血小板膜糖蛋白IIb／IIIa复合体分子生物学研究进展

ＧＰⅡｂ／Ⅲａ作为血小板膜上粘合蛋白,主要参与血小板的聚集作用。随着分子生物学的进展和相关实验技术的应用,逐渐的对ＧＰⅡｂ／Ⅲａ的分子结构和基因结构有了进一步的了解,对ＧＰⅡｂ／Ⅲａ的结构与功能的关系也有更了深入的认识。本就血小板膜ＧＰⅡｂ／Ⅲａ的分子结构、基因结构特征和基因突变对血小板聚集功能的影响进行综述。     

血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)在我国蒙古族人群中分布的多态性

血小板膜糖蛋白Ｉｂ（ＧＰＩｂ）在凝血过程中起重要作用。已有报道ＧＰＩｂ在人群中呈多态性分布,表现为分子量稍有差异。本文旨在研究ＧＰＩｂ在我国蒙古族人群中分布的多态性,以期探索不同民族之间是否存在差异。血小板分离自１０２名蒙古族健康青少年。血小板膜蛋白经ＳＤＳ┐聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ┐ＰＡＧＥ）后,再转移至硝酸纤维素膜上（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ）,用生物素化的麦胚凝集素（ＷＧＡ／Ｂｉｏ）偶联生物素卵白素结合的辣根过氧化酶（ＡＢＣＫｉｔ）染色,以４┐氯┐１┐萘酚显色,结果显示出硝酸纤维素膜上的ＧＰＩｂα链,分子量分别为１４１,１３６,１３２,１２８ＫＤ,即Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ四型,其出现频率分别为０．０７８,０．４６１,０．３９２及０．０６９。这一结果与我国汉族人群中ＧＰＩｂ分布的多态性极为相似,均出现有四型。各型出现的基因频率在两个民族之间无显著性差异;其所构成的表型在两个民族之间似有不同,但经统计学分析（卡方检验）也无显著性差异     

人血小板生成素受体c—MPL膜内部分的聚合作用

血小板生成素（ＴＰＯ）是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体ｃ－ＭＰＬ介导。利用酵母双杂合系统研究ｃ－ＭＰＬ膜内部分在ＴＰＯ信号转导途径中的功能。首先用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法从人红白血病ＨＥＬ细胞系总ＲＮＡ中扩增并克隆Ｐ型ｃ－ＭＰＬ（ＭＰＬＰ）膜内部分ｃＤＮＡ,经测序验证后克隆至双杂合载体ｐＡＳ２和ｐＧＡＤ４２４中,重组质粒命名为ｐＡＳＭＭ和ｐＧＡＤＭＭ。将ｐＡＳＭＭ与ｐ     

抗血栓受体被克隆和识别

人类血小板有两种ＡＤＰ受体参与血小板的活化。一种受体与Ｇ蛋白中的Ｇｑ分支结合 ,另一种通过Ｇｉ与腺苷酸环化酶的抑制有关。与Ｇｉ相关的受体是抗血栓药物ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ和ｔｉｃｌｏｐｉｄｉｎ等的作用目标。现在 ,被称为Ｐ2Ｙ12的受体终于被克隆和识别出来。研究人员发现对没有天然止血功能的患者 ,编码Ｐ2Ｙ12受体的基因是有缺陷的。抗血栓受体被克隆和识别@车笛     

PKC,PKA和TPK在血小板激活中的作用

利用＾３２Ｐ－ＮａＨ２ＰＯ４标记猪血小板,然后,以ＰＭＡ,凝血酶,ＰＧＥ１腺苷等处理,结果表明,随着ＰＭＡ激活ＰＫＣ,血小板发生聚集,３５μｍｏｌ／ＬＰＧＥ１或１ｍｍｏｌ／ＬｄｂｃＡＭＰ不能抑制５０ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的血小板聚集,腺苷却能抑制ＰＭＡ诱导的血小板聚集（ＥＣ５０＝０．１ｍｍｏｌ／Ｌ,ｄｂ－ｃＡＭＰ,腺苷都不能抑制１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的４０ｋＤ蛋白磷酸化,ＰＫＡ激活不能抑制Ｐ     

