植物亚原生质体分离及融合研究进展*

植物亚原生质体中的胞质体和微原生质体在植物遗传改良等应用方面上具有重要意义,就国内外在胞质体和微原生质体分离和融合等方面的研究进行了综述,同时对研究中存在的问题提出了展望。     

尖顶羊肚菌原生质体的分离及再生

培养在液体培养基中的尖顶肚菌(Morchella conica Pers)菌丝体可以分离出大量的原生质体。在组合的2号酶液中,在30℃下经4.5小时处理的产量最高(为6.2×10~6个原生质体/100mg·ml)。此法分离得的原生质体再生力很强,液体培养18小时即可再生成菌丝。再生的细胞进行植板培养后形成了菌丝体,并获得了从原生质体再生的菌株。     

烟草花粉管亚原生质体的分离和培养行为

应用酶法从烟草花粉管分离出大量亚原生质体。具核的和无核的亚原生质体之比约为1:1。这种亚原生质体在D_2培养基中培养后,不论有核的或是无核的都能生长管状结构和再生厚的壁。管状结构的生长有节律性,常呈结节状。随着管状结构的生长,细胞内含物逐渐流入生长中的管状结构内,有时会从薄的管状结构的顶端排出到培养液中。已生长管状结构的亚原生质体,具核的和无核的比例约为1:1.7,表明管状结构的生长和壁的再生与是否有核的存在无关。对酶液处理后花粉管亚原生质体从花粉管的释放和从单独的花粉管亚原生质体生长管状结构的过程,进行了活体连续观察和照相记录。实验结果说明,结节状的管状结构确实是从单独的一个亚原生质体形成的。管状结构的生长和壁的再生似乎与细胞质进入新生的管状结构有关。讨论了花粉管亚原生质体在植物遗传操作中应用的可能性。     

灵芝原生质体的分离及其转化

对灵芝（赤芝）进行了原生质体的形成和再生实验,研究了渗透压稳定剂、菌龄、酶解条件对原生质体分离的影响,以及渗透压稳定剂、培养基对原生质体现生的影响,另外还尝试用电穿孔在灵芝原生质体中进行报告基因（report gene）β-gal的转化,结果β-gal在菌丝体中有表达。     

食用菌原生质体分离与再生的技术

用2%的溶壁酶处理平菇及香菇菌丝体,原生质体释放量达10~7个/ml以上。不同渗透压、稳定液、再生培养基、培养条件对食用菌原生质体分离和再生有不同的影响。本研究探索出一个原生质体分离与再生的较优系统。原生质体融合的研究在创造食用菌远缘杂交、解决珍贵野生类型驯化栽培,了解分类学上亲缘关系以及研究导核体遗传等具有重要意义。     

赤芝原生质体分离与再生研究

以赤芝(Ganoderma lucidum)为供试菌种,研究了不同酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂浓度及菌龄、再生培养基等对赤芝菌丝的原生质体制备与再生的影响。结果表明:菌龄为4 d的菌丝,以0.4 mol/m L的甘露醇作渗透压稳定剂配制成浓度为0.02 g/m L的溶壁酶,于p H 5.0、25℃条件下酶解2.0 h,其原生质体数最高可达3.87×107/m L,MYG再生培养基上再生率达到0.016%。     

石牌广藿香原生质体的分离及培养研究

以石牌广藿香悬浮细胞为材料,对影响其原生质体分离和培养的酶浓度、作用时间、溶液渗透压和材料的生理状态等因素进行了研究。结果表明:以0.5%的果胶酶、0.2%离析酶和0.8%的纤维素酶组合处理继代培养3～11d的悬浮细胞8h,渗透压调节剂为9%甘露醇,原生质体产量达1.65×106 protoplasts·mL-1 PCV,活力超过86%。在原生质体的液体浅层培养中,细胞分裂频率为13.5%。     

金鱼草珠被绒毡层壁囊的分离与鉴定

由金鱼(Antirrhinum majus L.)草开花后的胚珠中分离出抗乙酰解、抗酶解、对强氧化剂有一定抗性但不抗二乙醇胺的细胞壁囊状结构。切片原位观察表明,它是珠被绒毡层的内壁,能被苏丹 IV 染色与金胺 O 荧光染色。它全面地包围胚囊内正在发育的胚和胚乳,仅在合点与珠孔两端开口,而在此二处分别有胚乳吸器与胚柄与外相通。这一结构的功能可能是保证营养物质定向导入胚囊以及防止珠被绒毡层分泌的水解酶侵蚀胚囊等。     

Isolation and Cultural Behavior of Pollen Tube Subprotoplasts in,Antirrhinum majus L.

