不同启动子对于牛催乳素表达的调控作用

在细胞水平上比较不同启动子对于牛催乳素(bPRL)表达的调控作用.分别构建了以CMV启动子、牛催乳素基因启动子和山羊β-酪蛋白基因启动子作为调控元件的bPRL真核细胞表达载体,分别命名为pCMV、pPRLP和pP1A3.将3种载体分别转染小鼠垂体瘤细胞和小鼠乳腺上皮细胞,使用RT-PCR和定量RT-PCR分析3种启动子启动bPRL在2种细胞系中的表达效果.pCMV在2种细胞中有效表达bPRL;pPRLP在2种细胞中的表达效果与pCMV接近:pP1A3不在垂体细胞中表达,在乳腺细胞中表达.pPlA3具有乳腺表达特异性;pPRLP能够在垂体和乳腺中高表达,在其他组织的表达特异性有待进一步研究.     

人胰岛素原基因B10位定点突变对增强胰外表达效率的实验研究

目的构建在肝细胞内增强表达成熟人胰岛素的生理调控性人胰岛素原基因重组质粒。方法利用PCR定点突变技术在B-C及C-A连接处已两点突变的人胰岛素原基因上进行B10位突变,并在其上游连接肝细胞特异的3倍体葡萄糖反映元件(GLRE3)和胰岛素样生长因子结合蛋白-1启动子(IGFBP-1P)。经酶切后将含有调控元件的3点突变人胰岛素原基因(GLRE3-IGFBP-1P-3mINS)插入逆转录病毒载体(pLXSN),脂质体介导转染大鼠肝癌细胞CBRH7919后检测成熟胰岛素表达情况及与含有调控元件的2点突变人胰岛素原基因(GLRE3-IGFBP-1P-3mINS)表达体的表达差异。结果人胰岛素原基因的B10位组氨酸编码序列CAC突变为门冬氨酸编码序列GAC。构建了含调控元件的B10位门冬氨酸人胰岛素原基因逆转录病毒载体质粒(pLXSN-GLRE3-IGFBP-1P-3mINS),酶切、PCR及测序鉴定各段基因碱基序列及连接方向正确。pLXSN-GLRE3-IGFBP-1P-3mINS经脂质体包裹转染大鼠肝癌细胞,细胞外液含5.0、25.0mmol/L的葡萄糖浓度下胰岛素含量分别为5.03±0.72、43.90±2.30mU/L。未进行B10位突变的重组体转染组在同样葡萄糖浓度下胰岛素含量分别为<2.00、2.10±0.23mU/L。结论成功构建了含调控元件的B10位门冬氨酸人胰岛素原基因逆转录病毒载体重组质粒,该重组体已整合入鼠肝癌细胞基因组,其表达效率显著提高并受葡萄糖生理性调控。     

LipofectAMINE和Vigofect转染特点的比较研究

目的 :评估新型转染试剂Vigofect介导gfp - 2mar基因转染BHK细胞的转染效率及其对细胞的毒性作用 ,并与传统转染试剂LipofectAMINE进行比较。方法 :将适量的gfp - 2mar分别用等量的LipofectAMINE和Vigofect转染BHK细胞 ,于转染后 4 8h用MTT比色法检测活细胞数 ,以GFP为报告基因 ,在荧光显微镜下观察并用流式细胞仪计数荧光细胞 ,检测转染效率。结果 :Lipo fectAMINE转染组细胞存活率为 96 .5 1± 3.12 % ,显著大于Vigofect转染组 6 1.4 3± 16 .89% (P <0 .0 1) ;Vigofect转染效率为 5 9.2±19 .5 1% ,显著高于LipofectAMINE 10 .72± 8.17% (P <0 .0 2 )。结论 :与LipofectAMINE相比较 ,Vigofect对细胞毒性较大 ,但转染效率较高     

