HBV套式PCR技术的建立及HBcAb血清的检测

本文实验设计了套式ＰＣＲ引物进行ＨＢＶＤＮＡ诊断。外引物限定ＨＢＶＣ基因的一个６１３ｂｐ片段,内引物限定其内－５０７ｂｐ的片段,扩增后产物被限制性内切酶图谱证明。该技术的特异性强,重复性好,灵敏性达到１－１０ｆｇ,对ＨＢＶ血清可做出明确诊断。应用这项技术,对４２例ＨＢｃＡｂ血清进行了检测,实验表明仅ＨＢｃＡｂ阳性血清同带ＨＢｓＡｇ的ＨＢｃＡｂ阳性血清一样,体内持续进行着大量ＨＢＶＤＡＮ复制。     

丙型肝炎病毒C33_c单克隆抗体的研制和鉴定

用丙型肝炎病毒重组蛋白Ｃ３３_ｃ抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,运用杂交瘤技术成功地建立了７株能稳定分泌抗Ｃ３３_ｃ单克隆抗体的杂交瘤细胞１Ｈ６Ｄ２、２Ｇ１Ａ６、３Ａ４Ａ８、３Ｅ３Ｅ７、４Ｇ１２Ｃ１０、４Ａ１０Ｃ２、５Ｆ４Ｂ６．试验结果表明,７株ＭｃＡｂｓ具有良好的ＨＣＶ特异性,间接ＥＬＩＳＡ法测得小鼠腹水ＭｃＡｂ效价为１：１０￣４－１：４×１０￣４;竞争抑制实验和相加指数测定证实７株ＭｃＡｂｓ识别相关的抗原表位;７株ＭｃＡｂｓ中１株为ＩｇＭ（５Ｆ４Ｂ６）,其它６株为ＩｇＧ（２ａ）。     

反向被动血凝改良一步法检测血清HBsAg

反向被动血凝改良一步法检测血清ＨＢｓＡｇ大连市劳动卫生研究所大连１１６０１１曹桂荣,王月芬反问被动血凝法（ＢＰＨＡ）检测乙型肝炎表面抗原（ＨＢｑＡｇ）,具有灵敏、快速、简便等优点［１］。为了避免非特异性凝集反应,通常采取中和抑制试验作为对照。测定时间...     

乙型肝炎病人尿细胞中HBV的实验研究

本文采用间接免疫荧光法（ＩＦ）,ＲＰＨＡ法,ＥＬＩＳＡ法及斑点杂交技术检测１０例无症状ＨＢ－ｓＡｇ携带者及８９例乙肝病人尿细胞中的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及ＨＢＶＤＮＡ,发现尿细胞中有ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ存在。结果提示：乙肝无症状携带者及乙肝病人尿细胞中具有ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ,因此更进一步证实尿液具有传染性。     

用套多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周务中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％,对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后     

乙型肝炎表面抗原凝难判定血清的研究

用中国药品生物品检定所检定合格的国内外ＨＢｓＡｇＥＩＡ试剂及ＡＢＢＯＴＴ抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃＥＩＡ试剂,对所收集的１３份ＨＢｓＡｇ疑难判定血清进行检测,并用ＰＣＲ方法检测血清中ＨＢＶＤＮＡ,结果显示国内外ＨＢｓＡｇ试剂对部分ＨＢＶＤＮＡ阳性样品的检出率差异较大,提示这些样品可能为Ｓ基因突变株或ＨＢｓＡｇ含量较低,因此,ＨＢｓＡｇＥＩＡ试剂的敏感度仍有待进一步提高,并应进一步研制检测Ｓ基因突变株的     

双功能抗体介导的胃癌杀伤效应

将诱变的αＣＤ３杂交瘤（ＴＫ~－）与ＰＤ４杂交瘤（ＨＧＰＲＴ~－）融合,获得分泌双功能抗体（ＢｓＡｂ）的四体杂交瘤Ｃ３．ＢｓＡｂＣ３可分别与ＣＤ３分子及胃癌相关抗原Ｐ４０反应．体外杀伤试验证实,当效靶比为４０：１,ＢｓＡｂＣ３浓度为１ｍｇ／Ｌ时,其杀伤效应可达７７．６％．该杀伤效应具有明显的特异性,仅Ｐ４０阳性表达的靶细胞可被溶解,体内杀伤试验证实,裸鼠接种胃癌细胞后５ｄ,以ＢｓＡｂＣ３活化的外周血淋巴细胞（ＰＢＬｓ）经局部皮下注射处理,可使移植胃癌完全消退（５／５）．这一明显的治疗作用可能与局部注射途径有关,可供临床应用参考．     

