测定二化螟胆碱酯酶活力的快速方法

<正> 有机磷酸酯和氨基甲酸酯杀虫剂在昆虫体内主要作用于神经系统,抑制胆碱酯酶的活性,导致神经传导的阻抑而引起昆虫中毒死亡。研究其毒理机制,胆碱酯酶活力是重要指标之一。其测定方法发展甚快,Guilbault(1970)已系统介绍。Ellman(1961)提出的     

建立更好的抗毒素

丁酰胆碱酯酶（BChE）的研究已进行了几十年,它可以抵制有机磷（OP）神经毒剂,例如甲硫膦酸丙胺乙酯（VX）、甲氟膦酸异丙酯（沙林）和甲氟磷酸异已酯（索曼）等。虽然人们广泛认为BchE对OP暴露具有很大的潜在保护作用,不论是对军人还是对普通平民;但血浆中的BchE浓度为2mg／L,从而使得大范围的纯化及商业化行不通。     

乐果对四尾栅藻碳、氮、磷营养缺乏的替补效应

有机磷农药属于有机磷化合物的范畴,一般是指磷(膦)酸酯、硫代磷酸酯、磷酰胺酯类有机磷化合物。因其具有杀虫力强、使用范围广、残留期较短等特点,从20世纪80年代开始,有机磷农药很快就取代了有机氯农药成为我国农药市场份额最大,使用最多最广的一代新生     

重视胆碱酯酶复能剂的副作用

胆碱酯酶复能剂(简称复能剂)是治疗有机磷中毒的主要药物之一。除通过化学竞争夺取磷酰化胆碱酯酶分子中的磷酰基，使被有机磷抑制的胆碱酯酶重新恢复活性外，还能直接作用于有机磷，从而缓解有机磷中毒所引起的各种症状。但该药又是一把双刃剑，使用过量或不当，易引起不良反应或出现毒副作用，严重者危及生命。     

用鱼脑胆碱酯酶活力监测有机磷农药对水体的污染

本文报道了6种有机磷农药(马拉硫磷、敌敌畏、对硫磷、敌百虫、乐果和杀螟松),6种非有机磷毒物(西维因、氯化高汞、滴滴涕、六六六、三硝基甲苯和苯酚)分别对我国淡水养殖鲤科鱼类的急性致毒试验,以及不同水体中不同种类和年龄的鱼的脑胆碱酯酶活力的测定,证实有机磷农药可以特异地抑制鱼脑胆碱酯酶活力,其抑制程度与农药浓度相关。在有机磷农药对鱼类慢性致毒试验中发现:水中有机磷农药浓度和水温对鱼脑胆碱酯酶活力的恢复和鱼体残毒释放的速度有影响。六六六和对硫磷联合致毒对鱼脑胆碱酯酶活力的影响也进行了初步探讨。       

用鱼脑胆碱酯酶活力监测有机磷农药对水体的污染

本文报道了6种有机磷农药(马拉硫磷、敌敌畏、对硫磷、敌百虫、乐果和杀螟松),6种非有机磷毒物(西维因、氯化高汞、滴滴涕、六六六、三硝基甲苯和苯酚)分别对我国淡水养殖鲤科鱼类的急性致毒试验,以及不同水体中不同种类和年龄的鱼的脑胆碱酯酶活力的测定,证实有机磷农药可以特异地抑制鱼脑胆碱酯酶活力,其抑制程度与农药浓度相关。在有机磷农药对鱼类慢性致毒试验中发现：水中有机磷农药浓度和水温对鱼脑胆碱酯酶活力的恢复和鱼体残毒释放的速度有影响。六六六和对硫磷联合致毒对鱼脑胆碱酯酶活力的影响也进行了初步探讨。     