一株高水平表达重组蛋白昆虫细胞系的建立

报道了一株来自粉纹夜蛾Trichoplusiani脂肪体的传代细胞系 ,在辅以 5%胎牛血清的商品无血清培养基Excell 4 0 0中 ,细胞群体倍增时间为 2 2 9h ,最高密度可达 2 2× 10 6 mL ,该细胞对苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋型多角体病毒 (AcMNPV)极为敏感 ,增殖AcMNPV多角体平均每个细胞达86个 ,表达由AcMNPV构建的重组蛋白的水平较高 ,β 半乳糖苷酶的表达水平为 ( 2 2 5 5± 13 4 )IU mL ;碱性磷酸酶的表达水平为 ( 4 7± 0 61)IU mL ,是一株高水平表达重组蛋白的传代细胞系 ,命名为HNU Tn FB1。     

SA11株轮状病毒VP7基因的克隆及表达

采用RT PCR方法 ,从提取的SA1 1株轮状病毒总RNA中扩增出VP7基因片段 ,进行鉴定后 ,将该片段克隆于真核表达载体pEF1 HisC dhfr,构建成重组质粒pEF1 HisC dhfr VP7,然后用质脂体法转染COS 7细胞 ,进行真核系统的表达 .获得了长 981bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知VP7序列相同 .表达后经细胞超声破碎 ,Westernblot检测表达产物 ,在相对分子质量 38× 1 0 3 处有表达条带 ,表达蛋白主要存在于上清中 .因此 ,获得了VP7基因 ,并在COS 7细胞中获得了表达 ,表达蛋白质免疫Balb c小鼠 ,获得了具有特异性结合活性的抗体     

一种人新型基因工程干扰素rh-IFNα-m的高效表达、纯化和活性检测

为实现干扰素 (IFNα m)的高表达与纯化 ,研究其抗病毒、抗增殖活性。应用PCR技术将已构建的IFNα m的高表达基因亚克隆到原核表达载体pBV2 2 0上 ,构建表达质粒 pBV2 2 0 /IFNα m ,转化大肠杆菌DH5α进行表达。表达产物经初步检定以包涵体形式存在 ,包涵体进行变性、复性 ,然后经CM Sepharose FF、DEAE Sepharose FF离子交换层析和Sephacryal HR10 0分子筛纯化 ,获得较纯的干扰素IFNα m。以IFNα 1b为对照 ,在VSV Wish系统上采用细胞病变抑制法 ,测定纯品IFNα m的抗病毒活性。在Hela细胞上用MTT法进行抗增殖实验。结果表明包涵体含量占菌体总蛋白 4 0 % ,纯化的目的蛋白IFNα m纯度在 95 % ,比活高达 1 2 6× 10 7IU/mg ,纯化收率34 4 % ,IFNα m抗病毒活性和IFNα 1b相当 (P >0 0 5 ) ,抗增殖活性高于IFNα 1b(P <0 0 1)。     

胚胎期下颌髁突软骨中糖胺多糖、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白的表达

目的　观察不同时期胎儿髁突软骨中糖胺多糖、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白的表达。方法　应用组织化学和免疫组织化学SP法检测 32例 13周～ 33周 (A组 13～ 17周 ,B组 18～ 2 2周 ,C组 2 3～ 2 7周 ,D组 2 8～ 33周 )胎儿髁突软骨中糖胺多糖、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白 ,并行体视学图象分析。结果　髁突软骨中AB PAS在各组的灰度及积分光密度均无显著性差异 (P >0 . 0 5 )。FN、LN阳性表达位于软骨细胞外基质 ,增殖层和成软骨细胞层呈强表达 ,尤其在两层交界处 ,而肥大软骨细胞层中明显减弱。体视学分析表明LN在A组表达最强 ,其灰度及积分光密度均值与B、D组间均有显著性差异 (P <0 . 0 5 )。〔灰度 :A组 175 . 0 18± 8. 30 1、B组 187 16 2± 13 6 44、D组 190 5 5 0± 6 46 0 ;积分光密度 :A组 2 739± 0 799,B组 2 0 11± 0 85 5 ,D组 1 5 33± 0 42 7,均存在显著性差异 (P <0 0 5 )。FN在B组表达最强 ,灰度与A、C、D三组间存在显著性差异 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;积分光密度与A、D组间有显著性差异 (P <0 0 5 )。〔灰度 :B组 173 0 89± 8 40 7、A组 182 0 45± 10 138、C组 188 70 1± 8 0 94、D组 195 417± 4 82 7;积分光密度 :A组 1 314± 0 86 9、B组 4 332± 2 5 37、D组 2 12     

