聚酶链式反应(PCR)和基因芯片法.其中ELISA主要是使用病毒裂解抗原,检测病毒IgG及IgM抗体的间接ELISA.由于病毒裂解抗原的复杂性,以及间接ELISA中二抗带来的假阳性结果,间接ELISA试剂在正常人群中有1.5%～2%的阳性结果.     

聚合破伤风类毒素抗原特性的研究

由戊二醛脱毒的聚合破伤风类毒素,经高压液相层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,类毒素中多聚体含量占８１．９％以上,多聚体分子量为８００ｋＤ,常规破类多聚体仅占有２．２４％。聚合破类免疫豚鼠后,平均心血抗体单位达２ＩＵ／ｍｌ,常规破类仅为０．７５ＩＵ／ｍｌ（Ｔ＝１３．１５,Ｐ＜０．００１）,聚合破类免疫马匹后所诱发的抗体水平较常规抗原的高。     

重组人类T淋巴细胞白血病病毒抗原及双抗原夹心法ELISA抗体诊断试剂盒的研制

为研制灵敏、特异的抗人类T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗体诊断试剂,将一段HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱenv区嵌合基因在大肠杆菌中表达,获得的重组抗原具有良好活性.将该抗原作为酶标记抗原建立双抗原夹心法ELISA(dsELISA),对31份HTLV-Ⅰ型血清和19份HTLV-Ⅱ型血清均能100%检出,而在5 065份各种阴性血清中特异度为99.94%.用dsELISA试剂与进口间接法试剂(GeneLabs试剂)平行检测18份HTLV-Ⅰ参比血清、17份HTLV-Ⅱ参比血清和1 024份献血员血清,结果dsELISA试剂正确率为100%,对HTLV-Ⅰ型血清和HTLV-Ⅱ型血清的反应性基本相同,平均s/co值显著高于GeneLabs试剂.而GeneLabs试剂对HTLV-Ⅱ型血清的反应性显著弱于Ⅰ型,并有2份BBI参比血清中的Ⅱ型血清漏检.另外,GeneLabs试剂在献血员血清中出现9例假阳性,特异性显著低于dsELISA试剂.这些结果表明:所研制的dsELISA试剂可用于HTLV-Ⅰ型和Ⅱ型血清的检测,其灵敏度和特异度均优于进口间接法诊断试剂.     

双佐剂包被的破伤风类毒素马匹免疫试验

为提高破伤风免疫马匹的血浆抗体效价,应用不同佐剂配制TT抗原,进行马匹超免疫比较研究;采用FIA和植物油双佐剂包被与单佐剂包被的TT抗原,注射马匹进行超免疫,比较三组血浆的效价;结果显示,双佐剂抗原较单佐剂的免疫效果好,但可能对马匹刺激较强,有待调整注射剂量和免疫程序。     

一种提高破伤风类毒素马匹免疫成功率的方法

采用抗原加倍方法用于成率率低于705群的巴匹免疫,结果显示,进一步免疫成功的马匹明显多于常规免疫（P＜0．05）,免疫效价和死亡率无明显变化（P＞0．05）。     

猴T淋巴细胞趋向性病毒1型双抗原夹心ELISA检测试剂盒的研制

目的研制灵敏度和特异性高的检测实验猴血清中T淋巴细胞趋向性病毒-1型（STLV-1型）／E体的双抗原夹心ELISA（dsELISA）检测试剂盒。方法采用经原核表达系统表达并纯化的人T淋巴细胞白血病病毒-1型（HTLV-1型）的Env蛋白作为包被用抗原,建立了检测STLV-1的dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂,确定了dsELISA诊断试剂盒的相关条件,并经敏感性、特异性和重复性试验考查该试剂盒质量。结果试剂盒特异性好,批内重复试验变异系数（CV）〈7％,批间重复试验CV〈10％。对200份猴血清进行随机检测,与国际公认的诊断试剂盒（美国BioReliance公司）的符合率为97％。结论本试剂盒可初步应用于临床上实验猴STLV-1型抗体的检测。     

呼吸道合胞病毒IgG酶联检测试剂盒的研制

为了研制检测呼吸道合胞病毒IgG的酶联检测试剂盒,以呼吸道合胞病毒Long株病毒液作为包被抗原,HRP标记羊抗人IgG作为信号抗体,制备ELISA抗体检测试剂盒。结果表明建立的RSV酶联检测试剂盒敏感性与进口试剂盒接近,特异性达 95. 24%,重复性好,批内变异系数为 6. 35%,试剂盒置于 37℃ 0天与 7天检测结果无显著差异。成功制备了RSVIgG酶联检测试剂盒。     

人巨细胞病毒IgG酶联免疫检测试剂盒的研制

为研制人巨细胞病毒 (HCMV)IgG酶联检测试剂盒 ,将HCMV接种人二倍体细胞 ,收获的病毒经纯化后用作包被抗原 ,辣根过氧化物酶 (HRP)标记羊抗人IgG为检测抗体 ,采用间接ELISA制备酶联免疫检测试剂盒并进行检定。该试剂盒操作简便、特异性强 ,稳定性、线性及精密性符合体外诊断试剂的要求。     

