淡水涡虫染色体的制备方法

本试验证明,采用空气干燥法和压片法,利用淡水涡虫的再生组织制备染色体是可行的,能够得到较好的效果。     

山东昆嵛山细形山地涡虫染色体组型的研究

首次报道了胶东半岛昆嵛山细形山地涡虫Phagocata vivida的形态特征,运用组织再生的方法获得中期分裂相分析了体细胞染色体组型,其2倍体细胞具有36条染色体,核型公式为:2n=2x=10m+26sm,并与产于日本的细形山地涡虫核型进行了比较,发现二者染色体数目相同,但核型参数存在一定差别.     

p53同系物Djp53在涡虫胚基早期发育阶段的组织特异性表达及其在再生中的作用

为了探索东亚三角涡虫Djp53基因在涡虫组织中的表达和功能,利用整体原位杂交、RT-PCR技术,检测了涡虫Djp53基因在组织中的表达分布特点,结果表明,Djp53基因在再生1、3、5天的胚基中具有较强的阳性信号,且3天的表达量最高;而在再生7、10天和成虫的实质组织中表达较弱．RNA干扰后的RT-PCR检测显示,Djp53表达量显著下降,涡虫不能正常再生或出现眼点缺陷．由此推断,东亚三角涡虫Djp53基因在早期胚基发育阶段,通过调节多功能干细胞的迁移和增殖分化影响早期胚基的形成,是涡虫早期胚基发育必不可少的一个基因,并且在涡虫成体和再生后期对多功能干细胞的维持具有重要的作用.     

封面图片说明

正切片荧光原位杂交显示淡水涡虫(planarian)的干细胞及其分化细胞在组织内的定位及分布。涡虫具有无限再生能力,其身体任意片段损伤后都能再生出完整的涡虫。涡虫再生依赖于其体内存在的干细胞类群,图中显示的涡虫干细胞(红色标记,piwi-1)在干细胞水平上具有再生出整个涡虫其他类型体细胞的能力,比如其表皮系统的前体(洋红)及终末分化的表皮细     

涡虫再生的诱发机制

组织再生由复杂的基因网络调控,但基因调控网络的上游诱发机制仍有待进一步明确。解剖结构、基因组以及系统进化位置上的特征使具有全身再生能力的涡虫成为探究再生问题的良好动物模型之一。研究涡虫再生的诱发机制对于解释物种间再生能力的差异,以及促进再生调控具有重要意义。研究发现涡虫受损后,一些再生早期信号的快速响应是下游再生基因调控网络激活及组织正常再生的潜在诱发条件,包括离子通道通过介导离子流引起胞内外离子浓度改变而诱导干细胞增殖;活性氧与细胞外信号调节激酶的相互作用可激活下游调控组织分化的信号通路;ATP可能通过激活嘌呤能受体调控下游再生过程;损伤后产生的大量黏液及一氧化氮可能作为信号因子,通过免疫相关作用引发再生相关信号级联反应;神经和表皮间的相互作用可能诱发芽基生成及后续再生过程。不同因素可能通过参与再生微环境的塑造,协同激活再生基因调控网络,促进涡虫再生。这些潜在的再生激活因素与涡虫强大的再生能力之间的确切关系,以及再生激活因素与诱发伤口愈合因素的异同目前仍不明晰,需要进一步探究。     

PFOS对再生东亚三角涡虫抗氧化酶活性的影响

为了探究全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane sulfonate,PFOS)对再生涡虫抗氧化酶活性的影响,以再生中的涡虫作为实验材料,采用酶活性的测定的方法来探究PFOS对再生中东亚三角涡虫中抗氧化酶活性的影响。结果表明,PFOS刺激涡虫产生应激反应。在再生早期,PFOS胁迫会造成涡虫的氧化损伤和脂质的过氧化,并表现出随着PFOS浓度的升高,涡虫氧化损伤程度加剧的趋势;再生5 d时,机体产生抗氧化的反应来消除体内的氧自由基;在再生的后期,由于涡虫对药物的耐受作用,涡虫的抗氧化反应不显著。     

中国淡水三角涡虫染色体组型的研究

采用压片法对不同产地的淡水三角涡虫染色体进行研究,结果表明,湖北省武汉市珞珈山的淡水三角涡虫体细胞中有16条染色体,为二倍体（2n=2x=16m）;江苏省太湖东山岛的淡水三角涡虫体细胞中有24条染色体,为三倍体（2n=3x=24m）;贵州省遵义市凤凰山的淡水三角涡虫体细胞同时存在24条染色体和16条染色体两种分裂相,为混倍体。本文根据组型分析的结果对上述三个产地淡水三角涡虫的分类和染色体倍性进行了初步研究。另外,本研究中还发现涡虫染色体倍性的变化与涡虫生殖方式的转变以及环境温度有一定的联系。     