增殖细胞核抗原表达与核仁组成区蛋白检测在胃粘膜良恶性病变的意义

目的　为了探导增殖细胞抗原 ( PCNA)的表达在胃粘膜良恶性病变的诊断分级的意义 ,以及与核仁组区蛋白 ( Ag-NOR)之间的关系。　方法　对 5 4例良恶性病变进行 PCNA免疫组化和 Ag-NOR检测进行分析研究。　结果　我们发现正常胃粘膜 PCNA平均指数 1 6 .73± 5 .7;非典型增生轻度 2 0 .85±6 .2 1、中度 2 5 .74± 7.7、重度 35 .1 5± 9.1 ;腺癌 5 8.2 3± 1 8.1 2。Ag-NOR正常胃粘膜 3.2 1± 0 .5 6 ;非典型增生轻度 4 .91± 0 .75、中度 6 .1 7± 0 .6 9、重度 8.75± 0 .87;腺癌 1 0 .1 2± 1 .97。　结论　PCNA的表达随着病理级别增加而增加 ,与 Ag-NOR成正比关系、综合 PCNA的检测结果 ,对胃粘膜的增生程度的判断以及非典型增生与癌的鉴别诊断有一定的参考价值。     

Carvedilol对大鼠实验性缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

研究 Carvedilol对缺血再灌注心肌细胞凋亡及 Bcl- 2、Bax蛋白表达的影响 ,探讨 Carvedilol抑制心肌细胞凋亡的可能机制。结扎 Wistar大鼠左冠状动脉前降支 (L AD) ,建立大鼠缺血再灌注动物模型。采用末端标记原位细胞凋亡法检测心肌凋亡细胞 ,并利用光学显微镜进行细胞计数 ;免疫组化法检测 Bcl- 2和 Bax蛋白表达 ,并利用图象分析系统检测二者的平均光密度值 ,进行定量分析。结果显示手术组心肌细胞凋亡数为 37.5 3± 9.2 2个 /视野 ,假手术组 0 .18± 0 .91个 /视野 ,治疗组为 7.6 3± 4.0 5个 /视野。各组间有显著差异 (P<0 .0 5 ) ;手术组 Bcl- 2蛋白平均光密度值为 0 .14± 0 .0 1,假手术组为 0 .0 9± 0 .0 2 ,治疗组为 0 .14± 0 .0 2 ,手术组和治疗组与假手术组相比均有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,治疗组与手术组相比无显著差异(P>0 .0 5 ) ;手术组 Bax蛋白平均光密度值为 0 .10± 0 .0 2 ,假手术组为 0 .0 6± 0 .0 1,治疗组为 0 .0 7± 0 .0 1,手术组与治疗组、假手术组相比有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,治疗组与假手术组相比无显著差异 (P>0 .0 5 )。结果表明 Carvedilol有显著抗缺血再灌注心肌细胞凋亡作用 ,其作用机制可能与抑制 Bax基因的蛋白表达 ,使 Bcl- 2基因表达的蛋白功能相对增强 ,Bcl- 2     

猪胰岛素启动子调控EGFP表达载体的优化及体外验证

目的获得猪胰岛素启动子调控外源基因的高效表达载体,为制备转基因猪胰岛特异性表达目的基因奠定基础。方法利用猪胰岛素启动子（PIP,包含5＇调控区、第一外显子、第一内含子及第二外显子ATG前的序列共1.5 kb）构建表达载体,连接PIP和EGFP的酶切位点HindⅢ设计在起始密码子前,命名为PIP-Hind IIIEGFP。鉴于酶切位点的插入位置可能会影响外源基因的表达效率,对载体进行了优化：将Hind III酶切位点删除,实现PIP和EGFP无缝连接,载体命名PIP-EGFP;将第一内含子3＇端的内含子剪接受体位点（splicing acceptor site,SA）突变为Hind III内切酶识别位点,命名为PIP-SA（M）-EGFP。三种载体分别电转染小鼠胰岛素瘤β细胞株MIN-6细胞、猪耳成纤维细胞以及猪肾细胞,48 h后通过荧光强度、流式分析、RT-PCR及Western blot检测,验证载体的表达效率。结果转染细胞后,三种载体都仅在MIN-6胰岛β细胞表达绿色荧光。RT-PCR及其产物测序结果显示三种载体的胰岛素启动子第一内含子的剪切存在差异：载体PIP-Hind III-EGFP和PIP-EGFP的内含子存在剪切和不剪切两种情况,剪切不稳定;载体PIP-SA（M）-EGFP的SA位点突变后内含子不剪切,流式细胞及Western blot检测显示,与另外两种载体相比,该载体目的蛋白的表达量最高。结论通过突变胰岛素启动子第一内含子的3＇端的剪接受体位点,成功获得了胰岛β细胞的高效表达载体,可用于制备胰岛特异表达外源基因的转基因猪。     