浙江产眼镜蛇蛇毒胆碱酯酶的研究 Ⅱ.酶学性质与生物毒性

浙江眼镜蛇蛇毒胆碱酯酶具有乙酰胆碱酯酶的特征,有以下几点事实:1.乙酰胆碱酯是酶的最适底物;2.过量底物抑制酶活性;3.BW_(62)C_(47)、BW_(284)C_(51)是典型的真性酶抑制剂,对蛇毒胆碱酯酶也同样具有抑制作用。眼镜蛇蛇毒胆碱酯酶最适pH为7.5(0.1M磷酸缓冲液)。反应5分钟时的最适温度在38～39℃,K_m值是1.25×10~(-4)M。稀酶溶液不稳定,在0.1%白明胶中可保护酶活力。原蛇毒和纯化后的胆碱酯酶的底物抑制图形和K_m值是类似的,这说明纯化过程中酶没有矫变。蛇毒中的胆碱酯酶被多种有机磷化合物如二异丙基磷酰氟、敌敌畏、对氧磷所抑制。一些氨基甲酸酯和含季铵盐的化合物也表现有抑制。浙江眼镜蛇毒有较大的毒性,小白鼠腹腔注射最小致死剂量是0.88微克/克,用亲和层析分离除去胆碱酯酶后仍保留有蛇毒的毒性,最小致死剂量是0.77微克/克,纯化的胆碱酯酶含7.5微克/克蛋白,动物未致死,说明蛇毒的主要毒性并不是胆碱酯酶。     

浙江产眼镜蛇蛇毒胆碱酯酶的研究——Ⅱ.酶学性质与生物毒性

浙江眼镜蛇蛇毒胆碱酯酶具有乙酰胆碱酯酶的特征,有以下几点事实:1.乙酰胆碱酯是酶的最适底物;2.过量底物抑制酶活性;3.BW_(62)C_(47)、BW_(284)C_(51)是典型的真性酶抑制剂,对蛇毒胆碱酯酶也同样具有抑制作用。眼镜蛇蛇毒胆碱酯酶最适pH 为7.5(0.1M 磷酸缓冲液)。反应5分钟时的最适温度在38～39℃,K_m 值是1.25×10~(-4)M。稀酶溶液不稳定,在0.1%白明胶中可保护酶活力。原蛇毒和纯化后的胆碱酯酶的底物抑制图形和K_m 值是类似的,这说明纯化过程中酶没有矫变。蛇毒中的胆碱酯酶被多种有机磷化合物如二异丙基磷酰氟、敌敌畏、对氧磷所抑制。一些氨基甲酸酯和含季铵盐的化合物也表现有抑制。浙江眼镜蛇毒有较大的毒性,小白鼠腹腔注射最小致死剂量是0.88微克/克,用亲和层析分离除去胆碱酯酶后仍保留有蛇毒的毒性,最小致死剂量是0.77微克/克,纯化的胆碱酯酶含7.5微克/克蛋白,动物未致死,说明蛇毒的主要毒性并不是胆碱酯酶。     

有机磷抑制剂与家蝇头部胆碱酯酶反应的双分子速率常数

作者测定SD-3562 [3-(二甲氧磷酰基)-N,N-二甲基丁烯酰胺的a-异构体]和TEPP(四乙基焦磷酸酯)与家蝇头部胆碱酯酶反应的双分子速率常数,并引用了文献中11种其它有机磷抑制剂的双分子速率常数,说明化学结构与功能之间关系,并进一步推导酶的结构与性质。     

血液灌流抢救140例急性有机磷农药中毒的护理体会

急性有机磷农药中毒后,有机磷与胆碱酯酶结合形成磷酰化胆碱酯酶,丧失水解乙酰胆碱的能力,导致乙酰胆碱在胆碱能神经突触间隙中蓄积,产生有机磷中毒症状。常用的解毒药物如抗胆碱药物阿托品可阻断节后胆碱能神经支配的效应器上的毒蕈碱受体,对抗乙酰胆碱毒蕈样症状,是治疗有机磷中毒的关键药物,但若中毒量过大,超过了阿托品对抗的极限,则难以挽救病人生命。     