精-甘-天冬-丝氨酸四肽对二磷酸腺苷诱导大鼠血小板活化的信号转导的影响

本工作在二磷酸腺苷（ＡＤＰ）活化的大鼠血小板上,观察精－甘－天冬－丝上肽（ＲＧＤＳ肽）对血小板聚集、蛋白磷酸化、蛋白激酶Ｃ和丝裂素活化蛋白激酶活性的影响。结果发现,５０μｍｏｌ／ＬＡＤＰ引起血小板聚集时,蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ０及丝裂经蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性增加,并引起９５和６６ｋＤ蛋白磷酸化。应用５０,１００和２００μｍｏｌ／ＬＲＧＤＳ肽与基共同孵育,呈浓度依赖地抑制ＡＤＰ引起的血小板聚集和对ＰＫ     

PDGF的性质、与疾病的关系及其临床应用

血小板生长因子（ＰＤＧＦ）是一种可由多种细胞产生并释放的活性多肽。ＰＤＧＦ可通过对磷脂酰肌醇、Ｃａ~（２＋）的调节一方面促进多种细胞分裂增殖,另一方面还具有一定的血管活性。临床观察发现ＰＤＧＦ在动脉粥样硬化、肿瘤、创伤修复等多种疾病的病程中起重要作用。国外在慢性溃疡等的治疗上应用ＰＤＧＦ取得了很好疗效,在其他疾病的治疗上也有一定进展。     

血小板激活时胞质游离钙浓度与两种颗粒数变化的相关性

用电镜形态计量法检测血小板α颗粒（αＧ）和致密颗粒（ｄＧ）的数密度,用钙荧光指示剂Ｆｕｒａ２检测血小板胞质游离Ｃａ＾２＋浓度（「Ｃａ＾２＋」ｉ）,观察到在钙离子导体Ａ２３１８７作用下,血小板「Ｃａ＾２＋」ｉ明显升高。凝血酶与ＡＤＰ也都分别引起「Ｃａ＾２＋」ｉ升高,且有浓度依赖性,选用三种激动剂的不同量以反映血小板不同程度激活时,测定「Ｃａ＾２＋」与颗粒数密度,分析两者间的相关性,发现αＧ和ｄＧ的数     

PDGF-BB多肽刺激肺动脉平滑肌细胞PDGFmRNA表达

应用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ）标记的血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）Ａ和ＰＤＧＦＢ链ｃＤＮＡ探针,原位检测了ＰＤＧＦＢＢ多肽对单层培养的肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ基因表达的影响。结果表明,无血清培养的肺动脉平滑肌细胞内ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ阳性表达颗粒稀少,ＰＤＧＦＢＢ多肽培养的肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ阳性表达颗粒增多,较密集的分布于整个细胞内。全自动图像分析结果显示,ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达,ＰＤＧＦＢＢ培养组分别为无血清培养组的１７４倍和１７倍,差异显著（Ｐ＜００１）。本研究结果提示,ＰＤＧＦＢＢ多肽能刺激肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦｍＲＮＡ表达,促进其分泌,在慢性低氧性肺动脉高压血管平滑肌细胞增殖中具有重要作用     

槲皮素对培养内皮细胞释放前列环素的影响

应用放射免疫分析方法,研究了槲皮专对体外培养的人脐静脉内皮细胞释放前列环素的影响。实验表明：活化血小板与内皮细胞共同孵育１０,３０和１２０ｍｉｎ后,内皮细胞条件培养液中６一酮一ＰＧＦ１ｍ量显著增加（ｐ＜０．０ｌ）。槲皮素１,５和２０ＩＬｌｎｏｌ。－１与内皮细胞预孵１０ｍｉｎ,可抑制活化血小板引起的内皮细胞６一酮一ＰＧＦ１ｍ的大量释放。对于正常的内皮细胞,树皮素则增加６一酮一ＰＧＦ１ａ的基础释放量。     