环氧合酶-2在子宫内膜癌中上调表达的临床意义

目的　探讨环氧合酶 2与子宫内膜癌发生、发展中的关系。方法　研究对象分为 5组 ,增生期组 2 5例 ,分泌期组 2 5例 ,内膜炎组 2 5例 ,非典型性增生组 2 3例 ,子宫内膜癌组 34例 ,应用免疫组化和定量RT PCR方法 ,检测其中Cox 2蛋白和mRNA水平表达。结果　 6 7%的子宫内膜癌表达Cox 2 ,在转录和蛋白水平子宫内膜癌组的Cox 2表达强度明显高于其它四组 (免疫组化评分分别为 :增生期组 5 4 6± 0 12 3,分泌期组 3 2 0± 0 176 ,内膜炎组 4 78± 0 12 ,非典型性增生组 6 10±0 2 5 ,子宫内膜癌组 8 70± 0 93,相应mRNA含量依次为 92 8± 8 2 2fpg/ μg ,6 4 9± 11 0 8fpg/ μg ,79 4± 5 83fpg/ μg ,2 99 3± 10 6 8fpg/ μg ,4 93 0± 2 9 5 8fpg/ μg) ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,内膜癌中 ,高分化细胞Cox 2表达高于低分化细胞 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。非典型性增生组Cox 2表达显著高于正常内膜和内膜炎组 ,增殖期组Cox 2表达高于分泌期组 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　Cox 2可能在子宫内膜癌发生发展中起重要作用 ,可为子宫内膜癌的化学预防和化疗的辅助治疗提供新靶点     

细胞外pH值降低可增强豚鼠心室肌细胞持续性钠电流

应用全细胞和单通道(贴附式)膜片钳技术观察胞外pH值降低对心室肌细胞持续性钠电流(persistent sodium current,ⅠNa.P)的影响,探讨其作用机制。结果显示:全细胞记录模式下,细胞外pH值降低可明显增大ⅠNa.P,且呈H+浓度依赖性增强。当细胞外pH值从对照值的7．4降低为6．5时,ⅠNa.P的电流密度从(0．347±0．067)pAJpF增加到(0．817±0．137)pA/pF(P< 0．01,n=6),而加入还原剂1,4-二硫甙苏糖醇(dithiothreitiol,DTT,1 mmol／L)后可使,ⅠNa.P的电流密度回落到(0．233±0．078)pA／pF (P<0．01 vs pH 6．5,n=6)。单通道记录模式中,当细胞外pH值从对照值的7．4降低为6．5时,持续性钠通道的开放概率和开放时间分别从0．021±0．007和(0．899±0．074)ms增加到0．205±0．023和(1．593±0．158)ms(P<0．叭,n=6),再加入还原剂DTT(1 mmol／L)使开放概率和开放时间分别回落到0．019±0．005和(0．868±0．190)ms(P<0．01 vs pH 6．5,n=6);加入蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)抑制剂bisindolylmaleimide(BIM,5μmol/L)可使pH 6．5时增大的,ⅠNa.P明显减小,开放概率和开放时间分别从0．214±0．024和(1．634±0．137)ms回落到0．025±0．006和(0．914±0．070)ms(P<0．01 vs pH 6．5,n=6)。结果表明,细胞外pH值降低可诱发心室肌细胞ⅠNa.P增大,其机制可能与PKC的激活有关。     

