温肾固疏方对PMOP大鼠骨密度及细胞因子表达的影响

通过观察温肾固疏方对去卵巢骨质疏松(PMOP)大鼠的骨密度及对白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的血清含量和转化生长因子-β骨组织表达的影响,探讨其治疗骨质疏松的可能作用机制。将48只SPF级雌性SD大鼠分为6组:假手术组、模型组、雌激素组、温肾固疏方高、中、低剂量组。造模4周后开始给药,连续给药12周,酶联免疫法(ELISA)检测外周血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量;q RT-PCR法检测骨组织转化生长因子-β(TGF-β)m RNA含量。与假手术组相比较,去势模型组大鼠骨密度(BMD)、TGF-β mRNA显著降低(p0.05),而IL-1β、TNF-α、IL-6均显著升高(p0.01),符合绝经后骨质疏松症改变;干预治疗后,与模型组比较,温肾固疏方高、中剂量组椎骨BMD显著升高(p0.05),IL-1β、TNF-α、IL-6显著减少(p0.05),温肾固疏方高剂量组TGF-β mRNA显著增加(p0.05)。温肾固疏方治疗骨质疏松的作用机制可能与其下调IL-1β、TNF-α、IL-6等促炎细胞因子的表达,抑制骨吸收;同时上调TGF-β等抑炎细胞因子的表达,促进骨形成有关。     

17β-雌二醇和跑台运动对去卵巢大鼠骨组织及子宫ERα蛋白表达影响的对比研究

目的：雌激素受体α（ERα）作为雌激素调节骨效应的主要受体在雌激素对骨量和骨代谢的调节中发挥重要的作用,为此本研究比较了17β-雌二醇（E2）和跑台运动对去卵巢大鼠骨组织和子宫ERα蛋白表达影响的异同。方法：将40只健康3月龄雌性SD大鼠,按体重分层后随机分为假手术、去卵巢、雌激素和运动四个组。手术1周后,雌激素组大鼠每周按体重颈部皮下注射三次17β-雌二醇,每次25μg／kg体重。运动组每周进行4次45min、速度18m／min、坡度5°的跑台训练。连续给药或运动处理14周后。采用放射免疫法和免疫组织化学法分别检测血清E2水平以及胫骨和子宫ERα蛋白表达的变化。结果：大鼠去卵巢后,子宫重量、子宫重量指数和血清E2水平显著下降,补充外源性17β-雌二醇后,三项指标均显著增加;但运动处理只能增加血清E2水平,对子宫重量和子宫重量指数均无显著影响。子宫EIh蛋白免疫组化结果显示：ERα在去卵巢组子宫内膜腔上皮、腺上皮及基质中的表达显著低于假手术组,而在雌激素组中的表达高于去卵巢组,运动组各部位ERα表达虽有所增加,但是增加的程度远低于雌激素组。胫骨近端ERα蛋白免疫组化结果显示：去卵巢后,胫骨近端骨骺端软骨细胞的细胞核内ERα表达减少,运动和雌激素干预后,胫骨近端ERα表达增加。结论：运动和雌激素处理均能刺激去卵巢大鼠子宫和骨组织ERα蛋白的表达,但运动处理无雌激素处理增加子宫重量的副作用。可见在绝经后骨质疏松的预防中,运动处理可能要优于雌激素处理。     

仙灵骨葆对骨质疏松大鼠OPG/RANK/RANKL 表达的影响

目的:观察仙灵骨葆治疗骨质疏松模型大鼠后,对大鼠体内OPG/RANKL/RANK表达的影响。方法:卵巢摘除法建立SD大鼠骨质疏松模型,设立假手术组、对照组(单纯去卵巢组)、雌激素组(给予17β-雌二醇)和治疗组(给予仙灵骨葆)。术后1周开始给药,给药12周后检测各组大鼠股骨骨密度,ELISA法检测血清中OPG/RANKL含量,RT-PCR检测骨组织中OPG/RANK/RAN-KL mRNA表达,免疫组化检测骨组织中RANK的表达。结果:对照组大鼠骨密度显著低于假手术组;治疗组和雌激素组大鼠O-PG表达显著高于对照组,RANK及RANKL的表达显著低于对照组。结论:采用卵巢摘除法成功建立大鼠骨质疏松模型;仙灵骨葆可促进骨质疏松大鼠OPG的表达,并抑制RANK及RANKL的表达,对骨质疏松模型大鼠有治疗作用。     

