急非淋M_5型白血病单克隆抗体与柔红霉素偶合物的制备及体外细胞毒作用

用ＰＥＧ沉淀法及ＤＥＡＥ─Ｓｅｐｈａｃｅｌ离子交换层析和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌｓ─３００凝胶层析提纯的抗急非淋Ｍ_５型白血病单克隆抗体ＩＡ_１（Ｍ_ｃＡｂ１Ａ_１）,纯度为９９．９％。用葡聚糖作中间体将Ｍ_ｃＡｂ_１Ａ_１与柔红霉素（ＤＮＲ）偶联,制备的免疫偶合物仍保持较好的抗体活性及药物活性。在４８小时杀伤实验中,此偶合物对Ｕ_（９３７）靶细胞的杀伤作用与游离ＤＮＲ相近（Ｐ＞０．０５）,明显大于对照偶合物（Ｐ＜０．０１）;在１小时预杀伤实验中,此偶合物对靶细胞的杀伤作用明显大于游离ＤＮＲ及对照偶合物（Ｐ＜０．０１）。在两个实验中,此偶合物对Ｗｉｓｈ非靶细胞的毒性都明显小于游离ＤＮＲ（Ｐ＜０．０１）;表明此偶合物在体外具有较好的选择性细胞毒作用。     

肽缀合反义寡核苷酸的合成和性能

反义寡核苷酸可作为基因表达的抑制剂和潜在的治疗药物,但多种类型的寡核苷酸为聚阴离子化合物,难以跨过细胞膜.已知包括融合肽、信号肽在内的多种生物活性多肽具有跨膜与核定位能力.讨论了反义寡核苷酸-肽缀合物的合成和生物活性.     

单克隆抗体偶合物及其应用

通过交联技术,将同位素、药物、毒素或植物毒蛋白与单克隆抗体(以下简称McAb)偶联,可制备出各种偶合物。McAb偶合物充分利用了McAb的高特异性,将其做为运载体,将细胞毒性物质运送到人体的靶部位,如肿瘤、病灶等,提高局部浓度,充分发挥杀伤效应;     

尿激酶抗人交联纤维蛋白-D-二聚体单抗化学偶合体的制备

利用双功能试剂Ｎ－琥珀酰亚胺－３（２－二硫吡啶）丙酸酯（ＳＰＤＰ）作交联剂,合成了尿激酶（ＵＫ）－抗人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体单抗（ＭＡ－ＨＩＤ１）化学偶合体（ＵＫＭＡ－ＨＩＤ１）,并用苯甲脒－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ及人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱纯化,获得偶合体产物．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈现一条带,其分子量约为２０００００．纤维蛋白平板法测活结果显示,偶合体中酶比活为５３０００ＩＵ／ｍｇ尿激酶蛋白,与偶联前的５４３００ＩＵ／ｍｇ蛋白相仿．ＥＬＩＳＡ测试显示,偶合体对人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体有免疫反应性,并且与偶联前的抗Ｄ－二聚体单抗对此抗原的反应性相当     

反义脱氧寡核苷酸的抗SRS病毒活性

本文研究了合成的反义脱氧寡核苷酸片段,包括修饰的和非修饰的,同聚的和异聚的脱氧寡核苷酸对SRS病毒感染细胞的增殖,细胞群落形成,xc融合细胞产生和逆转录酶活性的抑制作用。结果表明上述寡聚物对病毒都有抑制活性。小鼠急性毒性试验在高剂量下未见毒性。各种寡聚物的作用机制不同。     

尿激酶抗人交联纤维蛋白—D—二聚体单抗化学偶合体的制备

利用双功能试剂Ｎ－琥珀酰亚胺－３（２－二硫吡啶）丙酸酯（ＳＰＤＰ）作交联剂,合成了尿激酶（ＵＫ）－抗人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体单抗（ＭＡ－ＨＩＤ１）化学偶合体（ＵＫ．ＭＡ－ＨＩＤ１）并用苯甲脒－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ及人交联纤维蛋白降解物Ｄ－二聚体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱纯化,获得偶合体产物,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈现一条带,其分子量约为２０００００,纤维蛋白平板法测活结果显示,偶合体中酶比活     