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的DNA免疫

为了比较启动子及分泌信号对丙型肝炎病毒包膜蛋白E2（HCV E2）的DNA免疫效果的影响,构建了4个不同的HCV E2（384－660）融合表达质粒：CMV启动子控制下和EF1α启动子控制下的分泌表达质粒pCMVSec-S1E2t660和pEF1αSec-S1E2t660以及非分泌表达质粒pCMV-S1E2t660和pEF1α-S1E2t660,4个表质粒在HeLa细胞中进行了暂时表达,免疫印迹分析表明,表达产物都同时具有HBV preS1及HCV E2蛋白的抗原性,夹心ELISA测定结果表明,分泌表达质粒的表达量明显高于非分泌表达质粒,带CMV启动子的质粒表达量高于EF－1α,并且只有分泌型质粒转染细胞后,才能在细胞培养上清液中检测到融合蛋白,4种表达质粒免疫C57BL／6小鼠,可产生preS1及E2的抗体,比较了抗体转阳率,抗体滴度和维持时间等,发现带CVM启动子的E2分泌表达质粒pCMV-S1E2t660明显优于其他3组,对4种质粒产生体液免疫反应不同的可能原因进行了分析。     

葡萄糖转运的胰岛素敏感性以及forskolin, dipyridamole和pentobarbital对三种L6 骨骼肌细胞葡萄糖转运的抑制作用

用稳定过表达并带有myc表位的葡萄糖转运子1(glucose transporter 1, GLUT1)或葡萄糖转运子4(glucose transporter 4, GLUT4)的L6骨骼肌细胞株定征GLUT1和GLUT4对胰岛素的响应. 所筛选的L6-GLUT1myc细胞克隆分化前后的葡萄糖摄取量均在线性范围. 100 nmol/L胰岛素使L6-GLUT1myc和L6-GLUT4myc肌原细胞膜上GLUT1或GLUT4的量分别达到基础组的(1.58±0.01)倍和(1.96±0.11)倍, 2-脱氧葡萄糖摄取量分别达到了(1.53±0.09)倍和(1.86±0.17)倍, 此作用可被渥曼青霉素(wortmannin)抑制. 胰岛素刺激了此2种细胞中的Akt磷酸化. L6-GLUT1myc肌原细胞的葡萄糖摄取量对胰岛素浓度呈剂量依赖性, 但与野生型细胞相比, 其对胰岛素的敏感性和最大响应没有改变. 但L6-GLUT4myc肌原细胞的葡萄糖摄取量对胰岛素的敏感性和最大响应均增加. 以前的研究提示毛喉素(forskolin)可能影响胰岛素刺激的GLUT4转位. 本研究表明, 在L6-GLUT4myc细胞中, 毛喉素使胰岛素刺激的葡萄糖摄取减少了65%, 此作用是由它对GLUT4的直接抑制而不是由其对GLUT4转位的影响造成的. 毛喉素和dipyridamole对GLUT4比对GLUT1有更强的抑制作用, 而戊巴比妥(pentobarbital)对GLUT1的抑制作用强于GLUT4. 应用这些抑制剂的结果表明、L6肌原细胞中基础状态下和胰岛素刺激状态下的葡萄糖主要由过表达的GLUT1或GLUT4转运. 因此, L6-GLUT1myc和L6-GLUT4myc细胞株为筛查对肌肉细胞GLUT1或GLUT4的活性或转位有不同作用的化合物提供了一个平台.     

Ang-I(2-10)对大鼠急性心肌梗死后VEGF和bFGF表达及血管形成的影响

目的　观察血管紧张素Ⅰ (2 10 )对大鼠急性心肌梗死后 ,心肌细胞血管内皮细胞生长因子 (VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)表达和梗死区血管新生的作用。方法　选雄性大白鼠 45只 ,随机分为实验组、对照组和假手术组。实验组和对照组结扎左冠状动脉 45分钟后再灌注制成非透壁性心肌梗死模型。实验组给予血管紧张素Ⅰ (2 10 ) 5 0 pmol/kg·d ,而对照组和假手术组给予等量的蒸馏水 ,第 15天处死。免疫组织化学染色 ,光镜观察和图像分析处理 ,使用SPSS 10统计分析 3组数据。结果　实验组大鼠心肌细胞内bFGF和VEGF均比对照组表达明显增强 ,图像分析结果其灰度值下降 (为 81 2 4± 0 79比 90 2 9± 0 2 6 ;79 31± 0 72比 89 5 2± 0 5 6 ,P <0 0 0 1) ,微血管密度也明显增多(2 8 2 2± 1 0 1比 2 0 33± 0 83,P <0 0 0 1)。结论　血管紧张素Ⅰ (2 10 )可增强急性心肌梗死后心肌细胞表达VEGF和bFGF ,促进缺血区血管新生 ,发挥保护心肌的缺血性损伤作用。     