百日咳抗体酶联检测试剂盒的研制及其应用

为了研制百日咳抗体酶联检测试剂盒以调查吉林省2~8岁儿童百日咳、白喉及破伤风抗体水平。采用百日咳菌液经硫酸铵盐析、PBS溶液浸提及蔗糖密度梯度离心提取的PT和FHA作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG,作为抗体制备ELISA试剂盒。并经敏感性、特异性、重复性试验考查该试剂盒质量。结果显示,试剂盒敏感性可达0.0036 IU/m l;重复性较好,CV<4%。试剂盒置于37℃3d敏感性无明显变化。吉林省2~8岁儿童白喉、破伤风的抗体水平较高,百日咳的抗体水平相对较低。此方法制备的百日咳抗体酶联检测试剂盒的质量符合要求,可应用于临床检验与流行病学监测。     

肺炎支原体ELISA检测试剂盒的临床应用

目的评价肺炎支原体ELISA检测试剂盒在临床应用的效果。方法用肺炎支原体ELISA检测试剂盒检测呼吸道感染患儿的咽拭子标本,并以肺炎支原体快速检测培养基试剂做同步盲法对照试验,分析该试剂盒的准确性及批内、批间产品的稳定性。结果在100例呼吸道感染患儿咽拭子标本中,肺炎支原体ELISA检测法阳性率为38%,肺炎支原体快速检测培养基法阳性率为37%,两种方法阳性结果符合率为97%。同步盲法试验结果显示,肺炎支原体ELISA检测试剂盒批内、批间产品阳性结果的一致率均为100%。结论该试剂盒具有较好的准确度和特异性,并且操作简便、快速,临床可推广应用。     

用ELISA一步法检测白色念珠菌

用白色念珠菌临床分离株免疫家兔并经纯化获得特异性抗体,建立了检测临床标本中白色念珠菌抗原的ＥＬＩＳＡ一步法,此法的敏感性为９９％,特异性为９８３％,与其它念珠菌和临床常见细菌均无交叉反应,整个反应只需１小时即可完成,可望成为一种取代培养法的快速诊断方法     

用国产重组抗原研制丙肝病毒抗体检测试剂

用克隆表达的丙型肝炎病毒核心蛋白及非结构 3区蛋白、非结构 4区蛋白和非结构 5区蛋白作为抗原 ,研制装配了第三代丙肝病毒抗体检测试剂。用该试剂检测国家第三代丙肝病毒抗体检测试剂标准血清 ,40份阴性血清全部符合 ,40份阳性血清出现 1份假阴性。分析探讨了各种影响试剂质量的因素     

双抗夹心ELISA法在无细胞百日咳疫苗生产质控中的应用

实验中对无细胞百日咳疫苗的脱毒工序优化后,采用双抗夹心ELISA法来检测百日咳有效组分含量,同时采用效价试验方法来验证结果。ELISA法定量测定有效成分的结果和效价试验结果均证明达到《中国药典》三部2005版的要求。由于双抗夹心ELISA法特异性强,灵敏度高,适用于无细胞百日咳疫苗生产各个环节的质量控制。     

Application of sandwich ELISA for detecting tag fusion proteins in high throughput

Based on a series of mAbs against four frequently used tags—the human Ig Fc fragment, GST, maltose-binding protein, and thioredoxin—we developed corresponding sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect these tag fusion proteins. As a supplement for Western blot, the successfully established ELISA was specific, sensitive, quantitative, easy to perform, time-saving, and last but not least, suitable for high-throughput screening of tag fusion proteins. Determination of soluble tag fusion proteins expressed by various systems with the sandwich ELISA developed in the present study could be a valuable and promising tool for the wide application of tag-protein fusion systems in the rapidly growing field of proteomics research. Zhu-wei Xu, Tao Zhang, and Chao-jun Song Contributed equally to this work.     

Development of a sandwich ELISA for the quantification of enterovirus 71

Since 2008, enterovirus 71 (EV71) has been responsible for high-mortality seasonal epidemics of hand, foot and mouth disease in China. Currently many groups in the world are in the process of developing EV71 vaccines to combat this deadly disease. We have developed three EV71-specific monoclonal antibodies, and in this study we report the establishment of a fast and cost-effective sandwich ELISA kit for measurement of virus concentration in EV71 vaccines using a pair of mouse anti-EV71 monoclonal antibodies. The system is specific for EV71 virus, with no cross-reactivity to coxsackievirus A16, H1N1, rabies, and hepatitis A. Using a reference EV71 vaccine standard, the sensitivity of the assay kit was determined to be 0.82 U/ml, with a linear range between 3.75 and 120 U/ml.