焦性磷酸酶的组织化学显示法

甲) 硷性焦性磷酸酶(alkaline pyrophosphase)的显示法: 1) 新鲜组织片固定于冷的5%中性福尔马林液中(此液含有0.9%氯化钠)1小时。 2) 以0.9%氯化钠洗10—20分钟。 3) 冰冻切片(20—35微米),切片径入0.9%氯化钠中或酶作用基液中(Substrate solution)。 4) 切片入酶作用基液内,在37℃下作用3小时,基液之     

神经组织的氨基-银液染色

1) 神经组织以95%乙醇或10%甲醛(普通甲醛,甲醛盐液,中性甲酫)固定;石蜡切片。 2) 取氨基银液150—200毫升于染色皿内。 配法:0.035M的甘氨酸(glycine)或dl-蛋氨酸(dl-methionine)或dl-α-氨基-正-酪酸(dl-α-amino-n-butyricacid)或dl-组氨酸(dl-histidine)(硷性基游离)或dl-α-丙氨酸(dl-α-alaniae)的溶液与0.02M硝酸银溶液等量混合,     

以龙胆紫染硫酸酯多醣类的组织化学意义

甲、方法:1)固定于任何固定液皆可,但以酒精为最合适。石蜡切片,厚3微来。切片脱蜡,降酒精,至蒸馏水。2)以龙胆紫(gentian violet)水溶液1∶250,000或1∶1,280,000染色24小时(即0.25毫升0.1%龙胆紫贮存液加入100毫升蒸馏水内;或以0.1毫升0.1%龙胆紫液加入128毫升蒸馏水内)。3)滤纸吸干切片,然后在亚尼林二甲苯(anilinc-xylene)1∶1或1∶2液内脱色及脱水约5分钟(或稍长),直至紫色不再从切片上脱下为止。以二甲苯洗2—3次,用树胶封片。若染透明质酸(hyaluronic anid)可以甘油封片。     

显示环氧树脂厚切片中多糖,蛋白质和脂类的细胞化学方法

用花生(Arachis hypogaea L.)种子的子叶组织作为模式材料,Epon 812包埋的组织进行厚切片后,按下列三步染色。第一步,PAS 反应:(1)在0.5%高碘酸(0.3%硝酸配制)中10分钟;(2)自来水洗1—2分钟,蒸馏水经过;(3)锡夫试剂中30分钟;(4)偏亚硫酸氢钠溶液三次洗涤,每次2分钟;(5)自来水洗5分钟,蒸馏水经过。第二步,苏丹黑 B 液染色:(1)70%酒精中1—2分钟;(2)新鲜配制的0.3%苏丹黑 B 液(70%酒精配制)中染色,40—60℃,30分钟至1小时;(3)70%酒精中分色1分钟;(4)自来水冼,蒸馏水经过。第三步,考马斯蓝染色:(1)7%醋酸中1—2分钟;(2)1%考马斯蓝(7%醋酸配制)中染色,60℃,20分钟;(3)0.1%醋酸液中分色1分钟;(4)自来水冼5分钟,蒸馏水经过;(5)自然干燥或在40℃电热温箱中烘干。干燥后的切片用甘油胶封固。经这三步染色的切片,细胞内的多糖、脂类和蛋白体同时被显示:淀粉粒及纤维素的细胞壁为樱红色,油滴为黑色,蛋白体为蓝色。制片能长期保存。     

在组织切片中肥大细胞的证明及迅速记数的简单方法

肥大细胞的选择性染色法如下:1)薄片新鲜组织(3—5毫米厚)于下液固定18—24小时,但标本置于此液至少一周尚无显明害处。配法:福尔马林液10毫升;95%酒精90毫升;醋酸钙1克。2)组织以95%酒精洗2次,每次1小时。3)以常法制做石蜡切片(8—12微米厚),粘片,脱蜡,经纯酒精至95%酒精。4)在室温于下液内染1小时。配法:甲苯胺蓝(toluidine blue)0.25克;70%酒精100毫升;浓盐酸     

