衍生化GC-MS同时测定苍耳子中14种脂肪酸的含量

建立衍生化气相色谱-质谱联用(GC-MS)同时测定苍耳子不同产地及商品药材中14种脂肪酸含量的方法。采用HP-5MS(30.0 m×250μm×0.25μm)毛细管色谱柱,程序升温,初温:80℃,以10℃/min升至195℃,保持2 min,再以3℃/min升至230℃,保持2 min。进样口温度250℃,分流比10∶1,进样量1.0μL,载气为氮气,流速为10 m L/min,对苍耳子不同产地及商品药材脂肪油的甲酯化样品采用SIM模式进行分析。14种脂肪酸的响应峰面积与其相应浓度的线性关系良好(r0.9948),加样回收率为97.02%~100.75%。本方法准确、专属,重复性好,能有效测定苍耳子药材中含有的脂肪酸,为苍耳子药材内在质量的综合评价提供依据。     

顶空气相色谱法测定齐拉西酮中残留溶剂

目的:建立测定齐拉西酮残留溶剂的顶空毛细管气相色谱法。方法:采用程序升温法,FID检测器,色谱柱为DB-624毛细管柱(30.0m×0.53mm,df=3.0μm),载气为氮气,进样口温度为250℃,柱温50℃,保持8min,以10℃/min的速度升到150℃,再以50℃/min的速度升到200℃保持6min,检测器温度2 50℃,顶空温度为1 00℃。结果:在该条件下甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯及二甲苯的浓度与色谱峰面积线性关系良好,相关系数均大于0.999,平均回收率在95%-105%之间,RSD﹤3%,符合药典规定。结论:所用顶空气相色谱法简便、准确、灵敏度高,适用于本药物残留溶剂的测定。     

人Nek2蛋白原核表达纯化及其多克隆抗体制备 *

目的通过原核表达系统表达人Nek2蛋白,优化表达条件并纯化Nek2蛋白,制备抗Nek2多克隆抗体.方法 将Nek2基因片段构建到原核表达载体pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21 (DE3);加入诱导剂IPTG诱导表达,对诱导温度,诱导剂IPTG终浓度,诱导时间等条件进行优化;利用12% SDS-PAGE后250mmol/L KCl染色切胶纯化蛋白质,将纯化后的Nek2蛋白进行质谱鉴定;纯化Nek2蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,运用ELISA,Western blot和免疫荧光实验检测多克隆抗体效价和特异性.结果 构建了pET30a(+)-Nek2重组原核表达质粒,诱导的重组人Nek2蛋白主要以包涵体的形式存在;蛋白质的最适诱导表达条件为28℃,180r/min条件下加入终浓度为0.2mmol/L IPTG诱导32h;质谱分析纯化后的蛋白质为Nek2蛋白,最终获得浓度为1.35mg/ml纯化后的Nek2蛋白;纯化蛋白免疫小鼠,多克隆抗体效价大于1∶243 000,且具有良好的抗原特异性;免疫荧光实验显示Nek2主要定位于细胞质和细胞核.结论: 利用重组人Nek2蛋白获得具有良好抗原特异性的抗Nek2多克隆抗体.     

纳米二氧化硅复合寒冷对A549细胞毒性及其炎性因子分泌的影响*

目的: 本研究旨在探讨纳米二氧化硅(Nano-SiO₂)颗粒和寒冷复合对人肺腺癌上皮细胞A549细胞毒性及炎性因子分泌的影响。方法: 本研究以A549细胞为实验对象,分别用10, 50, 100, 200 μg/ml Nano-SiO₂颗粒对A549细胞染毒,以及分别在35℃,33℃,31℃条件下对A549细胞进行低温暴露,培养48 h后,观察细胞形态及测定细胞相对存活率。根据单因素分析结果,选出对A549细胞相对存活率有显著降低作用的Nano-SiO₂剂量和温度的基础上,按照2×2析因设计实验,分为4组:①37℃对照组;②Nano-SiO₂染毒组;③低温暴露组;④Nano-SiO₂和低温复合组,不同条件下暴露48 h后,收集细胞上清液采用比色法检测LDH活性,以及ELISA法测定细胞因子白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的水平,采用qRT-PCR法检测细胞IL-6和IL-8的基因表达水平。结果: 100 μg/ml Nano-SiO₂组和31℃低温组能够显著降低A549细胞活性(P＜0.01),在复合条件作用下对A549细胞活性抑制最为显著,且炎性因子IL-6和IL-8及mRNA的表达水平均显著升高(P＜0.01)。结论: 100 μg/ml Nano-SiO₂与31℃低温复合暴露可协同降低A549细胞的相对存活率,增加炎性因子IL-6和IL-8表达水平。     

