SRB法和MTT法抗肿瘤药物筛选结果相关性研究

为了探索抗肿瘤药物体外筛选中磺酰罗丹明B（SRB）法和四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法实验结果的相互验证作用,作者以PC-3、BGC-823、Bcap-37细胞系为研究对象,利用SRB法和MTT比色法对供试化合物行体外抑制活性考察,并用SPSS12．0对两种筛选方法得到的实验结果进行差异性分析。结果表明,SRB法和MTT比色法实验结果相关性好,可以相互验证实验结果的准确性和可靠性。     

共附生微生物抗肿瘤活性菌的筛选与鉴定

对分离自海绵和植物组织的一些微生物进行抗肿瘤活性菌株的筛选。采用SRB法对252株微生物菌株的发酵提取物进行了抗肿瘤活性的筛选。结果显示,28%的测试菌株在提取物浓度为100μg/mL时对HeLa细胞的抑制率在50%以上,经复筛确定有6株细菌和1株真菌具有良好且稳定的抗肿瘤活性,其提取物在100μg/mL时对HeLa细胞的抑制率均在80%以上,其中活性最高的两株菌HMJ-390和YX-5对HeLa细胞的IC50分别为40.56μg/mL和5.33μg/mL。经16S rDNA和ITS rDNA序列分析,鉴定HMJ-390为Cellulophagasp.,YX-5为Aspergillussp.。结果表明,作为抗肿瘤药物的潜在来源共附生微生物值得关注。     

七种中草药提取物抗肿瘤活性部位的筛选研究初报

选取叶下珠、珠子草、千里光、鸦胆子、使君子、冬青和猫爪藤等7种中草药进行提取和初步分离,筛选出有抗肿瘤效果的活性部位,并对其进行初步分析。采用MTT法,以7种中草药醇提物的不同分离部位分别对人肝癌、胃癌、卵巢癌等肿瘤细胞株进行体外增殖抑制作用研究,并以人正常肝细胞株为模型对照跟踪筛选活性部位。结果表明,从7种中草药醇提物中,均获得对肿瘤细胞株具有体外增殖抑制作用的化学分离部位,其中叶下珠和珠子草的乙酸乙酯层和正丁醇层的活性最显著,千里光的乙酸乙酯层、鸦胆子的正丁醇层、使君子和冬青的氯仿层活性次之,猫爪藤氯仿层和冬青的乙酸乙酯层活性较差,其他部位无活性。     

MTT比色法抗肿瘤药物筛选实验条件和数据优化探索

MTT比色法是一种重要的体外抗肿瘤药物筛选方法.以PC-3细胞系为研究对象,对影响MTT比色法抗肿瘤药物筛选实验的主要因素一细胞密度、实验操作环节、OD值选取、以及数据的优化处理进行实验探讨.结果表明,当检测化合物6 h～72 h的抑制活性时,种细胞密度2 000个/孔为宜.同时,采用本文所提的实验条件和数据处理办法,可以实现实验结果的准确可靠,3次测试偏差不超过10%.     

基于NF-κB荧光蛋白报告基因抗肿瘤药物筛选平台的建立

采用基因工程技术构建绿色荧光蛋白（GFP）报告基因质粒,有利于活细胞成像、蛋白质印迹（WB）、细胞流式分析及活细胞示踪等,从而对抗肿瘤药物进行筛选。利用聚合酶链反应（PCR）扩增NF-κB基因的启动子序列以及GFP基因片段,将其克隆到pGL6-Enhancer载体中,通过菌落PCR检测、酶切鉴定和测序证明了质粒构建成功。然后,将构建的质粒转染到HEK-293T细胞中,根据活细胞荧光成像、WB及流式细胞分析验证,构建的报告基因质粒在细胞内可正常表达。选择抗肿瘤药物雷帕霉素、紫杉醇、吉西他滨,以及本实验室正在研究开发的多肽类抗肿瘤药物M1-20、M1-21验证报告基因体系试验,发现构建的报告基因质粒可以响应药物对细胞的影响。该药物筛选平台的建立为研究抗肿瘤药物对供试细胞的影响提供了良好的试验技术体系,同时,也为构建活细胞示踪体系提供了材料。     

抗肿瘤药物市场概述

无论在发达国家还是在发展中国家,癌症都是死亡率最高的疾病,并且其死亡率和发病率仍不断增高,因此抗肿瘤药物市场的潜力巨大。1997年至2015年,FDA共批准128个抗肿瘤药物,全球抗肿瘤药物市场规模超过1000亿美元,靶向药物占比达到62%,已经成为抗肿瘤新药的主流。全球抗肿瘤药物市场集中度极高,罗氏是其中的领导者,各大药企都对抗肿瘤药物怀有极大的开发热情。国内抗肿瘤药物以传统药物为主,靶向药物市场份额正在迅速提升,同时自主研发型新药也在逐渐增多。2015年国内抗肿瘤药物市场规模达到957.83亿元,未来还将进一扩大。     