环境中无机盐对三角涡虫再生的影响

用解剖镜观察,以眼点的出现为完成再生的标志,在恒温10℃条件下研究了钠、钾、钙离子对日本三角涡虫头部再生速度的影响。结果表明：跟对照组相比,低浓度氯化钠对涡虫再生速度影响不大,高浓度氯化钠引起涡虫解体;氯化钾对再生涡虫的毒性较大;0.1％和0．3％氯化钙可以提高涡虫的再生速度。由于Ca^2＋可以活化蛋白激酶和起始DNA合成,因此,培养液中适宜的Ca^2＋可以提高涡虫再生的速度。     

东亚三角涡虫cDNA文库的构建及EST初步分析

为了快速高效地分离鉴定东亚三角涡虫的发育和再生相关基因,以总RNA为模板,借助CreatorTM SMARTTM cDNA Library Construction Kit和Advantage 2 PCR Kit成功构建了东亚三角涡虫的cDNA文库.经测定,cDNA文库原始库容为1.22×105个独立克隆,重组率超过98 %,插入片段平均大小为900 bp.从文库中随机挑选重组克隆测序,并在NCBI数据库中比对,结果获得208个rRNA基因,148个编码蛋白基因,78个染色体片段基因.该研究为我国涡虫发育和再生的深入研究奠定了坚实的分子基础.     

日本三角涡虫Caspase-7基因的克隆及功能研究

本文以日本三角涡虫Dugesia japonica为研究对象,通过c DNA末端快速扩增技术首次克隆得到了涡虫Caspase-7基因,全长935 bp,编码251个氨基酸,5'-UTR和3'-UTR长度分别为86 bp和93 bp。涡虫Caspase-7具有Caspase家族保守而关键的LSHG与QAC(Q/R) G两大结构域。此外,基于SWISS-MODEL同源建模对涡虫Caspase-7蛋白三维结构的预测和分析,发现其包含2个催化单位,且潜在催化位点由4个表面环构成。进化分析也显示,涡虫Caspase-7基因未与扁形动物门Platyhelminthes物种聚为一支,而与刺胞动物门Cnidaria水螅Hydra vulgaris有较近的亲缘关系,说明Caspase-7基因可能发生了趋同进化。本文通过实时荧光定量PCR检测了Caspase-7基因在涡虫再生不同时间段的表达变化,发现在涡虫切后再生6 h和3 d,Caspase-7基因表达量升高,这2个时间点是涡虫切后凋亡发生的2个高峰期。此外,通过喂食ds RNA干扰涡虫体内Caspase-7基因的表达,结果发现,干扰Caspase-7基因并不影响涡虫的再生,但再生完成后或未切割的成体涡虫在饥饿环境下,受Caspase-7基因干扰,虫体逐渐溶解直至死亡,而Djclg-3及PCNA基因的表达量也显著降低,说明干扰Caspase-7基因表达可能引起涡虫细胞凋亡与增殖减少,涡虫组织重塑失衡,导致虫体溶解并死亡。该结果揭示Caspase-7基因可能在涡虫组织重塑中起关键作用。     

一种新型的基因定点突变方法及其在DdsA突变研究中的应用

为了发展基因突变技术,介绍一种新型的基因定点突变方法.该方法巧妙利用了基因序列中广泛存在的不完整的平端酶切位点.与传统方法相比,可以迅速地在全基因的任何部位替换核苷酸,并可以在突变实验过程中直接将目的基因克隆到T载体上,便于测序及进一步克隆.利用该方法成功地获得了DdsA（decaprenyl diphosphate synthase,十聚异戊二烯焦磷酸合成酶）在4个氨基酸位点上的19个变体酶.这些位点分布在基因的不同区域内.证明这种新方法的高效性.     