17β-雌二醇及其受体调节剂对去卵巢大鼠子宫钙黏蛋白和连环蛋白表达的影响

目的：探讨17β-雌二醇（Est）及其受体调节剂对去卵巢大鼠子宫钙黏蛋白和连环蛋白表达的影响。方法：大鼠卵巢切除后隔日皮下注射17β-雌二醇以及17β-雌二醇合并他莫昔芬（Tam）的芝麻油溶液,21d后取子宫组织,用免疫组化法及蛋白免疫印迹法检测不同处理组上皮钙黏蛋白（E-eadherin）、α-连环蛋白（α-catenin）、β-连环蛋白（β-catenin）的表达。结果：①钙黏蛋白和连环蛋白在卵巢切除组中具有较高表达,显著高于假手术组;17β-雌二醇可下调钙黏蛋白和连环蛋白的表达。②他莫昔芬对Est（0．1mg／kg）引起的钙黏蛋白、连环蛋白表达下调表现为拮抗作用,而对Est（1．0mg／kg）则表现为协同作用。结论：17β-雌二醇可下调大鼠子宫钙黏蛋白和连环蛋白的表迭但无剂量效应,该作用可能部分通过雌激素受体起作用。     

甘草素对去卵巢APP/PS1双转基因小鼠的保护作用初探

研究甘草素对去卵巢APP/PS1双转基因小鼠脑内老年斑及雌激素受体的作用。24只3月龄雌性APP/PS1双转基因小鼠,随机分为假手术组(6只)和去卵巢组(18只)。手术7 d后,再将去卵巢组随机分为去卵巢(ovariectomy,OVX)对照组、去卵巢+甘草素(liquiritigenin,LG)处理组(OVX+LG,30 mg·kg~(-1)·d~(-1),灌胃)、去卵巢+雌二醇(17β-estradiol,E_2)处理组(OVX+E_2,0.1μg/g皮下注射,阳性对照),各6只,假手术组为试剂对照组(Sham)。3个月后小鼠心脏灌注取脑组织样本。免疫组化法检测老年斑(senile plaques,SP)的表达变化,ELISA检测脑内Amyloidβpeptide 40(Aβ40)、Amyloidβpeptide 42(Aβ42)含量,Western blotting检测雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)、雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)蛋白水平变化。结果显示:去卵巢组的老年斑数量(p=0.001)和面积(p0.000 1)均多于假手术组,甘草素处理组(p0.000 1,p0.000 1)和雌二醇处理组(p0.000 1,p0.000 1)的老年斑数量、面积均少于去卵巢组。去卵巢组Aβ40、Aβ42含量(p=0.011,p=0.005)均高于假手术组,甘草素处理组(p=0.000,p=0.015)和雌二醇处理组(p=0.003,p=0.016,)均少于去卵巢组。去卵巢组ERα的蛋白水平,与假手术组、甘草素处理组比较,差异无统计学意义(p=0.214,p=0.175),而雌二醇处理组与假手术组、卵巢切除组、甘草素处理组分别比较均明显增高(p0.000 1,p0.000 1,p0.000 1);卵巢切除组ERβ的蛋白水平与假手术组比明显下降(p0.000 1),甘草素处理组(p0.000 1)、雌二醇处理组(p=0.000)与卵巢切除组比较,均能提高ER的表达水平,甘草素处理组比雌二醇处理组提高ERβ蛋白水平更为显著(p=0.006)。甘草素具有雌激素类似的调节作用,可能通过上调ERβ水平、对抗Aβ毒副作用、减少Aβ沉积从而对AD发挥保护作用。     

