地高辛标记寡核苷酸探针检测大鼠胰岛素mRNA

本实验采用地高辛标记前胰岛素寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术,研究了Ｗｉｓｔａｒ大鼠胰腺组织胰岛素基因的表达。实验用Ｗｉｓｔａｒ大鼠５只,胰腺经４％多聚甲醛灌注固定,并在同一固定液中后固定２４ｈ,常规石蜡包埋切片。结果表明,经前胰岛素寡核苷酸探针杂交的胰腺切片中,胰岛Ｂ细胞呈蓝色。杂交反应物位于Ｂ细胞的细胞质和部分核仁中,胞核无色。胰岛其它细胞及胰腺外分泌部腺泡细胞无杂交反应物。对照切片中均无阳性信号出现。结果表明地高辛标记寡核苷酸探针不仅具备非同位素标记探针的优点而且能精确检测特异性ｍＲＮＡ的表达。本研究方法操作便利,可靠精确,重复性好。     

微波Envision免疫组织化学标记的特异性和敏感性研究

本文应用新建立的快速微波－Ｅｎｖｉｓｉｏｎ两步法免疫组织化学技术,分别对福尔马林固定和石蜡包埋切片的良恶性肿瘤进行免疫组织化学标记,观察该法的敏感性和特异性。所有２３种抗原均获得强阳性、低背景。整个程序在１８分钟内完成。结果表明：该法是一种特异性强、敏感性高、背景染色轻、快速和简便的新方法,可用于常规病理诊断。     

改良固定方式以提高淋巴瘤组织的制片质量

目的通过改良两种时段接收淋巴结的固定方式,提高淋巴瘤诊断的制片质量。方法随机收集上午10时左右及下午4时左右接收的132例淋巴结标本,每例各切取2块组织,上午切取的组织随机分为2组,分别行短时间固定处理程序(上午短时间组)和延长固定时间处理程序(上午长时间组)进行固定,下午切取的组织也随机分为2组,也分别行短时间固定处理程序(下午短时间组)和延长固定时间处理程序(下午长时间组)进行固定。回顾性分析并筛选出病理诊断为弥漫大B细胞淋巴瘤的58例,其中包括上午10时左右接收的26例及下午4时左右接收的32例。脱水处理后的4组组织进行包埋后,按常规进行切片、HE染色、CD79a免疫组织化学检测、C-MYC双色分离荧光原位杂交实验(fluorescence in situ hybridization, FISH)。通过比较4组切片出现肉眼可见裂隙、皱折及破碎不全发生率、HE染色质量、免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率,探讨最佳的淋巴结固定方法。结果上午长时间组制片CD79a免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率均不如上午短时间组,切片不完整发生率及HE染色质量与上午短时间组无明显差异;下午短时间组制片切片不完整发生率高且HE染色质量、CD79a免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率明显不如上午短时间组;下午长时间组切片以上指标均与上午短时间组无明显差异。结论上午接收的淋巴结标本应剖开于当天进行隔夜常规脱水,下午接收的淋巴结标本必须剖开后行延长固定程序进行脱水,随后得到的淋巴结组织在切片完整性、HE染色、免疫组织化学检测及FISH检测中能更好地提高淋巴瘤诊断的制片质量。     

microRNA原位杂交技术影响因素的探讨

目的探讨miRNA原位杂交技术的多种影响因素,以完善miRNA原位杂交分析方法。方法选择不同组织来源、保存时间、切片厚度的常规病理组织切片进行U。探针的原位杂交分析;选择不同浓度的蛋白酶K对组织切片与MDA-MB-23l爬片细胞进行U。探针的原位杂交分析;实时定量RT-PCR方法和爬片细胞原位杂交对BT549、T47D细胞株进行miR_375的表达分析。结果不同组织来源、保存时间、切片厚度的石蜡标本均能显示细胞核内的u。表达;组织切片原位杂交实验中,乳腺组织切片20μg／ml的蛋白酶K作用组较其他组的原位杂交效果好;肝脏组织切片200μg／ml的蛋白酶K作用组的显色最好;爬片细胞原位杂交实验中,2μg／ml的蛋白酶K作用组的显色更深;U6与miR-375的原位杂交最适浓度分别为lng／ml和l00ng／ml;实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交结果均显示,BT-549的miR-375表达明显低于T47D。结论miRNA原位杂交操作能在常规固定并长期保存的石蜡组织标本上操作;蛋白酶K与探针的浓度应当依据病理标本类型等多因素预实验摸索;细胞水平的实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交分析结果的比对为确定miRNA探针的特异性提供了帮助。     