环状磷酸酯类杀虫剂

近年来,日本进行了环状磷酸酯类的合成和应用的研究。这类化合物的制备方法、化学性质与生物活性均是初次报导,它们的出现,为有机磷杀虫剂的研究又开拓了一个新的领域。过去人们已经了解,在磷酸3-邻甲苯酯(TOCP)的代谢过程中,某些邻羟苄醇的环状磷酸酯是具有生物活性的代谢物,对血液中的胆碱酯酶有强烈的抑制作用。同时TOCP的活性代谢物和它的衍生物,在动物体中也能增强某些有机磷化物的毒性,主要是阻止脂族酯酶水解毒剂的能力。这些结果引导农药研究工作者进一步了解环状(硫代)     

钩虾胆碱酯酶（ChE）和谷胱甘肽转硫酶（GST）的敏感性和特异性比较研究

研究了有机磷农药甲地基嘧啶流磷,有机氯农药林丹,菊酯类农药氯菊酯,表面活性剂直链苯磺酸钠和重金属Zn对钩虾（Gammarus pulex L.)胆碱酯酶（ChE）和谷胱甘肽转硫酶（GST）活性变化以及毒性影响,结果表明,在暴露24h和48h后,仅有机磷农药甲基嘧硫磷显著抑制胆碱酯的酶的活性,在暴露48h后,有机氯农药林丹和菊酯类农药氯菊酯能显著提高谷胱甘肽转硫酶活性,在暴露24h后,仅梵在导致谷胱甘肽转硫酶明显升高,作为生物标志物,胆碱酯酶比谷胱甘肽转硫酶具有更高的特异性,这两种生物标志物较毒性试验方法具有更高的敏感性。     

两种CNBr活化Sepharose固定化胆碱酯酶方法的研究

 两种ＣＮＢｒ活化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ固定化胆碱酯酶方法的研究郭胜清,赵华月（防化研究院,北京１０２２０５）根据黄姑鱼肌肉胆碱酯（ＥＣ．３．１．１．７ＡＣＨＥ）被有机磷化合物抑制的灵敏度高,来源容易,含量丰富等特点,我们将其做成固定化酶应用于含磷毒物监测...     

抗有机磷三带喙库蚊的酯酶研究

本文主要利用聚丙烯酰胺凝胶电泳及离体酶学技术研究抗有机磷三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus Giles)与各种水解酶系的关系.结果表明:三带喙库蚊抗性品系的羧酸酯酶活性明显高于敏感品系.此外,酯酶同功酶谱显示抗性品系有一染色很深的高活性羧酸酯酶带E₄,而胆碱酸酶活性测定结果表明抗性与敏感品系无明显差异.因此本实验证明,该蚊对有机磷杀虫剂之所以产生高度抗性.其主要原因与羧酸酯酶的活力增加有关.这和我们生物测定结果完全一致.     

丁酰胆碱酯酶结构研究新进展

丁酰胆碱酯酶(butyrylcholinesterase, BChE, EC 3.1.1.8),能与有机磷毒剂或杀虫剂结合,并能水解许多酯类、肽类及酰胺类化合物,对这些化合物的中毒具有防治作用.近年来通过计算机模拟技术及定点突变技术对其结构研究取得了重要进展,对人BChE外周阴离子部位的结构有了新的认识, 并通过氨基酸替换使BChE获得了水解有机磷酸酐的新功能.     