雌激素受体α和β在不同雌激素干预大鼠骨代谢中的表达

应用雌性大鼠的骨质疏松模型,通过骨密度(BMD)检测、RT-PCR和Westernblot等技术观察去卵巢(Ovariectomy,OVX)、结合性雌激素(ConjugatedEquineEstrogens,CEE)和戊酸雌二醇(EstradiolValerate,EV)对大鼠松质骨骨量以及松质骨中雌激素受体(ER)α和βmRNA和蛋白表达的影响,探讨两受体亚型在介导雌激素参与松质骨代谢的不同作用机制以及不同来源雌激素对ERα和ERβ表达的差异性调节。40只7-8周龄的雌性Sprague-Dawley大鼠,在观察动情周期后随机分成四组:对照组(Control,n=10)、去卵巢组(Ovariectomy,OVX,n=10)、去卵巢后结合性雌激素治疗组(CEE,n=10)和去卵巢后戊酸雌二醇治疗组(EV,n=10)。对照组大鼠行假手术,其余三组行去卵巢手术。术后48天(12个动情周期),对照组和OVX组用生理盐水喂养12天(3个动情周期),CEE组和EV组分别用药物的生理盐水溶液喂养12天。结果显示:在对照组中,大鼠松质骨ERα的蛋白表达水平显著性高于ERβ蛋白表达水平,而ERα的mRNA表达水平显著性低于ERβmRNA水平。与对照组相比,OVX组大鼠松质骨中ERα的蛋白表达水平显著性降低,ERαmRNA表达水平显著性增加,而ERβ蛋白和mRNA的表达水平均显著性增加。与OVX组相比,CEE组大鼠松质骨中ERβ蛋白和mRNA的表达水平均显著性下降,而EV组大鼠松质骨中ERα蛋白表达显著性上升,ERαmRNA表达显著性下降,ERβ蛋白表达显著性下降。此外,OVX大鼠松质骨的骨密度下降均可通过应用CEE和EV得到显著性改善。上述结果提示:⑴ERα可能是大鼠松质骨中优势表达的受体亚型,在介导雌激素参与松质骨代谢中起着主导作用。⑵不同来源雌激素可能侧重不同的ER亚型途径产生骨保护效应。     

17β-雌二醇对去卵巢大鼠子宫β-连环素和E-钙粘素蛋白表达的影响

目的旨在研究17β-雌二醇对去卵巢大鼠子宫β-连环素(β-catenin)和E-钙粘素(E-cadherin)蛋白表达的影响。方法将30只健康3月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组、去卵巢组、去卵巢和雌激素给药组。大鼠去卵巢1周后,给药组大鼠颈部皮下注射17β-雌二醇,每周3次,每次50μg/(kg·bw),连续给药10周。采用放免法、免疫组化法和Westernblot方法分别检测大鼠血清E2水平、子宫β-catenin和E-cadherin蛋白的免疫定位和表达。结果大鼠去卵巢后子宫指数和血清E2水平显著下降,但大鼠补充外源性17β-雌二醇后,上述两项指标均显著回升且与假手术组相比无显著差异。免疫组化检测发现,假手术组和去卵巢组大鼠子宫内膜的细胞膜上有β-catenin和E-cadherin蛋白表达,而雌激素给药组大鼠子宫内膜细胞膜和细胞核上都有E-cadherin表达。Westernblotting结果进一步显示,去卵巢组大鼠子宫β-catenin和E-cadherin蛋白表达量极显著低于假手术组和雌激素给药组。结论17β-雌二醇不仅能使E-cadherin蛋白在去卵巢大鼠子宫细胞中的免疫定位发生变化,而且还能刺激β-catenin和E-cadherin蛋白的表达。     

不同疗法对去卵巢大鼠子宫ERα和ERRα蛋白表达的影响

目的:本研究旨在对比观察全身垂直振动、跑台运动、金雀异黄酮和氯化锂等不同干预疗法对去卵巢骨质疏松大鼠子宫雌激素受体α(ERα)和雌激素受体相关受体α(ERRα)蛋白表达的影响。方法:将80只3月龄雌性SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组和去卵巢组。去卵巢10周时,将去卵巢组大鼠按体重分层后又随机分为去卵巢组、振动组、跑台组、金雀异黄酮组、氯化锂组和雌激素组,并开始进行不同的干预处理。干预处理8周时,腹主动脉取血处死各组大鼠,用放射免疫方法检测血清E_2水平,用Western blot检测子宫ERα和ERRα蛋白表达水平的变化。结果:大鼠去卵巢后,血清E_2水平显著下降,经雌激素处理后,血清E_2水平显著回升,但经其他几种方法处理后均无显著变化。Western blot结果显示,大鼠去卵巢后,子宫ERα蛋白表达水平显著增加,经雌激素、跑台运动、全身垂直振动和氯化锂处理后,子宫ERα蛋白表达水平显著下降,而经金雀异黄酮处理后,子宫ERα蛋白表达水平无显著变化。大鼠去卵巢后,子宫ERRα蛋白表达水平显著下降,经雌激素和金雀异黄酮干预后,子宫ERR-α表达水平显著增加,而经跑台运动、全身振动和氯化锂干预后,子宫ERR-α表达水平却显著下降。结论:跑台运动和全身垂直振动能抑制去卵巢骨质疏松大鼠子宫ERα和ERRα蛋白的表达,氯化锂能抑制ERα蛋白的表达,但促进ERRα蛋白的表达,金雀异黄酮能促进ERRα蛋白的表达,但对ERα蛋白的表达没有影响。     