应用VAN-Clear与低甲醛的病理组织处理改良方法的评价

目的探索一种可靠、稳定、高效、环保、可替代传统病理组织处理与制片方法的改良方法。方法选取10只实验大鼠,每只大鼠选取14种组织,每个组织均匀切成3块,第一块采用4%中性甲醛固定(改良中性甲醛组),第二块采用4%多聚甲醛固定(改良多聚甲醛组),第三块采用4%中性甲醛固定(传统中性甲醛组);两个改良组的组织经相应固定液固定后均用流水及75%酒精祛除组织的固定液,然后进入梯度酒精及VAN-Clear进行脱水透明;传统中性甲醛组在固定后不进行祛除固定液处理而直接入梯度酒精及二甲苯进行脱水透明。对比3组实验的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果和HE染色评分;比较取材室及技术室的甲醛、二甲苯及噪声污染的数据。结果两个改良组与传统组的HE、Masson、PAS及免疫组织化学染色效果及HE染色评分基本一致,3组HE切片的优良率均为100%,优级率均大于85%;甲醛及二甲苯检测结果远远低于我国的最高容许浓度,噪声监测优于中国环境噪声容许的夜间噪声标准。结论采用VAN-Clear以及低甲醛的病理组织处理改良方法可靠、稳定、高效、环保,可替代传统病理组织处理方法。     

一种快速观察四膜虫纤毛的方法

器材与药品离心机,三用水箱,天平,染色缸。席夫试剂(schiff reagent),漂白液,乙醇二甲苯,磷酸缓冲液(PH7.2)。亮绿(溶剂是95％的乙醇) 步骤 1.取四膜虫浮液3—5ml,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 2.用PH7.2磷酸缓冲液洗涤,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 3.涂片。用甲醇固定液固定。 4.水解处理。室温下先在1NHCl中处理1分钟,后移至1NHCl(60℃)中处理7—9分钟(水解     

于铬化及碳蜡包埋后染神经终足及线粒体

(一)固定:猫、兔以加有20—40毫克亚硝酸钠(Sod nitrite)的0.9%氯化钠液50—100毫升灌注(亚硝酸钠作为血管扩张剂):继以含10%蚁醛之0.9%氯化钠液300—500毫升灌注;取其脊髓,继续以上述10%蚁醛液固定,最少两天;置5—10毫米长的脊髓在室温下入下液浸5天。配法:重铬酸钾5克;氟化铬(chromiumfluaride)2克;蒸馏水100毫升,再入5%重铬酸钾于38—40℃下浸2—4星期,此液应换数次。     

胞间连丝玻片的制备

将柿子或黑枣的种子浸于温水中24小时,剥去种皮,将胚乳切成薄切片并于I—KI溶液(I 1克,KI 1.25克,蒸馏水100毫升)中固定3—5分钟,移入5％H_2SO_4溶液中3—5分钟。将切片置载片中央滴一滴结晶紫染色,3分钟后用50％酒精洗1—2     

从小白鼠血液制备染色体的快速方法

每只小白鼠注射(I.P)0.1毫升秋水仙素(0.6毫升/毫升),四小时后杀死。从心脏取血,用肝素抗凝。取10滴左右血液置于一刻度离心管中,管内预先装好3—5毫升0.7％柠檬酸钠,放在37℃下温浴,摇匀后加一滴稳定的玻璃酸酶(150N.F.单位/毫升)。在37℃下温浴20分钟。用温浴的最后五分钟配制3∶1甲醇-醋酸固定液。温浴完毕时加2滴固定剂并温和地摇匀。600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升左右)再加3毫升固定剂,加塞后放置冰箱30分钟。在600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升),再加预冷固定液3毫升,用吸管来回搅匀。离心弃去上清液。再加2毫升冷固定剂,并在冰箱中过夜。第二天离心后弃去上清液,用甲醇洗,吸去甲醇,取一     

用减压法固定处理草履虫

在制作草履虫玻片标本时,在常压下对草履虫进行固定处理,虫体容易收缩变形,效果不佳。采用抽真空减压的方法,对草履虫进行固定处理,可避免上述缺点,效果比较好。制作过程简述如下: 1.离心浓缩把含有草履虫的培养液,用2000—3000转离心5—10分钟,制取出浓缩的草履虫液备用。 2.分装处置取浓缩的草履虫液50—100毫升,倒入大培养皿(直径100—150毫米)内,并将皿放到真空干燥器内。另用指管或安瓶装满40％甲醛或     