利用稻瘟霉模型初级筛选抗肿瘤物质研究进展

稻瘟霉(Pyricularia oryzae)活性物质初筛模型是近年来筛选抗肿瘤活性物质的重要模型之一,具有操作便捷、安全经济等优点。为更好地利用该模型,对其原理、方法、应用现状和存在问题进行了综述,同时介绍了利用其他植物病原真菌作为靶标菌建立抗癌药物初筛模型的应用前景,以期对更有效地获得抗肿瘤活性物质起到一定的积极作用。     

抗肿瘤中药中脂肪酸合酶抑制剂的筛选

最新报道脂肪酸合酶(EC.2.3.1.85,Fatty acid synthase,FAS)是治疗癌症和肥胖的双重靶部位。本文对24种抗肿瘤中药进行抑制FAS活性研究。实验结果表明,这24种中药中有17种具有抑制FAS生物活性(抑制率I40%),其中9种中药抑制FAS活性较高(抑制率I70%),为寻找无毒、低成本的FAS抑制剂提供依据。     

酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物研究方法进展

酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases,PTKs)在肿瘤细胞的增殖、分化、迁移、侵袭等相关信号通路中起到了关键的调控作用,已经成为肿瘤靶向性治疗的重要靶点.本文对靶向酪氨酸激酶的小分子抑制剂的筛选和评价方法进行综述,以期促进酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物的研究.     

ANTICANCER MEDICINES (DOXORUBICIN AND METHOTREXATE) CONJUGATED WITH MAGNETIC NANOPARTICLES FOR TARGETING DRUG DELIVERY THROUGH IRON

The uptake of iron is increased by cancer cells. Iron magnetic nanoparticles (MNP) can be used as a nanovehicle for immobilization of anticancer medicines and to integrate them at a target site. The anticancer medicines doxorubicin (DOX) and methotrexate (MTX) were immobilized separately and in combination onto MNP by a glutaraldehyde activation method and confirmed by magnetic nanoparticles linked immunosorbent assay (MagLISA) and Fourier-transform infrared (FTIR) spectroscopy. The phenol peaks of DOX and MTX at 2896.6 cm^?1 to 2912.5 cm^?1 in FTIR spectra of immobilized medicines indicated the conjugation. Affinity-purified anti-DOX and anti-MTX antibodies were used to evaluate the coupling of DOX and MTX onto MNP, and the binding was found 34.6% to 37.2% and 51.8% to 54.3% separately, respectively. The immobilization of DOX and MTX in combination onto MNP was 18% and 27%, respectively. HeLa and B cells were cultured with DOX-MNP, MTX-MNP, and DOX-MNP-MTX separately, and MagLISA indicated that the binding of DOX-MNP/MTX-MNP was 41.5% to 45% with HeLa cells and 20% to 26% with B cells. No significant difference was observed in binding of DOX-MNP-MTX with HeLa and B cells. Results also indicated that the release of medicines at pH 5.0 is more (39% to 44%) than at pH 7.4 (3.7% to 10.2%). Sixteen to 22% more killing effect was observed on HeLa cells than on B cells. In immunohistochemical staining, more deposition of brown color on HeLa cells than on B cells may be due to more expression of iron-binding sites on cancer cells. The dual property of MNP can be used for binding of medicines and for targeting drug delivery.     

TELEOGRYLUS EMMA精子体外顶体反应的超微结构比较研究

采用相同种类卵水诱导的方法对直翅目,蟋蟀科,黄脸油葫芦的受精囊精子的顶体反应过程进行系统观察.发现黄脸油葫芦精子顶体反应可划分为3个阶段,第1阶段,精子质膜膨胀、断裂或丢失;第2阶段,顶体复合体的顶体外层与顶体本体外膜发生融合,囊泡化;第3阶段,顶体复合体大部分脱落,只留有短锥状的顶体位于核前端.据观察,蟋蟀精子质膜不参与囊泡形成,此结果与家蝇及哺乳类的猪、牛、绵羊、猕猴精子的顶体反应结果很相似.经过比较发现卵水对受精囊内精子的诱导率明显高于精巢内,据分析,可能与精子的生理成熟有关,即便受精囊内精子比精巢内精子更趋于成熟.与其他学者的实验结果相比,蟋蟀精子顶体反应率与家蝇的相似,但明显低于其他动物.这可能与动物的授精方式有关.     