田基黄提取物抗CCl_4诱导大鼠肝纤维化的作用及其机制研究

探讨田基黄提取物(HJT)抗四氯化碳(CCl_4)诱导的大鼠肝纤维化(HF)的作用及其机制。将60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱(0. 12 mg/kg)组和HJT(16 000、8 000、4 000 mg/kg)剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠均腹腔注射40%的CCl_4橄榄油溶液(1 mL/kg),2次/周,建立HF模型;同时各给药组灌胃相应剂量药物,正常组和模型组给予等体积蒸馏水,连续6周。末次给药后,采用HE染色和Masson染色观察大鼠肝组织病理学改变;生化法检测血清中ALT、AST活性;生化法检测肝组织中SOD、GSH-PX活性和MDA含量;ELISA法检测血清中HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C含量;ELISA法检测肝组织IL-1β、IL-6和TNF-α的含量;Western blot法检测大鼠肝组织中TGF-β1和α-SMA表达水平。结果显示,HJT(16 000、8 000、4 000 mg/kg)剂量组和秋水仙碱组能显著降低HF大鼠血清中ALT、AST、HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C活性或含量,降低肝组织MDA含量,增加SOD和GSH-PX活性,同时减少肝组织IL-1β、IL-6及TNF-α含量,抑制肝组织TGF-β1和α-SMA蛋白表达;病理组织切片结果显示:HJT各剂量组和秋水仙碱组大鼠肝组织炎症坏死和HF病变程度明显减轻。本研究结果表明,HJT对CCl_4诱导的HF大鼠有显著保护作用,其机制可能与抗炎、抗氧化和抑制TGF-β1蛋白表达有关。     

雌激素对去卵巢大鼠骨Ⅰ型胶原表达及基质金属蛋白酶活性的影响

为了探讨绝经后骨质疏松胶原代谢异常的分子机制.采用RT-PCR和Gel-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分别检测卵巢切除大鼠骨组织Ⅰ型胶原mRNA水平及基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMPs）的活性,免疫组化观察骨组织Ⅰ型胶原蛋白量.卵巢切除大鼠骨组织Ⅰ型胶原mRNA表达降低约26.3%,pro-MMP-9活性明显提高（P＜0.05）,应用雌激素治疗后Ⅰ型胶原mRNA表达较卵巢切除组增加34.1%,pro-MMP-9活性的增加明显降低.卵巢切除后骨组织MMP-9明胶酶活性明显提高,应用雌激素后MMP-9明胶酶活性明显降低（P＜0.05）表明骨Ⅰ型胶原mRNA表达减少和pro-MMP-9活性升高是绝经后骨质疏松的机理之一.     

肛门生殖器区肿瘤组织中HPV的快速检测和分型

迄今已发现的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）型已超过７７型,其中至少有３０个型与泌尿生殖道肿瘤有关。所以ＨＰＶ的检测与分型对于泌尿生殖道肿瘤的病因和预后将是非常重要的。ＨＰＶ有很大的异质性,故用常规的诊断技术来测定未知标本中的ＨＰＶ基因型有一定困难。为此,我们应用了反向点杂交法（ＲＯＢ）来检测ＨＰＶ分型。即用７种序列特异性寡核苷酸探针分别对应７型ＨＰＶ（ＨＰＶ６Ｂ、１１、１６、１８、３１、３３、３５）,这些     

诺如病毒RT-PCR-反向斑点杂交检测方法的建立

旨在建立诺如病毒RT-PCR-反向斑点杂交检测方法。选取诺如病毒较为保守的RdRp基因作为扩增对象,经RT-PCR扩增后将目的片段克隆到pGEM-T载体中。以重组质粒为模版,选择合成寡核苷酸探针及生物素标记引物。生物素标记引物的扩增产物经热变性后与固定在硝酸纤维素膜上的探针进行杂交反应,经显色后判定结果。出现明显的蓝紫色斑点为诺如病毒阳性,如无斑点则为阴性。对5份临床样品进行检测,并以RT-PCR对比验证。结果显示,利用反向斑点杂交法对重组质粒的检测限为100拷贝/μL,在5例实际样品检测中有1例为阳性,与RT-PCR判定结果一致。建立了诺如病毒的RT-PCR-反向斑点杂交检测方法,该方法特异性好,灵敏度高,操作简便,具有重要的应用价值。     