PDGF在大鼠断层供皮区创面愈合过程中表达变化的研究

实验研究已经证明Ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＰＤＧＦ）能够促进各种类型的伤口愈合,然而在伤口愈合过程中内源性ＰＤＧＦ表达变化的研究却少有报道,为探讨ＰＤＧＦ对伤口愈合的影响,我们应用原位杂交、斑点杂交技术观察了内源性ＰＤＧＦ在大鼠创面愈合过程中的表达变化,结果发现：在创面愈合过程中,肉芽组织中的成纤维细胞,毛细血管内皮细胞及创缘真皮内的毛囊上皮细胞均能表达ＰＤＧＦ－ＢＢ基因,在伤后６天,组织修复的高峰期,ＰＤＧＦ－ＢＢ基因表达达到最强,伤后１２天,伤口完全上皮化,ＰＤＧＦ的基因表达也恢复正常,说明ＰＤＧＦ的基因表达和伤口愈合时间有密切的关系。提示ＰＤＧＦ在创面愈合过程中可能起着重要的调控作用。     

PKC、PKA和TPK在血小板激活中的作用

利用~（３２）Ｐ－ＮａＨ_２ＰＯ_４标记猪血小板,然后以ＰＭＡ、凝血酶、ＰＧＥ_１、腺苷等处理,结果表明,随着ＰＭＡ激活ＰＫＣ,血小板发生聚集。３５μｍｏｌ／ＬＰＧＥ_１或１ｍｍｏｌ／ＬｄｂｃＡＭＰ不能抑制５０ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的血小板聚集,腺苷却能抑制ＰＭＡ诱导的血小板聚集（ＥＣ_（５０）＝０．１ｍｍｏｌ／Ｌ）,ｄｂ－ｃＡＭＰ、腺苷都不能抑制１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的４０ｋＤ蛋白磷酸化。ＰＫＡ激活不能抑制ＰＭＡ激活的ＰＫＣ。在ＰＭＡ、凝血酶激活的血小板中,ＰＫＣ、ＴＰＫ都发生激活,４０ｋＤ底物既是ＰＫＣ的底物又是ＴＰＫ的底物,ＰＫＣ和ＴＰＫ在血小板聚集中起着重要的调节作用。     

与磷脂酰甘油有关的植物抗冷机理研究进展

磷脂酰甘油是类囊体膜脂中较饱和、相变温度较高的类脂,冷敏感植物中含多较多饱和ＰＧ。捕光叶绿素蛋白复合体与之共阶连接,它的相变与光合冷敏性有关。３－磷磷甘油转酰酶的酰基选择性决定了ＰＧ的饱和度,该基因的克隆与转化的实验结果证实ＰＧ相变与植物光合冷害有关系。     

血小板膜P2Y12受体基因T744C多态性对外伤性脑梗死(PTCI)患者血小板聚合率及疗效的影响

目的:外伤性脑梗死(posttraumatic cerebral infarction,PTCI)是颅脑损伤的常见并发症之一,P2Y12受体介导血小板聚集是血栓形成的重要通路,与血小板聚集形成密切相关。本研究探讨外伤性脑梗死发生发展与血小板膜P2Y12受体基因T744C基因多态性的关系。方法:用聚合酶链反应(PCR)和限制性酶切片段长度多态性(RFLP)技术对186例外伤性脑梗死患者P2Y12受体基因T744C多态性进行分析。分别在治疗前和治疗后对所有颅脑外伤患者的伤情GCS评分,并按基因型分组对照分析结果。结果:血小板膜T744C血小板膜T744C基因型基因频率分别为TT基因型59.14%、TC型32.26%、CC型8.60%,T等位基因75.27%、C等位基因24.73%;其中TT基因型对奥扎格雷反应较敏感,GCS评分预后好;而CC型对奥扎格雷反应性低,预后差。结论:T744C基因多态性中CC基因型可能导致外伤性脑梗死临床及预后存在明显的个体差异,与其对抗血小板药物抵抗有关。T744C的C等位基因可能是脑梗死的遗传危险因素,开展相关遗传学风险研究,对于进一步缓解脑梗症状、改善预后具有重要意义。     