制作眼球切片标本方法的改进

我们经过几年的实践,对制作眼球切片标本的方法作了一些改进,其制备过程如下: 取材固定取下狗、猫或兔的眼球并立即置于复方甲醛固定液中。配方是: 丙酮:50毫升,冰醋酸:2毫升,甲醛液:4毫升,蒸馏水:3毫升。固定一周后,将原液倒出一半,再加等量丙酮固定5天,再直接放入95％酒精中。     

ABC法显示5-HT与脑血管双染技术及意义

5-羟色胺(5-HT)是己知最强的颅内血管收缩剂之一,对维持脑血管结构的完整性有十分重的意义.由于研究5-HT 在急性脑缺血病发生、发展过程中的作用,我们对5-HT 与脑血管在同一切片上进行了双标染色,取得了满意结果。1 材料与方法:选用健康 Wistar 大白鼠用过量比妥钠经腹腔麻醉后,结扎一侧颈内动脉30分钟,取脑组织1.5cm×1 cm×0.5cm 用0.5%戊二醛—4%多聚甲醛4℃固定6～9小时,切成40μm 冰冻切片用 DBA液(0.05mol/L pH7.6TBS 100ml、DAB 50mg、30%H_2O?_2 30u])显示血管10～15分钟,然后再用 ABC 法结合改良的 DAB 显色法(0.05mol/LpH 7.6 TBS 10ml,TAB 4mg、8%Nicl 50ul、3%H_2O_2 25ul)     

~(60)Co-γ射线对胜利油菜干种子照射后的影响

甘蓝型胜利油菜(Brasslca napus)干种子以15万伦(A),3万伦(B),6万伦(C),9万伦(D),12万伦(E)的~(60)Co-γ射线进行辐照。剂量率650伦/分,湿度88％。细胞学的研究是用Randolph液固定,从14时起至次日12时止,每2小时固定5mm根尖10—15个,一昼夜间固定12批。石蜡连续切片,片厚10μ,铁矾苏木精染色。     

介绍一种简便快捷的网状纤维染色法

为了提高病理诊断的阳性率 ,提高网状纤维染色质量及速度 ,减少误诊现象。我们经过反复试验多次摸索 ,网状纤维加温染色法获得了满意的效果。本方法从原来的一个小时缩短到三十五分钟至四十分钟之间 ,即稳定又可靠 ,现将此方法介绍如下。材料和方法1.材料　试剂购自上海虹桥试剂研究所 ,氨银液由技术人员自己配制。二氨银液的配制 (10 %硝酸银、3%氢氧化钠、氨水均购自上海虹桥医用试剂研究所 )一滴一滴加氨水至硝酸银液中直到沉淀不能完全溶解为止 ,再加入氢氧化钠。为使沉淀再溶解在溶液内 ,再一滴一滴地加氨水到仅有微量乳白色为止。加玻…     

半月板切片制作方法的改进

半月板主要由纤维软骨构成 ,具有一定的硬度 ,经二甲苯透明和高温石蜡浸蜡后更坚硬易碎 ,不易切出完整的组织切片。国内外虽有此项方法学研究的报导 ,但较复杂 ,我们就此在常规切片制作方法的基础上进行了改进研究。我们经过 4 0例试验 ,摸索出一种简易有效的半月板切片制作方法。1　材料及固定1.1　材料　选用成年大白兔的半月板。1.2　固定　组织块用 10 %中性甲醛或波氏液固定 3天以上。2　组织蜡块的制作2 .1　脱水　 70 %乙醇 6～ 2 4 h　 80 %乙醇 6～ 2 4 h　95%乙醇 1.5h　 10 0 %乙醇 1h。2 .2　氯仿透明 12～ 2 4 h。2 .3　浸蜡　…     