兔网织红细胞与K_(562)细胞胞质杂交体(K-RRneo)核基质-中间纤维体系的研究

本文利用脂质体转基因技术与细胞融合相结合的方法所建立的杂交细胞为研究对象,采用选择性多步抽提配合整装电镜及Western 印迹分析等技术,系统观察了兔网织红细胞、人红白血病K_(562)细胞及两者融合形成的胞质杂交体K-RRneo 细胞的核基质-中间纤维体系结构,着重分析比较了它们之间的胞质波形蛋白纤维成分的变化。实验结果表明:K_(562)细胞的中间纤维为放射状分布,核纤层为网层状,兔网织红细胞胞质中间纤维为细网格状,其间存有不规则的致密物。胞质体杂交细胞(K-RRneo)的核纤层结构稀薄,核基质较亲代K_(562)细胞致密,中间纤维构型呈现与网织红细胞相似的网格状。中间纤维蛋白电泳及Western 印迹结果亦显示K-RRneo 细胞与网织红细胞的带型类似,即缺乏聚合型波形蛋白及聚合前体物波形蛋白单体,仅检测到解聚前、后而与细胞其它组分结合的波形蛋白复合物。这一生化和超微结构特征提示,红细胞排核可能与波形蛋白纤维的解聚及Vimentin 基因关闭有关。实验结果为排核前细胞内原已装配好的Vimentin 趋于解聚,引起中间纤维瓦解,造成核偏位、固缩而最终排出细胞外的排核机制提供了证据。     

博尔纳病病毒p24重组蛋白的表达与初步鉴定

博尔纳病病毒(Borna Disease Virus,BDV)是一种嗜神经病毒.研究表明,BDV不仅可以引起马、羊等家畜的自然感染,从啮齿类动物到人以外的灵长类动物均易受到BDV的实验性感染,而且BDV感染还可能与人类的某些精神神经疾病的发生相关.本研究对含有BDV-p24重组质粒PGEX-3X的大肠杆菌表达系统进行了优化表达BDV-p24蛋白,在IPTG 2 mmol/L、3 h表达量最大,同时用BDV-p24单克隆抗体证实了其特异性.从而为建立检测待检血清中BDV-p24特异性抗体的方法提供了实验基础.     

Isolation of cDNA clones for genes up-regulated in drought-treated <Emphasis Type="Italic">Alternanthera philoxeroides</Emphasis> root

Alternanthera philoxeroides is one of the rather few amphibious plants that can normally grow in both water and upland conditions. Adventitious roots of Alternanthera philoxeroides seedlings will grow long, thick, fleshy during drought stress, which are assumed to improve performance of the plant by more efficient storage and extraction of water from deep soil layers. In order to isolate cDNA clones of morphogenesis-related genes from A. philoxeroides roots, the seedlings were treated with drought and the differential display technique was used. By using 18 primer combinations, nineteen putative drought up-regulated gene segments were obtained and one of them was confirmed having been up-regulated by reverse northern blot and subsequently cloned and sequenced. A homologous analysis revealed that it might be a new gene segment. Semi-quantitative RT-PCR analysis showed that the gene was up-regulated by drought and salt stress.     

BMP-2、-3、-6和-12在骨肉瘤细胞株中的表达

目的研究骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)-2、-3、-6和-12在骨肉瘤细胞株中的表达,为下一步研究BMPs在骨肉瘤发生发展中的作用奠定基础。方法利用免疫细胞化学法和Western blot法检测BMP-2、-3、-6和-12在人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和大鼠骨肉瘤细胞株UMR106中的内源性表达。结果在MG63、U2OS和UMR106细胞中,BMP-2、-3和-6均呈不同程度的阳性表达;而BMP-12在这3株骨肉瘤细胞中则均为阴性,并且两种检测方法所得结果完全一致。结论BMP-2、-3和-6在人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和大鼠骨肉瘤细胞株UMR106中均有内源性表达;而这3株骨肉瘤细胞中均未检出BMP-12的表达。     