微波处理修复抗原后免疫组织化学方法效果的比较研究

冰冻切片经微波处理进行抗原修复后,免疫组织化学方法的敏感性明显提高,显色效果明显增强。提出了冰冻切片在免疫组织化学显色前进行抗原修复的必要性     

一种冰冻切片漂片法免疫反应后再用石蜡切片的方法

本文采用组织冰冻切片５０μｍ进行双重标记的免疫组织化学漂片染色后,将其贴在塑料包埋盒内,脱水,经石蜡包埋切为１－３μｍ的薄片贴于载玻片上,干燥后脱水透明封片,最后进行切片观察,免疫阳性产物被准确定位于所观察的细胞或纤维上,得到满意的结果。为免疫组织化学形态学研究工作提供了新的手段。     

去黑色素法在免疫组织化学中的应用

在有色素的黑色素瘤免疫组织化学鉴别诊断和研究中 ,常遇到的问题是经免疫组织化学 DAB显色后的切片 ,其棕黄色结果是抗原表达还是黑色素的沉集很难区别 ,有必要除去黑色素 ,否则将导致错误的结论。选择什么样的去黑色素方法 ,去色素后对免疫组织化学有无影响以及是否需要进行抗原修复等问题有待摸索 ,为此 ,我们特对 15例有色素和 13例无色素性黑色素瘤进行了实验比较 ,现报道如下 :材料和方法1　材料 :选取我科病理诊断为黑色素瘤的病例 2 8例 ,其中有色素的 15例 ,无色素的 13例 ,常规 10 %福尔马林固定 ,石蜡包埋切片 ,切片厚 4um,共 …     

一种重包埋方法的应用

目前普遍使用的简单定向方法,是先在包埋对使样品定向,以后再将聚合好的包埋块切一张大面积的1—2微米的厚切片,经光学显微镜检查找出所需要的部位,做好标记,然后对照厚切片修整样品再作超薄切片。Grimley 曾报道一种简单的重包埋方法,将包埋的组织块简单地切成一张1—8微米的厚片,贴在盖玻片上染色后,在光学显微镜下找出需要进行电镜观察的部位,标上记     

辣根过氧化物酶标记抗体在免疫定位上的应用 Ⅱ.肝细胞内乙型肝炎表面抗原的电子显微镜定位方法

本文介绍辣根过氧化物酶标记抗体对肝细胞内乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的免疫电镜定位方法。电镜样品制备,可采用酶标免疫显色组织切片的再包埋、或直接利用超薄切片进行酶标免疫显色定位。对实验中应注意的一些问题进行了讨论。在电子显微镜下初步观察了HBsAg 阳性肝细胞中HBsAg 的分布和形态,并发现在光学显微镜下,辣根过氧化物酶标免疫定位HBsAg 完全为阴性部位的肝细胞中,有的细胞胞浆内或扩大的内质网池内,尚可见到少量散在的HBsAg 与酶标抗体的沉积物,提示电镜观察有更好的灵敏性。     

冰冻切片技术在植物显微结构和组织化学中的应用

介绍了冰冻切片法研究植物显微结构和组织化学的一般程序。结果表明,冰冻切片过程简单有效且图版清晰,在1d内可获得高质量图片,解决了利用普通石蜡切片观察植物样品需要进行脱水、浸透、包埋操作且耗时长的问题,在植物显微结构和组织化学研究中具有广阔的应用前景。     

高度木质化材料的冰冻切片技术

高度木质化植物材料的切片难度很大,应用常规切片方法不容易取得高质量的图版。本文介绍的冰冻切片方法,不需要进行长时间的软化处理、以及繁琐的脱水、包埋等过程,切片还进行不同的染色或组织化学测定,是一种快速、简捷和有效的制片方法。 其关键步骤是选好甘油浓度, 冰冻温度和展片步骤。     

介绍一种非放射性标记的原位杂交新方法

在病理诊断和科研工作中,原位杂交是一种常用的检测技术。原位杂交组织化学方法是将核酸分子杂交技术与组织细胞原位显示某种特定ＤＮＡｍＲＮＡ及其产物的定性定量及变化规律相结合的一种新技术。目前,在检测特异ｍＲＮＡ的原位杂交组织细胞化学中多采用同位素标记的探...     