丙酮酸乙酯的合成及药理作用研究

丙酮酸乙酯是一种重要的医药中间体,在医药、农药、食品、化妆品等领域有广泛的用途。其合成方法和药理作用一直是研究的热点。近年来愈来愈多的文章报道了丙酮酸乙酯的各种合成及工艺方法,一些新的生理活性也不断见诸于文献。本文从丙酮酸乙酯的合成方法及药理作用两方面进行综述,主要介绍了乳酸乙酯氧化法、有机金属试剂法和酯化法三种合成丙酮酸乙酯的方法,并从工艺角度对各种方法的优缺点进行了分析;阐述了其抗氧化、抗炎、抗肿瘤作用的研究进展,并对丙酮酸乙酯的药物应用前景进行了展望,期望能够为丙酮酸乙酯的进一步成药性研究提供思路和启发。     

Method for determination of uric acid in viscera

To devise an accurate method for the determination of uric acid content in viscera three methods commonly used, i.e., colorimetric, uricase, and precipitation methods, were compared and a new method was eventually developed, combining uricase and precipitation methods.The use of this combined method was particularly effective in the spleen where the uricase method cannot be applied readily and values determined by this method were reliable.     

酵母菌分类学方法研究进展

阐述了经典分类法、化学分类法、分子分类法在酵母菌分类中的应用,并对它们的优缺点作了简要的评价。     

狗獾粪便DNA提取方法的初步探讨

在京杭大运河扬州段堤坝上采集狗獾的新鲜粪便,采用预处理-酚/氯仿抽提法、NaCl改良法、异硫氰酸胍裂解法、淀粉吸附法及QIAamp试剂盒法5种方法对粪便样品中狗獾DNA进行提取,探讨狗獾粪便样品中DNA提取方法和优化条件。结果表明,在5种提取方法中,淀粉吸附法的效果明显优于其它4种方法。采用粪便裂解液快速裂解细胞后,加入淀粉去除其中的大量PCR抑制物,然后用蛋白酶K裂解、酚/氯仿/异戊醇抽提,最后使用UNIQ-10柱纯化粪便DNA,对线粒体控制区和微卫星位点的PCR扩增反应及测序结果证实该方法的可行性。以上结果表明,通过该方法获得的粪便DNA能够用于更深入的分子遗传学等学科的研究。     

MALDI-TOF-MS方法快速鉴定食品中空肠弯曲菌的技术研究

运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术快速鉴定食品中空肠弯曲菌.通过对该方法的样品前处理的选择、稳定性、特异性等方面进行研究,确定了方法...     

一种适用范围广的总RNA提取方法

介绍一种RNA提取方法,该方法以SDS、氯仿和Tris苯酚为主要提取试剂,以LiCl和乙醇为RNA沉淀试剂。分别以柽柳(木本植物)、星星草(草本植物)、天牛（昆虫）、酿酒酵母和白腐菌（真菌）为RNA提取材料,用该方法成功地提取出了它们的总RNA。获得的RNA条带清晰,A₂₆₀/A₂₈₀ 在1.8以上。通过对LiCl和乙醇沉淀RNA的效果分析表明,该方法可在10 min内完全沉淀RNA,同时也可以同时获得纯度较高的DNA。提取的RNA质量可满足cDNA文库构建,基因芯片探针标定和RT-PCR等对RNA质量要求较高的分子生物学操作,说明这是一种应用范围广的RNA提取方法。     

Isolation of compound microsatellite loci in the herbaceous perennial Cirsium purpuratum (Maxim.) Matsum

The herbaceous perennial Cirsium purpuratum is a pioneer on the southeast side of Mount Fuji in Japan. For genetic analysis of reproduction in this species, we developed polymorphic compound microsatellite markers using an adaptor-ligated library method and a simpler method called the intercompound microsatellite method. The latter method was an effective method for developing compound simple sequence repeat markers. In total, 11 polymorphic, codominant microsatellite markers were developed and characterized for this species. These polymorphic markers had three to 20 alleles per locus, a range of observed heterozygosity from 0.25 to 0.90, and were considered effective for genetic analysis.     

三江平原湿地生态脆弱性研究

建立了湿地生态脆弱性评价指标体系和方法,并利用该方法对三江平原湿地进行了评价,依据湿地生态特征和发展演化规律选择评价指标,利用层次分析法（AHP）进行指标权重,用综合指数法评价湿地生态脆弱性程度,实践表明该方法科学,实用,对湿地资源的合理利用与保护具有指导意义,具有推广价值。     

甜菜夜蛾幼虫饲养技术的改进

利用一次性塑料杯饲养甜菜夜蛾SpodopteraexiguaH櫣bner,一次性接入初孵幼虫,直至化蛹不再转移,也不再更换饲料。与已报道的方法相比,该方法操作简单,省工省时,可以提高工作效率。在各项饲养指标中,除平均蛹重略微偏低之外,其余指标均与已报道的数据基本一致。试验证明,采用该方法可以满足室内甜菜夜蛾的继代繁殖和批量饲养。