血小板第四因子保护造血前体细胞及其作用机制的研究

我们曾报道血小板第四因子（ＰＦ４）是巨核细胞形成的有效的抑制因子,它可以保护干细胞免遭５－ＦＵ的毒性作用。本研究中试比较ＰＦ４和ＴＧＦ－β１对人脐带血ＣＤ３４＾＋来源的ＭＫ的作用。ＰＦ４（５ｕｇ／ｍｌ）和ＴＧＦ－β（１ｎｇ／ｍｌ）在半固态凝块培养和悬浮培养中明显抑制人脐带血ＣＤ３４＾＋来源的ＭＫ的生长。用ＰＦ４处理的ＣＤ３４＾＋细胞在撒去ＰＥ４后仍能再生成集落,说明ＰＦ４的抑制作用的可逆性的。相反     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中血小板源性生长因子和c－myc基因表达增强

本研究分析了大鼠肺组织中血小板源性生长因子Ａ链、Ｂ链（ＰＤＧＦ－Ａ,ＰＤＧＦ－Ｂ）和ｃ－ｍｙｃ原癌基因ｍＲＮＡ在正常和缺氧时的含量变化。正常肺组织可表达１．７ｋｂ的ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ和３．５ｋｂ的ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ,还有少量２．２ｋｂｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ。在缺氧过程中,ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ迅速增加,至缺氧１４ｄ时,分别为正常的３倍和５倍。而ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ在缺氧７ｄ时增高,而后又略有降低。结果表明：缺氧的肺组织局部生成的ＰＤＧＦ激活了ｃ－ｍｙｃ原癌基因,这对于缺氧性肺动脉高压的形成具有重要作用。     

血小板基础与临床研究进展

血小板有参与止血和形成血栓的重要功能,与出血和血栓性疾病关系密切。本文以血小板表面膜糖蛋白,血小板基因多态性和血小板药物为重点,介绍近年来在基础与临床两方面血小板研究取得的主要进展。     

血小板衍化生长因子（PDGF）与动脉粥样硬化

血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）与动脉粥样硬化李静,陈可冀（中国中医研究院西苑医院心血管病研究室北京１０００９１）动脉内膜平滑肌细胞（ＳＭＣ）增生是动脉粥样硬化（ＡＳ）形态学主要特征之一,在ＡＳ发生发展中起关键作用。而动脉ＳＭＣ的增生受多种细胞与生长因...     

江浙蝗蛇毒酸性磷脂酶A_2抑制血小板作用的机理

江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２（ＡＰＬＡ２）对多种致聚剂引起的血小板聚集具有抑制作用,这种抑制并非是由于ＡＰＬＡ２与血小板膜结合,引起膜流动性降低造成。ＡＰＬＡ２不裂解血小板,电镜观察表明它能抑制血小板内部颗粒的中心化,使之不易被激活。进一步研究显示ＡＰＬＡ２是作用在细胞骨架上,使致聚剂引起的朋动蛋白单体聚合难以进行,ＡＰＬＡ２导致的ｃＡＭＰ浓度的升高正说明了这点。结果提示ＡＰＬＡ２首先作用于血小板细胞膜。引起ｃＡＭＰ浓度升高,影响到细胞骨架的正常功能,进而抑制了血小板的聚集。     

蛋白激酶C在血小反聚集中的作用

利用＾３２Ｐ－ＮａＨ２ＰＯ４标记猪血小板,以蛋白激酶Ｃ的４０ｋＤ底物为蛋白激活的标志。用血小板激动剂在聚集浓度范围内处理血小板,结果表明,除了不能使猪血小板聚集的肾上腺素外,凝血酶等激动剂都使血小板４０ｋＤ底物蛋白磷酸化明显增加,同时３８ｋＤ,２６ｋＤ蛋白质磷酸化也明显增加,且４０ｋＤ底物磷酸化与血小板聚集有平行增加关系。