Large numbers of subprotoplasts were isolated enzymatically from pollen tubes of Antirrhinum majus L. When these subI)rotoplasts, either nucleate or enucleate, were cultured in D2 liquid eulture medium, each formed a thick cell wall and germinated a pollen tube like strueture which also deposited a thick wall, except at the tip of the tube. Tube growth was accomparied by a continuous movement of the mass of cell inelusion in this tube to the tip. Rupture of the naked tip oeeurred within one to six days releasing the mass of cell inelusion in the tube into the culture medium. The faet that both nucleate and enneleate subprotoplasts show the same cultural behavior eharaeteristie of the gene expression of a normal pollen tube demonstrates the presence of presynthesized mRNA in the germinated tubes.     

金鱼草基因转化和转基因植株再生

本实验采用根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４（ｐ３５ＳＧＵＳＩＮＴ与金鱼草下胚轴切段共培养,将ＧＵＳ基因导入金鱼草细胞,通过不定芽发生途径获得抗Ｇ４１８再生植株．经ＤＮＡ／ＤＮＡ斑点杂交及ＧＵＳ活性原位组织检测初步证实外源基因ＧＵＳ已整合进金鱼草基因组并得到表达．     

鹅掌楸属植物引导组织和花粉管生长

应用光学显微镜和常规石蜡切片技术研究了鹅掌楸属（ＬｉｒｉｏｄｅｎｄｒｏｎＬ．）两种植物雌蕊引导组织的分布和个体发育,引导组织是由心皮边缘或内表面的表皮细胞层或亚细胞层发育形成,是由一层细胞组成的连续层,覆盖干柱头、花柱道和珠柄的表面,引导组织的细胞形态学因其所在部位不同而有差异。在电境水平上研究了柱头和花柱引导组织的超微结构,引导组织细胞是分泌型的传递细胞,其分泌面发育了明显的壁内突,细胞质中富含内质网、多聚核糖体、各种小泡、高尔基体和线粒体,大液泡通常远离分泌面。文中还探讨了花粉管生长后引导组织的变化。     

金鱼草胚囊的人工分离

用果胶酶与纤维素酶的混合液离解金鱼草的胚珠,从中分离出完整的胚囊。由固定材料分离的胚囊,经透明染色后可借助干涉差显微装置观察由受精前直至受精后具上百个胚乳细胞时期的胚囊的内部结构。由新鲜胚珠分离胚囊也已初步突破,并对其作了简易的显微化学观察。讨论了活胚囊分离的意义与胚囊离体培养的前景。     

白屈菜药材HPLC指纹图谱研究

本文建立了白屈菜药材的HPLC指纹图谱。采用DiamonsilC 18柱 (迪马公司 )为分析柱 ,以乙腈 0 0 1MKH2 PO4 梯度洗脱为流动相 ;柱温 35℃ ;流速 1ml/min :检测波长 2 90nm。在上述条件下可以很好的分离白屈菜的各类成分 ,得到的色谱图可作为白屈菜药材专属性的指纹图谱。     

芸苔属脱外壁花粉的分离与人工萌发

芸苔属青菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）与紫菜苔（Ｂ． ｃａｍ ｐｅｓｔｒｉｓｖａｒ． ｐｕｒｐｕｒｅａ）的花粉经低温水合、热激、渗激三步程序,分离出大量具萌发能力的脱外壁花粉,脱外壁率可高达６０％ 以上。在含有碳源与氮源及Ｒｏｂｅｒｔｓ培养基盐成分的碱性ＰＥＧ 培养基中,首次使芸苔属脱外壁花粉萌发,萌发率可达３３％ ～４１％ 。在扫描电镜下观察了花粉脱外壁与萌发的过程。讨论了不同植物花粉脱外壁的方法与花粉壁生物学特点的对应关系,以及外壁对花粉萌发的可能作用     

花粉管中的微丝和微管

对花粉管中的微丝和微管研究的几个问题的进展进行了综述, 包括微丝和微管在花粉管中的分布;微丝和微管在花粉管胞质流动、细胞器运动以及花粉管生长中的作用等几个方面。并对今后这些方面研究的重要问题进行了论述。     

类整合素在烟草花粉萌发和花粉管生长中的作用

本文研究了动物整合素VnR抗血清及动物整合素专一性抑制剂含RGD的多肽对体外及半体内培养条件下烟草花粉萌发及花粉管生长的影响。结果表明在体外培养条件下,VnR抗血清及GRGDSP肽对花粉的萌发及花粉管的生长没有明显的抑制作用,但可抑制钙调素促进的花粉萌发和花粉管的生长;两者对柱头上进行的花粉萌发及在花柱里进行的花粉管生长也有一定程度的抑制。对类整合素在花粉萌发及花粉管生长中的作用进行了讨论。