培养细胞免疫组化方法的改进

本介绍了一种培养细胞免疫组织化学的方法,即利用琼脂糖预包埋培养细胞,制成富含细胞的琼脂块,再按一般组织块处理程序制成石蜡切片,进行免疫组织化学检测,获得了较满意的结果,并解决了培养细胞进行免疫组织化学检测的某些问题。     

高度木质化材料的冰冻切片技术

高度木质化植物材料的发片难度大,应用常规切片方法不容易取得高质量的图版。本文介绍了冰切片方法,不需要进行长时间的软化处理、以及繁琐的脱水、包埋等过程,切片还进行不同的染色或组织化学测定,是一种快速、简捷和有效的制片方法。其关键步骤是选好甘油浓度,冰冻温度和展片步骤。     

大鼠胰腺嗜铬颗粒素A分布的免疫组织化学研究

本研究用ＡＢＣ免疫组织化学方法,在Ｂｏｕｉｎ液固定的常规石蜡切片上,观察了啥铬颗粒素Ａ在大鼠胰腺内分泌细胞内的定位和分布,并用相邻切片双标记法,观察了它与胰高血糖素、胰岛素、生长抑素的共存关系。结果发现,大鼠胰腺嗜铬颗粒素Ａ样免疫反应细胞主要分布于胰岛的周边部,胰腺外分泌部的导管和腺泡等处均未见ＣｇＡ祥物质存在。用相邻薄切片免疫显色技术证明,大鼠胰腺中ＣｇＡ样物质与胰高血糖素共存。结果提示,ＣｇＡ可能是胰腺内分泌细胞的一个新的标志物,在胰腺功能调节上发挥着重要作用。     

大鼠脊髓内生长抑素mRNA原位杂交的研究

采用地高辛标记生长抑素反意ＲＮＡ探针经原位杂交和显色后,光学显微镜下观察生长抑素ｍＲＮＡ在大鼠脊髓内的定位。结果显示：脊髓内含有大量呈紫蓝色的生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经细胞,岍性磷酸酶反应产生     

周末组织处理程序的改进

目的探讨周末切取组织处理程序的改进方法。方法收集40例乳腺癌根治术标本,每例连续取3块组织,随机分为日常程序处理组(常规组)、延时程序处理组(延时组)和改进程序处理组(改进组),比较3组切片裂痕或脱片的发生率、HE染色质量、免疫组织化学检测质量、荧光原位杂交实验结果。结果切片裂痕或脱片的发生率在延时组明显高于常规组,改良组与常规组基本相同;改良组与常规组切片核质对比清晰,红蓝适度,延时组稍不清晰,组织结构稍模糊;免疫组织化学检测阳性率在3组基本相同,但常规组和改良组切片染色更强,背景清晰,而延时组切片染色强度较弱、背景欠清晰;FISH结果阳性率在常规组和改良组相同,而延时组显著低于常规组和改良组。结论改进的周末切取组织处理程序固定、透明、浸蜡3个环节与标准程序相同,而将多余的时间分配给脱水环节,组织脱水彻底,有利于后期制片,特别是有利于后期的HE染色、免疫组织化学检测或FISH检测,值得推荐。     

胶体金免疫电子显微技术用于病毒抗原的检测

本文报道了一种改良的胶体金免疫电镜技术:以低温包埋,常规超薄切片代替超薄冰冻切片,成功地显示了细胞内的病毒抗原定位。     

腹水离心石蜡切片联合免疫组化检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌的诊断价值

目的:探讨腹水离心石蜡切片及免疫组织化学在卵巢癌诊断中的价值.方法:对30例腹水标本离心收集细胞沉渣,经自动脱水机脱水后石蜡包埋,切片进行免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67表达.结果:腹水离心石蜡切片细胞形态清晰,着色鲜艳,免疫组织化学阳性定位准确.结论:腹水离心石蜡切片联合免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌具有临床诊断价值.     

用电镜原位杂交技术对玉米中期染色体中RNA的研究

用生物素标记的玉米１８ＳｒＲＮＡ、小麦５ＳｒＲＮＡ 及ｔＲＮＡ 的ｃＤＮＡ 作为探针,在Ｋ４Ｍ 树脂包埋的玉米（Ｚｅａ ｍ ａｙｓ）根尖超薄切片上进行原位杂交。杂交后,用与１０ ｎｍ 金颗粒相连的亲和素对杂交子在电镜下进行检测。结果发现,在玉米中期染色体中存在有１８ＳｒＲＮＡ、５ＳｒＲＮＡ 和ｔＲＮＡ 分子,这些ＲＮＡ分子在染色体中的分布是随机的,即这些ＲＮＡ 分子在染色体的内部和周边均有分布。５ＳｒＲＮＡ 和ｔＲ－ＮＡ 在染色体中和细胞质中的含量基本相等,而１８ＳｒＲＮＡ 在染色体中的含量则明显高于细胞质。这一结果表明染色体中的ＲＮＡ 一部分来自于核仁,而另一部分则来自于核质