急非淋M5型白血病单克隆抗体与柔红霉素偶合物的制备及体外…

ＰＥＧ沉淀法及ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ离子交换层析和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌｓ－３００凝胶层析提纯的抗急非淋Ｍ５型白血病单克隆抗体１Ａ１（ＭｃＡｂ１Ａ１）,纯度为９９．９％。用葡聚糖作中间体将ＭｃＡｂ１Ａ１与柔红霉素偶联,制备的免疫偶合物仍保持较好的抗体活性及药物活性。表明此偶合物在体外具有较好的选择性细胞毒作用。     

吗啉反义寡核苷酸在基因功能研究中的应用

吗啉反义寡核苷酸属于第三代反义寡核苷酸,主要通过阻断mRNA的剪接过程来抑制目的基因的功能。吗啉反义寡核苷酸技术现已广泛应用于发育过程中基因功能的研究;鉴于吗啉反义寡核苷酸能与病毒特异mRNA结合,形成的双链物可有效阻断病毒RNA的转录,从而抑制病毒的复制,所以该技术已应用于医学研究,如治疗病毒感染、癌症、肌营养不良症和早老综合症等疾病。主要阐述了吗啉反义寡核苷酸的结构特点、作用机制、与其它反义技术的比较,以及该技术的应用与展望。     

肽核酸相关技术在杂交检测中的应用

肽核酸是一种寡核苷酸的类似物,它是由丹麦哥本哈根大学的Ｎｉｅｌｓｅｎ、Ｅｇｈｏｌｍ等人首先发明合成的。肽核酸与传统的寡核苷酸相比,骨架结构发生了根要变化。肽核酸的电中性骨架有许多ＤＮＡ所不具备的性质,例舅高灵敏度、高特异性、非盐依赖性等,从而使它成为一种优良的寡核苷酸的取代物,尤其是杂交检测领域。     

质谱在寡核苷酸药物质量控制中的应用

介绍了质谱在寡核苷酸质量控制方面的应用.合成寡核苷酸及类似物作为反义治疗剂在病毒感染和一些癌症治疗方面有良好的前景.寡核苷酸作为药物,其结构特性必须进行确证.寡核苷酸浓度和纯度的分析可使用色谱或电泳技术,对寡核苷酸的碱基组成、序列、同一性,修饰基团,色谱或电泳分析方法无能为力.质谱的高鉴别能力使其能有效、灵敏、快速和精确地确定寡核苷酸的这些特性.     

用甲基化的寡聚核苷酸作反义制剂

在含甲基磷酸根的寡核苷酸中,核苷酸之间含有非离子键,能抵抗细胞核酸酶的降解。一这种寡聚物能被培养的哺乳动物细胞完全吸收,它们能与细胞或病毒mRNA的启始密码或编码区或前体RNA的拼接位点有效的结合,特异性地抑制mRNA在细胞中表达。在甲基磷酸根寡核苷酸上衍生与靶mRNA共价交联的功能团,可以增强这种反义寡聚物的效率。这种寡聚核苷酸类似物是研究和控制基因表达的有用工具,并有希望开发成为治疗制剂。     

单克隆抗体靶向制剂的研究进展

本文综述了制备单克隆抗体免疫偶合物的三种方法,即抗体与药物直接交联的方法,药物通过小分子与抗体连接的戊二醛法、顺乌头酸酐法、活性酯法、Ｎ－琥珀酰胺基－３－（２－吡啶基二硫）丙酸法（ＳＰＤＰ法）、腙衍生物法和肽键连接等方法,以及用大分子做载体的交联方法,并介绍了葡聚糖、聚谷氨酸、聚赖氨酸和聚合多肽作载体的性质和应用情况。     

单克隆抗体靶向制剂的研究进展

本文综述了制备单克隆抗体免疫偶合物的三种方法,即抗体与药物直接交联的方法,药物通过小分子与抗体连接的戊二醛法、顺乌头酸酐法、活性酯法、Ｎ－琥珀酰胺基－３－（２－吡啶基二硫）丙酸法（ＳＰＤＰ法）、腙衍生物法和肽键连接等方法,以及用大分子做载体的交联方法,并介绍了葡聚糖、聚谷氨酸、聚赖氨酸和聚合多肽作载体的性质和应用情况。     

植物反义寡核苷酸的研究进展

本文介绍了近年来植物中反义寡核苷酸的研究现状,它包括反义ＤＮＡ、反义ＲＮＡ和Ｒｉｂｏｚｙｍｅ。反义寡核苷酸能特异地桔抗内源或外源基因的表达,这为研究某特定基因功能提供了更为有效的方法。此外也为培育抗病植株、建立植物反向筛选系统,次生代谢调控及农艺性状改良提供了可能途径。     