拟除虫菊酯的结构与害虫抗药性的关系

以家蝇Musca domestica vicina L.为试虫,用汰选方法研究了家蝇对六种不同拟除虫菊酯的抗性发展.结果表明,家蝇对不同化学结构和不同光学异构体组分的拟除虫菊酯抗性差别很大.对溴氧菊酯、顺式氯氰菊酯抗性发展很快,氯氰菊酯次之,氰戊菊酯、氰戍菊酯A和氰戊菊酯A_σ抗性发展较慢.用抗溴氰菊酯家蝇品系和点滴法测定了十种拟除虫菊酯和七种有机磷杀虫剂的毒力,讨论了它们之间的交互抗性和结构与抗性的关系.溴氰菊酯(抗性比值24.00)、氯氰嫡酯(抗性比值20.11)、顺式氯氰菊酯(抗性比值38.10)和二氯苯醚菊酯(抗性比值11.04),结构相近的交互抗性比较严重.氰戊菊酯(抗性比值4.64)、氰戊菊酯A(抗性比值5.97)、戊菊酯(抗性比值4.49)和氟氰菊酯(抗性比值4.12)化学结构中醇部分与溴氰菊酯相同、酸部分不同,它们与溴氰菊酯交互抗性水平较低.联苯菊酯(抗性比值1.98)化学结构中酯和醇部分都与溴氰菊酯不同,其交互抗性水平较低,杀螟松等七种有机磷杀虫剂,除敌敌畏与溴氰菊酯有轻微交互坑性外,其它均无交互抗性.     

石首鱼科鱼肌肉胆碱酯酶对有机磷化合物反应灵敏度的研究

胆碱酯酶对有机磷化合物的反应灵敏度高,特异性强,但不同来源的生物材料的胆碱酯酶在灵敏度上差异甚大。鲈形目石首鱼科的小黄鱼、大黄鱼、白姑鱼、鳘和黄姑鱼肌肉胆碱酯酶对沙林和ＶＸ均相当敏感,两种化合物对它们的胆碱酯酶抑制的ＰＩ５０值几乎均在７．０以上。进一步研究,这些胆碱酯酶可能成为分析有磷化合物和农药的有效试剂,对筛选生物活性物质有一定的指导意义。     

家蚕系统表达的重组人丁酰胆碱酯酶的生化性质

研究家蚕系统中高效表达的重组人丁酰胆碱酯酶(rhBChE)的生化性质并与天然人丁酰胆碱酯酶(nhBChE)进行比较。采用丁酰胆碱酯酶活性测定,抑制剂及重活化剂作用,免疫印迹等方法。实验结果表明,rhBChE及nhBChE在底物亲和力、抑制剂敏感性及可重活化性、稳定性、对抗体的反应性等方面均有相似的生化性质,重组人丁酰胆碱酯酶具有天然人丁酰胆碱酯酶的功能。但rhBChE的糖基化修饰程度较低,用于人体时应予考虑     

库蚊羧酸酯酶研究进展

在昆虫对有机磷杀虫剂抗性的研究中 ,羧酸酯酶 (ｃａｒｂｏｘｙｌｅｓｔｅｒａｓｅｓ)的过量产生是库蚊对有机磷杀虫剂 (ＯＰ)产生抗性的主要机制。羧酸酯酶能够与进入昆虫体内的有机磷杀虫剂快速结合 ,将杀虫剂在到达靶标作用位点前阻隔或降解 ,使其无法发挥原有的杀伤效用。1 .羧酸酯酶的命名库蚊中羧酸酯酶的命名一般根据其水解α 和 β 乙酸萘酯的先后顺序和电泳迁移率不同而定 ;在淀粉电泳中 ,当等量α 乙酸萘酯(α ＮＡ)和 β 乙酸萘酯 (β ＮＡ)同时存在时 ,优先水解α ＮＡ呈蓝色的为酯酶Ａ ,优先水解 β ＮＡ呈红色的为酯酶Ｂ[1] …     

有机磷对抗拟除虫菊酯家蝇的毒力

测定敏感、抗溴氰菊酯(Del-R)、抗氯菊酯(2Cl-R)的家蝇品系对有机磷杀虫剂敌敌畏、辛硫磷及马拉硫磷的LD₅₀,α-乙酸萘酯（α-NA）酯酶动力学,酯酶的活性和酯酶的抑制作用。Del-R和2Cl-R的家蝇品系对三种有机磷杀虫剂的抗性倍数为0.966～7.190倍,均为低抗水平。三个家蝇品系的羧酸酯酶活性水平与抑制中浓度存在正相关性,说明羧酸酯酶在抗拟除虫菊酯家蝇对有机磷杀虫剂的抗性中起一定的作用。