HBsAg携带者重叠感染HCV、HDV的血清学调查

对３６２名无症状高滴度ＨＢｓＡｇ携带者用ＲＩＡ法检测ＨＢｅＡｇ、Ａｎｔｉ－ＨＢｅ、Ａｎｔｉ－ＨＣＶ、Ａｎｔｉ－ＨＤＶ。结果表明,ＨＢｅＡｇ阳性率随ＨＢｓＡｇ滴度的增高而增加,且有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。重叠感染以ＨＢＶ＋ＨＣＶ最高,占２７．６％;其次是ＨＢＶ＋ＨＤＶ,占９．１％;ＨＢＶ＋ＨＣＶ＋ＨＤＶ最少,占６．４％。但是,以上重叠感染率均与ＨＢｓＡｇ滴度及／或ＨＢｅＡｇ阳性率高低无关（Ｐ＞０．０５）。调查显示,无症状ＨＢｓＡｇ携带者中ＨＢＶ＋ＨＣＶ,或ＨＢＶ＋ＨＤＶ,或ＨＢＶ＋ＨＣＶ＋ＨＤＶ的重叠感染均可发生。     

用套式多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％。对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后的初乳进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为３６．４％。结果表明ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率较ＨＢｓＡｇ单阳性的孕妇及其新生儿要高,其初乳中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率也高。还对１０５例注射了乙肝疫苗及高价乙肝特异性免疫球蛋白的６月龄婴儿的外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果有２３例阳性。     

六种固氮蓝藻提取液对玉米的促长作用和提取液成分比较

本文用六种固氮蓝藻的提取液处理玉米种子,同时对其提取液氨基酸组成和碳水化合物与维生素Ｂ１２的含量进行了分析。结果表明固氮鱼腥藻ＨＢ６８６（ＡｎａｂａｅｎａａｚｏｔｉｃａＨＢ６８６）、球孢鱼腥藻ＨＢ１０１７（Ａ．ｓｐｈａｅｒｉｃａＨＢ１０１７）、多变鱼腥藻ＨＢ１０５８（Ａ．ｖａｒｉａｂｉｌｉｓＨＢ１０５８）和小单歧藻ＨＢＴＴ（ＴｏｌｙｐｏｔｈｒｉｘｔｅｎｕｉｓＨＢＴＴ）的提取液中氨基酸、碳水化合物和维生素Ｂ１２的含量高于鱼腥藻ＳＰ．ＨＢ１０４２（Ａｎａｂａｅｎａｓｐ．ＨＢ１０４２）和繁育管链藻ＨＢ３８（ＡｕｌｏｓｉｒａｆｅｒｔｉｌｉｓｓｉｍａＨＢ３８）。同时,促进玉米种子萌发和幼苗生长的效果前四种藻较好,后两种则较差。     

血凝法的生物载体选择与处理

用ＨＢｓＡｇＲＰＨＡ做为模式,选用羊、火鸡、鹅、人Ｏ型血球为载体,醛化后分成致敏和不致敏两种,与异嗜性抗体、中国生物制品药品检定所的参比品等作凝集试验。结果表明,无论特异性还是灵敏度都以人Ｏ型血球为最佳。在此基础上,设计了五种醛化方法处理人Ｏ型血球,共得出１８个醛化样品,经７３种不同的比较试验,筛选出最佳醛化方法为改良丙酮醛──甲醛法,采用该法醛化后血球为褐色,阴性血清和空白对照背景清晰,血球沉集点致密,下滑程度好。致敏抗—ＨＢｓＭｃＡｂ后,使ＨＢｓＡｇ灵敏度达到１～２ｎｇ／ｍｌ。为制备高质量的血凝试剂提供了最佳载体。     

硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸抗HBV细胞的实验研究

针对ＨＢＶ的５个基因位点作为靶序列,设计合成硫代反义寡聚核苷酸（Ｓ－ａｓＯＤＮ）．应用ＥＬＩＳＡ方法、ＭＴＴ比色法、电子显微镜等手段,观察Ｓ－ａｓＯＤＮ对ＨｅｐＧ２２２１５细胞ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ抗原的表达,及细胞的毒性、细胞形态和超微结构的影响．结果显示不同靶位点的Ｓ－ａｓＯＤＮ对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ表达都有显著的抑制作用,且表现为序列特异性、剂量相关性、联合协同性和一定的抗核酸酶性,在浓度为２０μｍｏｌ／Ｌ时,对细胞无明显杀伤作用,对细胞的超微结构无显著的改变．结果提示Ｓ－ａｓＯＤＮ有望发展为抗ＨＢＶ的有效药物,但靶序列的选择、透细胞膜性及联合用药配伍等仍值得进一步研究和解决．     

牛生长激素基因的人工合成,重组克隆及高效表达

本文通过设计选择大肠杆菌高频利用密码子代替天然密码子,人工全合成３２个寡聚核苷酸片段;连接并克隆获得Ａ（２７８ｂｐ）、Ｂ（８８ｂｐ）、Ｃ（２２４ｂｐ）３个较大ＤＮＡ片段;经重组克隆、定位突变等获得阳性克隆;双向ＤＮＡ序列测定分析表明获得了两种人工全合成牛生长激素（ｂＧＨ）编码基因,即编码Ｎ－Ｍｅｔ－Ａｌａ－ｂＧＨ和Ｎ－Ｍｅｔ－Ｐｈｅ－ｂＧＨ的两个基因,而至今尚未见有人工全合成ｂＧＨ基因的报道。构建了在ＰＬｐｒｏｍｏｔｅｒ控制下含上述合成基因的表达质位ｐＢＬｂＧＨＥ７Ａ１和ｐＢＬｂＧＨＥ８,并在大肠杆菌中进行了温敏诱导表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,表达产物占全菌蛋白的３７％以上。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析和纯化产物的Ｎ端氨基酸序列测定结果都表明上述两种人工全合成ｂＧＨ基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达量为现今国际文献报道的高限水平。     

乙型肝炎病人重叠感染丙型肝炎的评价

应用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ法检测５０２例乙肝病人血清,４０１例ＨＢｓＡｇ阳性血清中,有１１４例（２８．４％）抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ双项阳性,２５例（６．２％）ＨＣＶＲＮＡ单项阳性;２１例（５．２％）抗－ＨＣＶ单项阳性。将ＨＢｓＡｇ乙肝病人分成ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阳性组和ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阴性组。前者抗－ＨＣＶ阳性率为１１．６％～２０．５％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为１６．２％～２０．５％。后者抗－ＨＣＶ阳性率为２０．２％～５５．６％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为２３％～６０．３％。结果说明长期携带ＨＢＶ者和慢性乙肝病人均可重叠ＨＣＶ感染。ＨＢＶＤＮＡ阳性组抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性率明显高于ＨＢＶＤＮＡ阳性组     

百-白-破-乙肝四联苗的发展现状

随着ＥＰＩ的推进,越来越多的疾病被列入计划免疫,使用联合疫苗能够减少接种次数,降低交叉感染的机会。加上免疫学和分子生物学技术的突飞猛进,给联合疫苗的发展带来了勃勃生机。ＤＴＰ－ＨＢ（Ａｂｓｏｒｂｅｄｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ－Ｔｅｔａｎｕｓ－Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ－ＨｅｐａｔｉｔｉｓＢＣｏｍｂｉｎｅｄＶａｃｃｉｎｅ;百－白－破－乙肝混合制剂）是很好的联合剂型。现就研制ＤＴＰ－ＨＢ所面临的困难,质量控制问题以及发展现状进行综述。     