发根农杆菌转化怀地黄再生植株

利用发根农杆菌15834菌株感染怀地黄组培苗子叶、叶柄和茎切段,建立了有效的毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的外植体产生,能在无外源激素的1/2MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。用100μmol/L乙酰丁香酮处理对数生长期的农杆菌菌液感染子叶获得了46.7%的最高转化频率;在附加0.2mg/L KT和3.0mg/L 6/BA的1/2 MS培养基上,毛状根能100%形成愈伤组织,51.49%分化出芽;分化芽在1/2 MS培养基上100%生根,形成具有矮化、节间短和根系发达等特征的转化再生植株且移栽后生长旺盛;1个转化毛状根克隆的梓醇含量为0.557mg/g,是鲜地黄梓醇含量的48.5%,是生地鲜重梓醇含量的18%。rolB基因PCR、Southem blot分析、冠瘿碱纸电泳和RT-PCR扩增检测证明农杆菌Ri质粒上的T-DNA整合到怀地黄基因组中并表达。     

反向斑点杂交法检测HBV基本核心启动子区A1762T／G1764A突变的实验研究

目的建立一种基于尼龙膜的反向斑点杂交法,用于检测乙型肝炎病毒（HBV）基本核心启动子区（BCP）A1762T／G1764A突变。方法根据我国HBV主要流行的基因型为B和C,从GenBank上查出4种HBVBCP序列。利用在线工具ClustalW进行比对,针对该突变位点设计引物和检测探针。探针经合成和修饰后点在带正电的尼龙膜上。将反向斑点杂交法结合地高辛检测试剂盒用于检测A1762T／G1764A突变,以测序法确定该区域序列的标本为检测对象。结果反向斑点杂交法分别检测5例A1762／G1764病毒株、2例T1762／G1764病毒株、5例A1762／A1764病毒株和4例T1762／A1764病毒株,结果与测序完全相同。结论应用本方法可以快速、准确地HBV相关的热点突变。     

应用反向线点杂交技术鉴定临床常见曲霉属和毛霉目真菌

目的应用反向线点杂交技术(reverse line blot hybridization,RLB)快速鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌。方法收集我院真菌和真菌病研究中心保存的5种曲霉菌(烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉、构巢曲霉)和7种毛霉目真菌(冻土毛霉菌、总状毛霉菌、卷枝毛霉菌、少根根霉、小孢根霉、微小根毛霉、伞状犁头霉),共计98株菌株。利用真菌通用引物ITS1和ITS4对菌株进行PCR扩增,用12个真菌种特异性探针与扩增后产物进行反向线点杂交。将RLB结果与真菌传统形态学鉴定结果、ITS区DNA测序结果进行比较。结果 RLB可以正确鉴定98株实验菌株,与形态学方法和ITS区测序方法鉴定结果100%一致,种特异性探针之间未见交叉杂交,显示出该方法的高度敏感性和特异性。8株阴性对照菌株(白念珠菌、茄病镰刀菌、尖端赛多孢、马尔尼菲青霉、疣状瓶霉、棒曲霉、日本曲霉以及雅致小克银汉霉),使用RLB方法无法鉴定。通过烟曲霉基因组DNA浓度10倍倍比稀释法验证RLB的敏感性为1.8×10-3 ng/μL。结论 RLB技术为实验室早期快速诊断、鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌提供参考。     

应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌耐乙胺丁醇基因型的研究

应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌对乙胺丁醇（EMB）耐药性。设计与合成用于检测结核分支杆菌耐EMB基因embB的寡核苷酸探针,点于硝酸纤维素膜上,与结核分支杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应（PCR）产物进行反向斑点杂交,并与PCR单链构象多态性（PCRSSCP）和PCR直接测序（PCRDS）结果比较。对81株结核分支杆菌临床分离株进行分析,31株EMB敏感株中,26株embB基因的SSCP图谱、膜反向斑点杂交结果与标准株(H37Rv)完全相同;其余5株SSCP图谱出现泳动变位,其中3株E1b杂交阳性,PCRDS分析为embB基因306位密码子ATG→GTG突变;2株E1d杂交阳性,PCRDS分析为embB基因306位密码子ATG→ATA突变。50株耐EMB菌株中,24株PCRSSCP 图谱与标准菌株相同,E1杂交阳性;26株PCRSSCP图谱出现泳动变位,其中18株E1b杂交阳性,2株E1c杂交阳性,5株E1d杂交阳性,1株E1e杂交阳性,未发现E1f杂交阳性,与PCRSSCP、PCRDS分析结果一致。突变检出率为52%。 膜反向斑点杂交技术可能成为检测部分结核分支杆菌乙胺丁醇耐药基因型简便、快速的方法。