猫爪草提取物体外抗肿瘤作用的研究

为探讨猫爪草不同提取物对体外培养的肿瘤细胞的作用,采用系统溶剂法提取猫爪草皂苷及多糖,运用MTT和集落形成实验法观察不同浓度的皂苷及多糖对体外培养的肉瘤S180、艾氏腹水瘤EAC及人乳腺癌细胞株MCF-7的影响。结果发现猫爪草皂苷及多糖对三种肿瘤细胞株的生长和集落形成均有不同程度的影响,皂苷给药量与抑瘤率和集落形成明显地呈正相关关系,而多糖有一最佳浓度。     

成年鸡的前,后背阔肌的卫星细胞体外培养下早期发育特征的比较

用酶处理的方法分离出成年鸡前背阔肌(慢肌)和后背阔肌(快肌)中的卫星细胞,在无神经因素影响下分别进行体外培养,每天用相差显微镜观察并比较二者的发育特征。在本实验中不仅观察到一些学者已描述过的卫星细胞的体外发育过程和特征,还发现了快、慢肌的卫星细胞之间在发育上存在的时程差异,即前背阔肌的卫星细胞发育为成肌细胞所需的时间以及成肌细胞融合为肌管所需的时间均比后背阔肌的卫星细胞约少24h。支持了鸟类肌肉的卫星细胞本身带有某种发育倾向的猜想,并把快、慢肌在离体的发育过程中可鉴别出差别的时间从肌管提前到卫星细胞时期。     

IN VITRO FERTILIZATION OF IN VITRO MATURED MINKE WHALE (BALAENOPTERA ACUTOROSTRATA) FOLLICULAR OOCYTES

In vitro fertilization of follicular oocytes harvested from ovaries and matured in vitro was attempted for 55 minke whales ( Balaenoptera acutorostrata ) captured for Japanese research purposes in the Antarctic Ocean during the period from November 1995 to March 1996. In Experiment 1, effects of culture duration (96 h or 120 h) on maturation of follicular oocytes and addition of caffeine (5 mM) and/or heparin (100 pg/ml) on sperm penetration and pro-nuclear formation were investigated. Spermatozoa recovered from the vasa deferentia of four mature males were diluted (5-fold) and frozen at - 80°C. The post-thawed and pooled spermatozoa were used for in vitro insemination. A higher ( P < 0.05) proportion of the oocytes cultured for 120 h (34.2% of 260) progressed beyond the second metaphase stage than of the oocytes cultured for 96 h (26.0% of 262). For the matured oocytes, higher rates of penetration ( P < 0.05) and pronuclear formation ( P < 0.01) were obtained in the oocytes cultured for 120 h (55.1% and 40.4%) than in those cultured for 96 h (32.4 % and 20.6%). Addition of caffeine and heparin did not show a significant effect. In Experiment 2, follicular oocytes matured for 120 h and then inseminated were cultured to examine the subsequent development in two culture systems (with and without co-cultured cumulus cells). Of 448 inseminated oocytes, cleaved embryos (2–16 cells) were observed with (5.8%) and without (4.9%) co-cultured systems. No cleavage was observed in 54 ova without insemination. These results indicate that in vitro fertilization of minke whale in vitro matured follicular oocytes with cryopreserved spermatozoa is possible, yielding cleaved embryos.     

马铃薯试管诱导结薯方法的改进

本研究对马铃薯试管诱导结薯的方法作了一些改进。用带有4—5个节的马铃薯无病毒茎段,在加有生长因子的MS液体培养基中作浅层静置培养,2—3周后,可长成3~2—4~2个枝条。此时,将诱导结薯的液体培养基加入同一容器内,培养1—3周后,小植株的多数茎节上开始出现气生小块茎。再经过3—4周的培养,小块茎成熟并具有发芽能力,可以收获作为无病毒超级原种加以应用。这种改进了的方法可以大大缩短无病毒小薯的生产周期,节约成本、提高产量。讨论了激素等培养条件对小块茎形成的影响和将试管诱导结薯技术应用于马铃薯无病毒种薯生产的前景。     

波形纤维蛋白与Nup 180的体外结合

本文作者采用大肠杆菌表达的波形纤维蛋白与大鼠肝细胞分离的核孔蛋白进行体外结合实验,以分析波形纤维与核孔的关系。实验结果显示,细菌表达的波形纤维蛋白在体外能组装成10 nm纤维,在体外反应体系中加入核孔蛋白后,室温反应30 min,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹法检测,结果表明180 kD核孔蛋白(Nup 180)与波形纤维蛋白有亲和反应。结合免疫胶体金标记与电镜负染色方法显示,核孔蛋白结合于体外装配的10 nm波形纤维上。本文结果提示在细胞内波形纤维可能通过与Nup 180的结合锚定于核孔复合体上。     

球花石楠离体培养及快速繁殖研究

取球花石楠的不同器官、不同部位的材料进行离体培养及快速繁殖研究。试验结果表明,根部萌蘖条和盆栽大苗的嫩茎为首选外植体,在MS+6-BA 2 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1的培养基上有较高的腋芽萌发率,增殖阶段以MS+6-BA 4 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1培养基上的小苗最多,生长健壮,生根可在1/2 MS+IBA 0.25 mg·L^-1的培养基上进行。分析了生根较低的原因并提出改进措施。