用新鲜材料观察四种基本组织

从刚处死的动物身上取下所需的新鲜材料,观察动物四种基本组织的方法,取材容易,操作简便,不需要特殊药品及仪器,对缺少切片、标本的中学是很有用的。实验动物蟾蜍或蛙、小鼠都可。一般器材显微镜、天秤、载玻片、盖玻片、细口玻璃瓶、解剖器、大头针、青霉素小瓶、软木轮、培养皿(或用药瓶的塑料盖代用)、滤纸、大针、吸管。药品 30—40%氢氧化钠水溶液(以33％最佳),1%硝酸银水溶液,0.9%生理盐水、蒸馏水、紫药水或碘酒(市售)、任格(Ringer)氏液(两栖类生理盐水)。实验方法 1.处死动物:蟾蜍(或蛙)用探针毁脑和脊髓。小鼠用颈椎脱位法。 2.取材和观察上皮组织: 单层扁平细胞及细胞间质的观察取蟾蜍(或蛙、小鼠)肠系膜一块,铺展于带孔的软木轮上,四周用大头针固定。用蒸馏水洗肠系膜2—3次,洗毕,将此软木轮放在培养皿内(或塑料瓶盖),然后在肠系膜上滴入1%硝酸银溶液(液体没过肠系     

混合甲醛固定液固定大肠癌淋巴结标本的最佳免疫组化效果研究

目的:探讨混合甲醛固定液固定大肠癌淋巴结标本的最佳免疫组化效果。方法:采用不同pH值(6.0、7.0、8.0)的混合甲醛固定液对39枚大肠癌淋巴结标本进行不同时间(6 h、6 h-12 h、1 d-7 d)的固定处理。以细胞角蛋白20(CK20)为目标抗原,运用OIympusdp 70图像采集分析仪抽选出混合甲醛固定液最佳免疫组化染色的pH值及固定时间。结果:经pH值为7.0混合甲醛固定液处理后,阳性率为92.31%,高于经pH值为6.0、8.0的混合甲醛固定液处理后的76.92%、74.36%,且经pH值为7.0、8.0处理后的阳性率比较有统计差异(P0.05)。混合甲醛固定液的固定时间在6 h-12 h时的阳性率为94.87%,高于固定时间为6 h、1 d-7 d处理的30.77%、76.92%(P0.05)。结论:对于大肠癌淋巴结标本,以CK20为目标抗原,选择pH值为7.0的混合甲醛固定液固定6 h-12 h能够得到质量较佳的免疫组化染色效果。     

三种不同方法固定的石蜡切片中RNA的分析

研究在 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定的石蜡切片中提取RNA的质量和数量 .取 2 5 0g体重的Wistar大鼠的肾脏 ,分别采用 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定 ,石蜡包埋 ,H E染色 ;采用RNA裂解液、TRIZOL试剂 2种方法提取切片RNA ,逆转录为cDNA ,采用普通PCR和SYBRGREEN 1定量PCR分析RNA质量和数量 .结果表明 ,3种固定方法都可保持组织良好的结构和形态 ;采用 2种提取方法 ,均可经RT PCR扩增出 180bp大鼠磷酸甘油醛脱氢酶 (G3PDH)、5 6 5bpβ肌动蛋白 (β actin)、10 0bp纤溶酶系活化剂抑制物 1(PAI 1) ;但采用RNA裂解液时 ,比TRIZOL试剂可提取更多的RNA .     

不同抗原修复液对免疫组化结果的影响

以热处理来修复抗原是免疫组化(Immuno-histochemistry,IHC)染色中常用的手段,但使用哪种修复液却存在不同的看法,在长期工作实践中,我们发现不同的修复液对有些抗体表达的阳性强度及数量有差异。为此,本实验采用几种不同抗原修复液处理切片进行比较,观察其对IHC染色结果的影响。材料和方法1.材料选择我院外科手术病检乳腺癌标本5例,所有标本均经15%缓冲甲醛液固定,石蜡包埋切片。相同病例的标本切片9张,分别用于三种不同抗原修复液进行ER、PR、BRCA1标记。2.试剂抗体ER、PR、BRCA1及SP试剂盒均为Dako公司产品。3.修复液柠檬酸缓…