核酸熔解温度的研究进展与寡核苷酸设计平台的研制

核酸熔解温度的预测在PCR等分子生物学实验中具有重要意义,近年来出现了一些基于最邻近热力学的计算方法,并不断得到优化。介绍两个重要的算法,并应用于寡核苷酸设计平台的研制中。基于较新的Tm值算法,提出了一套简并核酸热力学参数,以满足简并寡核苷酸设计的要求。     

植物反义寡核苷酸的研究进展

本文介绍了近年来植物中反义寡核苷酸的研究现状,它包括反义ＤＮＡ、反应ＲＮＡ和Ｒｉｂｏｚｙｍｅ。反义寡核苷酸能特异地拮抗内源或外源基因表达,这为研究某特定基因功能提供了更有效的方法,此外也为培育抗病植株,建立植物反向筛选系统,次生代谢调控及农艺性状改良提供了可能途径。     

反基因技术中识别多聚嘌呤靶序列嘧啶断点的寡核苷酸

识别CG断点的寡核苷酸包括T^*CG配对的顺向嘧啶（TC）和T^*CG配对的反向嘌呤（G、GA、GT）寡核苷酸,其中以T^*CG配对的反向GT寡核苷酸亲和性最高。识别TA断点的寡核苷酸包括G^*TA配对的顺向嘧啶（TC、TG）和C^*TA配对的反向嘌呤（GA、GT）寡核苷酸,其中以C^*TA配对的反向GA寡核苷酸亲和性最高。识别CG和TA断点的同时存在的寡核苷酸包括T^*CG和G^*TA配对的反向GA和T^*CG和T^*TA配对的反向GT寡核苷酸,以T^*CCG和G^*TA配对反向GA寡核苷酸亲活性较高。     

酵母基因内含子中转录正调控位点的统计分析

以一组随机选取的对照序列中寡核苷酸的出现频率为基础,分析转录频率较高的酵母基因内含子序列的寡核苷酸使用情况,抽提出一批过表达的寡核苷酸。然后对抽取出的寡核苷酸和它们在每个高效转录基因内含子序列中重叠、连接后形成的长寡核苷酸序列片段进行分析．并对照实验结果和用比较分析方法获得的结果、推测这些寡核苷酸可能是高效转录基因内含子序列中潜在的转录因子结合位点。     

cDNA微阵列与寡核苷酸芯片的制备方法

cDNA微阵列和寡核苷酸芯片是常见的合成后点样的DNA微阵列。点样方法主要是通过物理吸附或共价结合的方式将探针固定于载体上,本总结了近年来国内外献报道的cDNA微阵列制备方法;在多聚赖氨酸包被的玻璃基片表面制备cDNA微阵列;用琼脂糖包被的玻璃基片制备cDNA微阵列;在氨基或醛基修饰的玻璃基片表面制备cDNA微阵列;寡核苷酸芯片的制备方法;氨基修饰的玻片与5′末端带氨基的寡核苷酸探针通过不同的linker连接;硅烷化寡核苷酸直接点样于玻片上制成寡核苷酸微阵列;硫代寡核苷酸通过二硫键与巯基修饰的玻片连接;水凝胶芯片固定寡核苷酸。丙烯酰胺硅烷化的基片与5′丙烯酰胺修饰的寡核苷酸连接。并展望了基因芯片的应用前景。     

端粒酶RNA组分的反义寡核苷酸对BEL-7404人肝癌细胞端粒酶活性的抑制和细胞凋亡的诱导

端粒酶在四株人肝癌细胞中均有表达,而在正常人肝组织标本中却为阴性.在终浓度为1μmol/L时,针对端粒酶RNA组分的反义寡核苷酸对BEL7404人肝癌细胞端粒酶活性具明显抑制作用,而正义和错义寡聚物则对该细胞端粒酶活性几乎没有影响.随着反义物浓度的降低,抑制作用亦随之减弱.用终浓度为5μmol/L的反义物处理培养的BEL-7404人肝癌细胞96 h后,细胞形态发生变化.原位末端标记法(TLUNEL)显示阳性标记细胞,流式细胞仪分析表明反义物作用后细胞凋亡率达到42.58%.