顶空气相色谱法检测破伤风抗毒素中的甲苯残留量

目的建立检测破伤风抗毒素中甲苯残留量的顶空气相色谱法。方法参照《中国药典》三部(2015版)"残留溶剂测定法",采用Agilent DB-1301毛细管色谱柱(15.0 m×530μm×1.00μm)及氢火焰离子化检测器;顶空进样器各参数分别为:平衡温度70℃,平衡时间30 min,定量环温度80℃,传输线温度90℃,进样量1 m L;气相色谱仪各参数为:进样室温度100℃,柱温箱温度60℃,检测器温度220℃,载气氮气流速5 m L/min,采集时间5min;并对该方法的系统适用性、专属性、线性范围、准确度和精密度、检测限和定量限进行验证及初步应用。结果甲苯保留时间2.429 min,峰面积的RSD为1.9%,以甲苯色谱峰计算得到的理论塔板数N=12 900,甲苯色谱峰与其相邻色谱峰的分离度R=6.03。方法的专属性强,制品中的其他物质不干扰甲苯的出峰;标准曲线的范围为1.0×10-4%~2.0×10-3%,相关系数r大于0.99;加标试验的回收率分别为96.0%~102.9%、100.7%~111.0%,重复性和日间精密度RSD均小于5%。检出限为2.6×10-6%,定量限为1.0×10-5%。测定10批破伤风抗毒素成品和10批破伤风抗毒素原液,其甲苯残留量均低于检出限,远低于规定的限度0.089%。结论该方法简便、快速、准确度、灵敏度高、精密度好,适用于破伤风抗毒素类制品中甲苯残留量的检测。     

HPLC测定双金花茶中免疫活性分子山奈酚的含量

目的建立HPLC测定双金花茶中免疫活性分子山奈酚含量的方法。方法采用Kromasil C18(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇∶0.1%醋酸水溶液(70∶30);流速:1.0 ml/min;检测波长:370 nm;柱温:25℃。结果山奈酚在进样量0.04～0.40μg(r=0.9999)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率为100.00%,RSD为0.07%(n=6)。结论 HPLC法简便易行,准确可靠,可用于双金花茶中免疫活性分子山奈酚含量测定。     

氢火焰气相色谱仪内标法测定反式脂肪酸的条件的建立及验证

目的:研究氢火焰气相色谱仪(GC112A)内标法测定反式脂肪酸的实验室最佳条件。方法:采用气相色谱内标-标准曲线法,通过测定反式脂肪酸标准品工作液的标准曲线、重现性和分离度来确定和验证GC112A的最佳色谱条件。结果:实验室最佳色谱条件:毛细管柱,PC-88(100 m×0.25 mm×0.2μm);进样口温度:260℃;载气:高纯N2,压力220 k Pa,流速41.0 m L/min;检测器(FID)温度:290℃,氢气压力100 k Pa,流速21.0 m L/min;空气压力160 k Pa,流速215.0 m L/min;检测器(FID)灵敏度:1010;手动进样,进样量:1.0μL。结论:该方法避免了外标法(国标方法)的国产仪器局限性和操作者人工进样的不确定性,具有受仪器参数变化的影响较小的特点,适合在基层食品检验机构推广。     

