高速PCR用DNA聚合酶

ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术自创始至今还不到１５年的时间 ,但它已以惊人的速度渗透到了工业、农业、医学、药学等各个领域〔１ ,２〕。ＰＣＲ技术的发明无疑给生物工程带来了历史性的转折 ,促进了生物工程 ,特别是基因工程研究的飞速发展〔３〕。近期 ,随着人类基因组计划等的实施 ,并伴随着生物芯片技术的推广 ,快速、高效的ＰＣＲ已成为ＰＣＲ技术发展的必然趋势。ＴａＫａＲａ推出的Ｚ ＴａｑＤＮＡ聚合酶（Ｚ是指Ａ、Ｂ……排列的最后一个字母 ,指最快的意思 ,为商品名）是为快速ＰＣＲ而研制成功…     

扩增大段靶DNA的PCR方法

扩增大段靶ＤＮＡ的ＰＣＲ方法陈尚武,王章（中山大学生命科学学院,广州）ＰＣＲ和分子克隆是扩增遗传物质的常用技术。热稳定Ｔａｑ（Ｔｈｅｒｍｕｓａｑｕａｔｉｃｕｓ）ＤＮＡ聚合酶的应用以及ＰＣＲ技术所固有的迅速、简便、廉价等优点,使ＤＮＡ片段的ＰＣＲ扩增成...     

聚合酶链反应（PCR）对未知序列DNA的扩增技术

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是由引物介导,在体外将特异性DNA序列利用酶促作用进行扩增的方法。双链DNA热变性,然后在低温下与引物退火,再在中等温度下进行延伸,三步为一循环。一般经30～35次循环,很容易将目的基因或DNA片段特异地扩增至少10~6～10~7倍。它已是分子生物学研究中常用的、不可缺少的一项基本技术。但常规PCR需在待扩增的已知序列两端分别设计两个寡核苷酸引物,也就     

PCR技术用于HBV DNA检测的研究进展

ＰＣＲ技术自八十年代在美国问世以来,已成功地用于多种病原体的检测,八十年代末在美国成功的利用此技术对ＨＢＶ　ＤＮＡ进行了检测,我国在九十年代初也世开始了这方面的工作,并取得了成功,本文综合介绍国内外这方面的工作,并对一些具体的ＰＣＲ方法进行了详细的介绍,并对利用ＰＣＲ技术检测ＨＢＶ　ＤＮＡ时因实验设计及操作误差造成的负面影响进行了讨论。     

大熊猫微卫星DNA的筛选及其应用

经ＤｐｎⅡ限制酶消化大熊猫基因组ＤＮＡ后,选取１５０－５００ｂｐ大小的片段构建了ＤＮＡ文库。用合成的（ＣＡ）（１５）探针从这一文库中克隆筛选了１０个大熊猫特异的微卫星ＤＮＡ座位。在测定ＤＮＡ序列的基础上设计并合成了１０个座位特异的引物,以ＰＣＲ技术扩增了７份抽提自组织细胞和６份抽提自毛发的大熊猫ＤＮＡ样品。发现除座位ｇ（００７）外,其余９个座位均呈多态性,而且所有座位均为偶数碱基的长度变异。对有准确谱系记录的家系的研究结果证明,这１０个微卫星ＤＮＡ座位严格按孟德尔方式遗传。因而这些座位能有效地应用于大熊猫的亲子鉴定,从而为建立各地大熊猫谱系和制定有效的繁殖计划提供了一个有效的遗传学手段。根据这１０个微卫星座位的分析,我们澄清了两组未知的父系关系。     

微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)银染法的改良

为了筛选和检测绵羊种群中具有较好表现的微卫星多态性,采用Touch-down PCR方法扩增绵羊基因组上的微卫星DNA序列后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,采用改良的银染法对微卫星位点进行多态性检测,染色结果与常规银染法相比,该方法具有灵敏度高、背景浅、污染小、条带清晰等突出特点,能有效地控制染色背景,显著提高检测分辨率,整个染色过程所需时间短,具有广泛的推广价值。     

PCR法快速检测临床标本中结核杆菌DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）快速检测临床标本（脑脊液、胸水、腹水、血、痰液）中的结核杆菌ＤＮＡ,特异性扩增片段１２３ｂｐ,为结核杆菌的特异性重复序列ＩＳ６１１０部分基因。ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性达１０ｆｇＤＮＡ。临床标本的ＰＣＲ检测阳性率（２３．３％）明显高于抗酸染色涂片（２．９％）和细菌培养（５．７％）的阳性率（Ｐ〈０．０５）。通过设立对照系统及对扩增产物酶切分析,表明该法无假阴性结果（特异     

PCR扩增近交系大鼠微卫星位点DNA多态性的研究

本实验选取大鼠7条染色体上的微卫星位点合成了10对引物,利用聚合酶链反应（PCR）扩增技术对国内北京和哈尔滨等4家单位提供伯6个品系（SHR、SHRSP、LEW、RCS、WKY和F344）的8个近交系大鼠群体进行了DNA多态性分析的研究。结果表明：9个微卫星位点具有显多态性;不同品系个体之间具有多态性;同一群体不同个体之间除SHR（哈）的SMST位点和WKY（哈）的AGT位点出现一定的差异,其他均没有差异;不同地区同一品系的不同个体之间也存在一定的差异。该方法能有效地对近交系与杂交系、品系与品系、品系与亚系加以区分。因此,本实验为开展近交系大鼠遗传作图、基因定位和为实验动物的遗传背景监测提供可靠的信息,为大鼠遗传基因的研究提供了一个快速简例、特异准确的方法。     