应激大鼠肾胞液[~3H]醛固酮结合活性的变化及调节机制的初步研究

为探讨烫伤引起病理性应激时大鼠肾胞液醛固酮结合活性的变化及可能的调节机制 ,以 [3H] 醛固酮为配体 ,用放射性配基 受体结合分析法测定了正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠肾胞液醛固酮结合活性的结合容量 (Rt)和表观解离常数 (Kd) ;采用体内注射TNF α、IL 1β中和抗体和α 促黑色素细胞刺激激素 (α melanocyte stimulatinghormone,α MSH)和合成肽KPV (Ac D Lys L Pro D Val)等措施调节其改变。结果发现 ,肾胞液存在两种不同结合容量、不同亲和力的醛固酮结合活性受体。与正常对照组的Rt (Rt1:4 1 6± 7 2fmol/mgpro ;Rt2 :3 17 6± 70 0fmol/mgpro)相比 ,轻烫组的Rt(Rt1:4 1 4± 5 0fmol/mgpro ;Rt2 :3 14 8± 4 5 7fmol/mgpro)无显著差异 (P >0 0 5 ;P >0 0 5 ) ;重烫组的Rt(Rt1:2 2 4± 5 4fmol/mgpro ;Rt2 :196 3± 3 2 5fmol/mgpro)则显著下降(P <0 0 1;P <0 0 1)。体内注射TNF α与IL 1β中和抗体、α MSH及KPV均能明显提高重烫组Rt值。结果提示 ,重度烫伤大鼠肾胞浆醛固酮结合活性降低 ,TNF α、IL 1β中和抗体、α MSH及KPV均可防止重度烫伤引起病理性应激时醛固酮结合活性降低。     

软骨性肿瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 型胶原基因表达与肿瘤分化的关系

探讨 、 、 型胶原基因表达与软骨性肿瘤分化的关系。应用免疫组织化学和原位杂交技术检测存档石蜡标本软骨瘤、骨软骨瘤、软骨肉瘤和正常软骨共 71例中 、 、 型胶原基因的表达情况。结果显示 :免疫组化检测 型胶原蛋白的阳性率和表达强度 (灰度 ,其数值与染色强度呈反比 ) ,软骨瘤 (10 0 % ,148.99± 14.2 5 )和骨软骨瘤 (95 % ,148.76± 2 1.2 2 )与正常软骨 (10 0 % ,144 .88± 5 .0 5 )相似 ,软骨肉瘤 (74.0 7% ,16 6 .46± 17.6 7)明显低于良性软骨性肿瘤 (软骨瘤和骨软骨瘤 ) (P<0 .0 1) ,而且软骨肉瘤随着分化程度降低 ,阳性率和表达强度逐渐降低 ;高分化软骨肉瘤为 10 0 % (12 /12 ) ,148.14± 16 .10 ;中分化软骨肉瘤为 83.33% (5 /6 ) ,16 8.6 8± 11.82 ;低分化软骨肉瘤则完全不表达 (0 /9) (P <0 .0 5 )。正常软骨没有 、 型胶原 ,良性软骨性肿瘤出现少量 、 型胶原 ,软骨瘤 、 型胶原蛋白的阳性率分别为 38.89%和 44 .44 % ,骨软骨瘤分别为 35 %和 40 %。软骨肉瘤 、 型胶原蛋白明显增多 ,阳性率分别为 77.78%和 88.89% (P<0 .0 1) ,而且随着软骨肉瘤分化程度降低 , 、 型胶原蛋白表达强度增强 (P<0 .0 5 )。原位杂交显示软骨肉瘤 型胶原 m RNA的阳性率 (6 8.75 % ,11/16 )     