HPLC法同时测定草苁蓉中草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B

为建立高效液相色谱法同时测定草苁蓉干燥全草中草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B的含量的分析方法,采用色谱柱:Klimail 100-5 C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:以乙腈为流动相A,以0.5%甲酸水溶液为流动相B,梯度洗脱条件:0~12 min,15%A;12~30 min,15%~20%A;30~40 min,20%~25%A;40~45 min,25%~30%A;45~60 min,30%~100%A;流速:1.0 mL·min^-1;检测波长:260 nm;柱温:30℃;进样量:20μL。得到草苁蓉纳拉苷的线性范围为4.688~150μg·mL^-1(R²=0.999 5);草苁蓉苷B的线性范围为3.438~110μg·mL^-1(R²=0.999 1);平均回收率分别为97.86%、96.55%;RSD分别为1.01、1.23(n=9)。本研究利用高效液相色谱法建立了同时测定草苁蓉全草中草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B两种组分的方法。方法学的验证结果证明,该方法简便、快捷,重现性好,可以用于草苁蓉中草苁蓉纳拉苷和草苁蓉苷B两种组分的含量测定。     

脑水肿干湿重法的测定条件分析

目的：分析干湿重法测定脑水肿的温度条件和时间条件,探讨优化测量方案。方法：健康SD大鼠随机分为3组（n=4）：取脑组织称其湿重,分别连续烘烤16 h,用于不同温度条件下60℃、90℃、110℃的干湿重法脑水肿测定,检测不同时间点脑组织重量变化以及重量差值变化情况。结果：在不同温度下,随着时间的延长,脑组织重量逐渐减轻;温度在110℃条件下,9 h两次称量干重之差小于0.0002 g,已经烘烤至恒重;90℃温度条件下12 h至恒重;60℃温度条件下15.5 h至恒重。结论：干湿重法测量脑水肿的优化方案为110℃ 9 h、90℃ 12 h、60℃ 15.5 h,为脑水肿的测定提供实验依据。     

顶空气相色谱法测定熊去氧胆酸中3种有机溶剂残留量

目的:建立顶空气相色谱法同时测定熊去氧胆酸原料药中3种有机溶剂残留量的方法。方法:用0.25 mol·L-1的氢氧化钠溶液溶解样品,采用顶空进样-气相色谱法,应用FID检测器,在DB-WAX毛细管色谱柱(30.0 m×320μm×1.0μm)上程序升温(起始温度70℃,保持5分钟,再以15℃·min-1的升温速率升至180℃,保持5分钟),载气为氮气,进样口温度200℃,检测器温度230℃。结果:待测组分均能得到有效分离,各组分在所考察的浓度范围内线性关系良好,r=0.9976~0.9996,平均回收率为91.00%~99.09%。结论:本方法可准确测定熊去氧胆酸原料药中丙酮、乙醇及N,N-二甲基甲酰胺的残留量,操作简便、准确度和灵敏度高,可达到有效控制其质量的目的。     

A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗及b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量检测方法的建立与验证

目的建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并加以验证。方法参照《中华人民共和国药典》三部(2010年版)中"毛细管柱顶空进样等温法",优化色谱条件,建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并对该方法进行验证及初步应用。结果色谱条件为顶空平衡温度70℃,顶空平衡时间40 min,汽化室温度200℃,柱箱温度40℃,检测器温度250℃,进样量为1.0 m L,载气(高纯氮气)流量1.3 m L/min,尾吹气(高纯氮气)流量5 m L/min,分流比1∶1。丙酮质量分数在2×10-6~5×10-5范围内具有良好的线性关系(r0.99)。丙酮的平均回收率及相对标准偏差(RSD)分别为86.05%~105.11%及2.1%~9.5%,检测限为2×10-6,定量限为3×10-6。结论本方法的线性、特异性、准确性、重复性等均符合规定,方法准确、稳定,可用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测。     