微卫星DNA的多态性及其应用

微卫星DNA是广泛存在于各种真核生物基因组中的短串联重复序列,具有突变速率快、多态性高等特点,本分析了微卫星的多态性及其形成机制,并简要介绍其在亲缘关系鉴定、种群遗传结构分析、基因图谱以及基因诊断等方面的应用。     

用PCR方法证实HIV—1感染性病毒颗粒携带有前病毒DNA

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）为检测手段，证明了成熟的人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）可携带前病毒ＤＮＡ。用细胞病毒裂解液处理病毒样品或在病毒样品中只加磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）代替细胞裂解液，结果发现只有病毒裂解液处理样品后才能检测到特异ＤＮＡ。完整的病毒颗粒对ＤＮＡ酶不敏感，而只有在病毒裂解以后才能对ＤＮＡ酶敏感。当靶细胞膜上的ＣＤ４受体被特异的单克隆抗体覆盖后不能吸附病毒时，ＤＮＡ也不能被检测到，而且     

PCR检测血清HBV DNA

本文利用ＨＢＶ ＤＮＡ基因组ｐｒｅＣ和Ｃ区的一套引物,以ＰＣＲ法检测了２６例健康正常人血清和９５例免疫标志各异、临床症状不同的乙肝或可疑乙肝患者的血清,前者无１例检出ＨＢＶ ＤＮＡ,后者共检出的６６例血 清存在ＨＢＶ ＤＮＡ。该方法特异性强,适用于检测任一亚型的ＨＢＶ ＤＮＡ,一轮ＰＣＲ最低可检出０．１ｐｇ的ＨＢＶ ＤＮＡ。     

多聚酶链反应技术诊断结核病的进展

多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术在结核病诊断上发展迅速。本文就①结核菌ＤＮＡ提取技术;②引物的设计;③用于诊断结核的ＰＣＲ方法;④ＰＣＲ产物的检测方法;⑤ＰＣＲ的敏感性和特异性;⑥ＰＣＲ临床应用和注意事项等方面,简述该技术在结核病诊断中应用的进展和需要进一步研究的问题。     

麂属动物陈旧皮张标本的DNA提取及PCR扩增

本实验用改进的方法从保存于标本馆的动物皮张标本中提取ＤＮＡ,所得ＤＮＡ片段的分子量从１００ｂｐ到１ｋｂ以上。利用线粒体ＤＮＡ细胞色素ｂ通用引物和ＰＣＲ技术,从小麂、印度麂、贡山麂、费氏麂、黑麂ＤＮＡ中扩增出３０７ｂｐ的细胞色素ｂ特异片段。用２８种限制性内切酶对从新鲜血样和从陈旧皮张标本中所得扩增片段进行酶切分析,发现只有４个酶在这个片段上有切点,其中ＨａｅⅢ和ＨａｐⅡ的识别位点在各种麂中有所不同。     

由小麦赤霉病菌菌丝快速提取DNA用于PCR扩增反应

采用加玻璃珠混合振荡１８００ｒ／ｍｉｎ１５分钟并９５℃水浴加热１０～２０分钟的物理破壁方法由真菌菌丝直接提取ＤＮＡ用于ＰＣＲ扩增,具有所提ＤＮＡ可扩增性好,提取方法简便易行,便宜等优点,相同引物或不同引物的二次扩增产物均好于一次扩增,且以引物Ｂ１和Ｂ３扩增后再且引物Ｆｇｌ和Ｆｇ２扩增的效果最好,此法可广泛应用于大量样品的ＰＣＲ和ＲＡＰＤ扩增实验。     

免疫—PCR技术进展

免疫－ＰＣＲ结合了抗原抗体反应的特异性和ＰＣＲ的高敏感性,是一种极为敏感的抗原检测技术,并适合于各种微量抗原的检测。免疫－ＰＣＲ的关键在于形成抗体－标记ＤＮＡ偶联物,作为桥梁连接免疫反应的特异和ＰＣＲ的高扩增能力。本文简述了－ＰＣＲ的基流程以及与标ＤＮＡ相偶联,ＰＣＲ产物检测方法的进展。     

PCR 扩增人型结核杆菌 DNA 及结核杆菌属 DNA 探针的制备

用多聚酶链反应(PCR)方法扩增人型、牛型结核杆菌基因组 DNA,获得特异的158 bpDNA 片段,而从另外十三种分枝杆菌未见到特异的扩增产物.回收158 bpDNA 片段作探针,它除与人型、牛型结核杆菌有特异的杂交信号外,与金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌及一些分枝杆菌皆没有杂交反应.结果表明,PCR 可用于检测结核杆菌基因组 DNA,扩增产物158 bp DNA 片段可作为探针用于检测人型、牛型结核杆菌并鉴别结核杆菌与其它分枝杆菌.     

微卫星DNA标记技术及其在昆虫学上的应用

综述微卫星DNA标记技术在昆虫特定基因定位、种群遗传结构及分化、近缘物种的区分、昆虫生态特性的系统进化以及微卫星基因图谱的绘制等领域中的应用。