血管瘤组织中p63和Fos蛋白的定量表达

目的　探讨 p6 3基因和c fos基因的蛋白与血管瘤发生发展的关系。方法　采用免疫组织化学S P法对 4 0例血管瘤和 2 0例正常皮肤组织检测 p6 3基因和c fos基因的蛋白表达 ;对所获得的检测结果进行图像分析处理。结果　在正常皮肤组、增生期与消退期血管瘤中 ,p6 3和Fos蛋白的平均光密度分别为 :0 92 3± 0 191,0 0 79± 0 0 2 4 ;8 2 71±1 95 3,0 12 4± 0 0 15 ;0 92 0± 0 187,0 0 88± 0 0 17。增生期组与消退期组、正常皮肤组分别相比 ,p6 3和Fos阳性表达的差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ,消退期组与正常皮肤组之间 ,p6 3阳性表达的差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　p6 3基因在血管瘤中并未作为肿瘤抑制基因起作用 ,相反是作为癌基因而促进内皮细胞的增殖 ,可能与血管形成关系密切。c fos在血管瘤的增生中起着重要作用 ,可能与c fos可通过识别bFGF启动子区的特异位点TRE而启动bFGF基因的转录有关。     

慢性捆绑紧张致大鼠记忆受损及海马神经元NOS和Tau5的变化——组织化学与免疫组织化学研究

目的　探讨慢性捆绑紧张对大鼠学习与记忆的影响及其可能的神经生物学机制。方法　选雄性 SD大鼠 18只 ,其中 10只为实验组 ,8只为对照组。对实验组采用捆绑器每天捆绑 6 h,2 1天后用 Y迷宫对两组大鼠进行行为检测 ,并用酶组织化学和免疫组织化学方法观察海马内一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元及 Tau蛋白 (Tau5 )免疫反应的变化。结果　 1实验组大鼠学会躲避电击的次数为 35 .7± 7.5次 ,对照组为 2 5 .2± 2 .8次 ,P<0 .0 1;2海马右侧 CA1 区 NOS阳性神经元数目 ,对照组 2 7.2± 4.8个 ,实验组 38.9± 6 .4个 ,P<0 .0 5 ;NOS阳性神经元胞质平均灰度 ,对照组 170 .7± 11.8,实验组 16 2 .5± 12 .6 ,P<0 .0 5 ;3海马右侧 CA3 区 Tau5免疫阳性产物的平均灰度 ,对照组 16 1.7± 12 .8,实验组 145 .8± 13.8,P<0 .0 5。结论　一氧化氮产生过多而导致的神经毒性作用可能是慢性捆绑紧张导致动物学习与记忆功能受损的部分神经生物学机制 ,而海马 CA3 区神经元内所有的 Tau蛋白 (磷酸化及非磷酸化的 Tau)的总量增多说明 Tau蛋白的变化可能在此过程中起一定的作用。     

人乳腺癌细胞p53和bcl-2蛋白的表达状况及与激素受体的关系

为了进一步证明 p5 3和 bcl- 2癌基因蛋白的反向关系 ,我们用 SP法进行免疫细胞化学染色 ,观察了 p5 3、 bcl- 2、雌激素受体 (estrogen receptor,ER)、孕激素受体 (progesterone receptor,PR)在人乳腺癌细胞系 MCF7和 MDA- MB2 31中的表达情况 ,并应用图像分析系统对其阳性反应物进行定量。结果 :MCF7细胞表达 ER和 PR,而 MDA- MB2 31细胞不表达。二个细胞系均表达 p5 3,但 MCF7光密度 (OD)值为 0 .10 0 9± 0 .0 14,而 MDA- MB2 31细胞为 0 .16 78± 0 .0 42 ,后者明显高于前者 (P<0 .0 0 0 1)。二系细胞均可见到 bcl- 2阳性物质 ,但 MCF7表达的 OD值为 0 .10 45± 0 .0 2 0 8,而 MDA- MB2 31细胞仅为 0 .0 5 2 5± 0 .0 113(P<0 .0 0 0 1)。表明 bcl- 2的表达与 ER及 PR的存在有很强的相关性 ,并且与 p5 3的表达呈明显的相反关系