气相色谱法同时测定人血清中角鲨烯和5种非胆固醇类固醇的报告

目的:建立气相色谱-氢火焰离子化检测器同时测定人血清中角鲨烯及2,4-脱氢胆甾烷醇、7-烯胆甾烷醇、菜油固醇、豆固醇和β-谷固醇等5种非胆固醇类固醇的分析方法,为了解患者胆固醇代谢个体差异提供检测手段.方法:通过碱性醇溶液皂化、正己烷提取、硅烷化试剂衍生等步骤对血清样品进行前处理.选用以下条件检测:HP-5石英毛细管柱(30 m×0.32mm×0.25μm);初始柱温150℃,保持3 min,程序升温速率30℃/min至250℃,再以5℃/min升至280℃,保持30 min;氢火焰离子化检测器(FID)温度290℃;进样口温度290℃;进样口压力:15 psi;不分流模式;进样1μL.结果:角鲨烯、2,4-脱氢胆甾烷醇、7-烯胆甾烷醇、菜油固醇、豆固醇和β-谷固醇的检出限分别为0.011 mg/dL,0.0058mg/dL,0.018mg/dL,0.0089mg/dL,0.047mg/dL,0.018 mg/dL;加标回收率分别为在95～102%之间,日内变异系数为0.98%～2.71%(n=5),日间变异系数为1.26%～5.83%(n=5).结论:气相色谱-氢火焰离子化检测法可同时测定人血清中角鲨烯和5种非胆固醇类固醇,并具有良好的准确度和精密性,12h内的稳定性好,可用于患者胆固醇代谢个体差异分析.     

建立正常人肺血管容量的无创精确测量方法的初步报告*

目的: 由于传统呼吸调控环路忽略了对血液循环的决定性作用,肺（静脉）血管容量相关研究甚少,亟需建立肺血管容量测量方法。方法: 选择正常志愿者完成CT全肺扫描,图像数据经过计算机软件分析处理,从肺尖到肺底以40~50层进行肺野手工切划,相邻层间由计算机自动模拟连接,在去除干扰后进行全肺血管（≥0.6 mm）高精度三维立体成像技术处理,进而计算全肺和肺血管容积。结果: 12例正常志愿者从肺尖到肺底CT扫描图片层数为530±98（431~841）张。全肺和肺血管的总容积是3705±857（2398~5383）ml ,肺血管血液总的容积是125±32（94~201）ml。按肺静脉系统血管容量约为全肺血管血液容量一半计算,应该是63±16（47~100）ml。结论: 肺CT扫描数据分析三维立体成像建立肺血管容量无创测量方法精确可行。     

反相高效液相色谱法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖甙和丁香脂素二糖甙

采用高效液相色谱法建立同时测定杜仲中松脂醇二葡萄糖甙(PDG)和丁香脂素二糖甙(SDG)的方法。色谱条件为:色谱柱为VP-ODSC18柱(150mm×4.6mm,预柱10mm×4.6mm);流动相为甲醇∶水(v/v)=30∶70;流速1mL/min;柱温25℃;进样量10μL;检测波长227nm。松脂醇二葡萄糖甙在和丁香脂素二糖甙进样量分别在30.8~154.0μg/mL之间,SDG的进样量在26.4~88.0μg/mL之间时,线性关系良好;平均回收率分别为99.8%,98.6%。结果表明该方法快速、准确、简单,可用于杜仲中松脂醇二葡萄糖甙和丁香脂素二糖甙的定量测定。     

高效液相色谱法联用蒸发光散射测定薏苡仁多糖的单糖组成

建立高效液相色谱法(HPLC)联用蒸发光散射(ELSD),对薏苡仁多糖的单糖组成进行测定。HPLC色谱条件:Supelco~?APHERA NH_2 Polymer色谱柱(150 mm×2 mm,5μm);流动相:乙腈-0.05 mol/L醋酸铵溶液(体积比为85∶15);流速:0.2 mL/min;进样量:10μL;柱温:35℃;ELSD检测条件:漂移管温度为60℃,载气流量为1.6 L/min。研究结果表明:甘露糖(mannose)、半乳糖(galactose)、葡萄糖醛酸(glucuroaicacid)、鼠李糖(rhamnose)、半乳糖醛酸(galacturonic acid)、葡萄糖(glucose)、阿拉伯糖(arabirose)和岩藻糖(flucose)的进样量对数与峰面积对数在一定范围内均呈现出较好的线性关系(0.999 1～0.999 9),回收率均在97.4%～100.4%,RSD均小于2%。研究表明该方法准确可靠,分离效果好,可用于测定薏苡仁多糖的单糖组成。     