乙型肝炎病毒表面抗原aa126 Ile→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

曾在一个儿童患者体内,发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株,其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ,而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｔｈｒ,表明ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ主蛋白ａａ１２０－ａａ１３０区段的二级结构与野生型ａｄｒＨＢＶＨＢｓＡｇ１２６Ｉｌｅ相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响ａ抗原决定簇（ａ１２４－ａａ１４７）的抗原性。为了证实这一点,构建了突变Ｓ基因表达质粒,在ＳＶ４０早期启动子的控制下进行抗原表达。利用ＨＢｓＡｇ９肽（Ｔｈｒ－Ｉｌｅ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｉ单克隆抗体和９肽（Ｔｈｒ－Ｔｈｒ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｔ单克隆抗体进行放射免疫测定,结果表明,这种Ｓｅｒ１２６突变蛋白对抗ｉ单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱,对抗ｔ单克隆抗体的反应性则与ＨＢｓＡｇ１２６Ｔｈｒ接近。但用三种抗－ａ单克隆抗体的检测结果揭示,突变蛋白ＨＢｓＡｇ１２６     

乙型肝炎病毒表面抗原aa126Il3→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

曾在一个儿童患体内,发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株,其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ,而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｔｈｒ,表明ＨＢＳａＧ１２６Ｓｅｒ是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ主蛋白ａａ１２０－ａａ１３０区段的二级结构与野生型ａｄｒ ＨＢ     

影响干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效因素分析

为了解重组干扰素α２ｂ治疗慢性乙型肝炎疗效的影响因素,对住院治疗的１０８例慢性乙型肝炎进行研究。治疗前所有病例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ均阳性,ＡＬＴ均大于正常值３倍。结果发现,总有效率女性高于男性（Ｐ＜００５）;病程短于３年者明显优于长于３年者（Ｐ＜００１）;ＣＡＨ明显高于ＣＰＨ（Ｐ＜００１）。９例治疗无效者,２例检出前Ｃ区变异;１例野生株和变异株混合感染者疗程结束后表现为无效。４７例治疗无效者（包括部分复发者）,检出干扰素中和抗体２例;结合抗体６例。治疗期间有类流感症状者显效率明显高于无反应者（Ｐ＜００１）;总有效率高于无反应者（Ｐ＜００５）。治疗中ＡＬＴ升高大于基值２倍以上者疗效更好（Ｐ＜００１）。结果表明,干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效的影响因素较多。     

乙型肝炎导向干扰素抗乙型肝炎病毒作用的体外实验研究

为提高ＩＦＮ抗ＨＢＶ疗效,实现感染细胞水平上的抗病毒性肝炎导向治疗,我们将抗ＨＢｓＡｇ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的Ｆ（ａｂ＇）２片段与ＩＦＮ文联,所得交联体称为乙型肝炎导向干扰素（Ｔ－ＩＦＮ）。应用ＨＢＶＤＮＡ转染细胞系（２,２,１５细胞）作模型,对Ｔ－ＩＦＮ进行了体外抗ＨＢＶ实验：通过检测细胞上清液ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ水平的变化,结合细胞存活率来评价其抗ＨＢＶ活性,并与游离ＩＦＮ和ＭｃＡｂ以及二者的混合法（Ｍｉｘ）进行比较。结果显示,经１２天作用,Ｔ－ＩＦＮ在细胞存活率、对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ抑制率及时ＨＢＶＤＮＡ抑制作用等方面均优于游离崳桑疲巍ⅲ停悖粒夂停停椋裕椋疲魏鲜逝ǘ任保担埃啊常埃埃埃桑眨恚欤谡庖慌ǘ认拢赴婊盥省荩罚梗叮ィ龋拢螅粒缫种坡剩担罚场叮罚叮ィ龋拢澹粒缫种坡剩矗埃薄担保玻ィ危模猎冢保妫缢揭韵拢欢嘤εǘ鹊模桑疲巍ⅲ停悖粒夂停停椋模危猎冢欤穑缢揭陨希龋拢螅粒绾停龋拢澹粒缫种坡示陀冢裕桑疲巍Ｌ崾荆砸唬桑疲慰赡茉诓《荆危模粮粗啤⒉《镜鞍缀铣杀泶锏榷嘞罨方谏戏⒒右种谱饔谩＃裕桑疲慰梗龋幔中Ч庞冢桑疲巍     

抗丙肝病毒核心抗原单克隆抗体的研制与初步鉴定

用基因工程重组技术获得的丙肝病毒（ＨＣＶ）核心蛋白抗原与鼠血清白蛋白交联后免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术成功地建立了４株稳定分泌抗核心抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞,试验结果表明,该４株ＭｃＡｂｓ与免疫抗原及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶ ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５无反应,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。４株ＭｃＡｂｓ中３株为ＩｇＧ２