溴化乙锭诱导的短暂脱髓鞘增强PRV的逆行转导效率 *

目的 改进伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)的注射方法,通过溴化乙锭(ethidium bromide,EB)诱导的短暂脱髓鞘提高PRV的转导效率。方法 选用18只正常成年Wistar大鼠,随机分为肌肉组、NS组和EB组(n=6)。肌肉组将2μl滴度为2×10 ⁹的PRV工具病毒注射到胫骨前肌和腓肠肌上;NS组将2μl生理盐水(normal saline,NS)注射到坐骨神经上,1周后相同位置注射2μl滴度为2×10 ⁹的PRV;EB组将2μl 0.1%的EB注射到坐骨神经上,1周后相同位置注射2μl滴度为2×10 ⁹的PRV。大鼠注射PRV 5天后,灌流取材并制作冰冻切片,观察各级神经元的感染情况。 结果 EB组大鼠L4-L5脊髓前角神经元和背根神经节(DRG)、T8脊髓中间神经元、C4脊髓中间神经元、延髓、中脑、大脑皮层均有大量神经元被PRV标记。肌肉组和NS组各级神经元仅有少量被PRV标记。结论 EB诱导坐骨神经脱髓鞘后能够显著提高PRV的逆行转导效率。     

单棕榈酰莽草酸的高效液相色谱-蒸发光散射检测法定量测定

本文建立一种采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法定量测定单棕榈酰莽草酸的方法。色谱条件:色谱柱:反相Symmetry C18柱4.6×250 mm i.d.(填料粒度5μm),柱温30℃,流动相:乙腈-水-甲酸(80∶20∶0.2);流速0.8 mL/min;ELSD漂移管温度:80℃,载气流速:2 L/min。3-,4-和5-棕榈酰莽草酸纯品采用酶法合成,合成产物经柱层析和高效液相色谱制备纯化得到纯品。在该色谱条件下,3-,4-和5-棕榈酰莽草酸在0.21~4.12μg的范围内,其质量与其峰面积线性关系良好(r=0.9991,0.9998,0.9997),回收率分别为95.2~98.7%,96.1%~98.2%,96.3%~98.5%;RSD分别为1.6%,1.8%,1.9%。实验结果表明该方法具有简便、快速、准确、重现性较好的特点,可以用于定量分析单棕榈酰莽草酸,尤其适用于非水相酶促反应合成体系中的产物检测。     

高效液相色谱法测定降糖1号胶囊中淫羊藿苷的含量

目的:建立测定降糖1号胶囊中淫羊藿苷含量的方法。方法:室温条件下超声提取降糖1号胶囊中的淫羊藿苷,用D101大孔吸附树脂柱纯化提取物,高效液相色谱法(HPLC)测定含量,色谱柱:Hypersil ODS2(4.6mm×200mm,5μm);流动相:乙腈-水(30:70);流速:1ml/min,检测波长270nm;柱温:30℃。结果:淫羊藿苷的进样量在0.08μg-0.28μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率(n=6)为96.66%,RSD为2.14%。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于降糖1号胶囊的质量控制。     

GC 法测定丙酮酸乙酯注射液中EP 的含量

目的:建立测定丙酮酸乙酯的含量测定方法。方法:采用气相色谱法,以环戊酮为内标物。色谱柱为VARIAN CP7502(25 m×0.25 mm×0.25μm),柱温115℃,进样口温度210℃,FID检测器温度210℃,氮气(载气)流量为30 ml.min-1;氢气(燃气)流量为40 ml.min-1;空气(助燃气)流量为400 ml.min-1,分流比1:100。结果:EP进样浓度在0.50035 mg.ml-1～9.0063 mg.ml-1范围内与峰面积积分呈良好的线性关系(r2=0.9996),平均加样回收率为99.76%,RSD为0.46%。结论:本方法简便、快速、准确、重复性好,可用于丙酮酸乙酯注射液的质量控制。     

HPLC测定姬松茸中谷胱甘肽的含量

本实验建立了HPLC法测定姬松茸中谷胱甘肽的方法,在水提条件下,用Waters RP18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm),以0.1%三氟乙酸水溶液-甲醇(98∶2,v/v)为流动相,流速1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长200 nm,进样量10μL,谷胱甘肽在8 min内出峰。该方法中谷胱甘肽标准品在8~160μg/mL范围内线性良好,R2=0.9997,检出限为0.125μg/mL,加标回收率在94.18%~95.80%之间,RSD2%。本方法快速、简便、准确,灵敏度高,适合批量样品的检测与分析。