甲型流感病毒WS株在鸡胚肾与鸡胚肌皮混合单层细胞上形成蚀斑的研究

甲型流感病毒WS株在鸡胚肾与鸡胚肌皮混合单层细胞上的蚀斑形成单位此在鸡胚肌庞细胞上者高100倍。提高琼脂培养基中的葡萄糖含量大大有利于蚀斑的形成。使用小经任何处理的国产琼脂所得的蚀斑形成单位值此用英国琼脂者高,而且蚀斑大而明显。关于病毒与细胞接触吸附的时间、琼脂的浓度等有关条件龃进行了研究。在最适条件下,Pfu值约为EID50值的1 0％。本文可为流感病毒的遗传变异、药物筛选等方面工作提供一个简易可行、滴度较高的蚀斑方法。     

甲型流感病毒自然温度敏感株的宿主依赖性

用鸡胚细胞(CEC)和Madin-Darby Canine Kidney(MDCK)两个宿主细胞系统,检查甲型流感病毒各亚型不同时期流行株的温度敏感性状(ts),发现自然界存在许多宿主依赖的温度敏感性突变株(hd-ts)。它们在CEC上是ts,在MDCK上却是ts~ 。检出的hd-ts株中有些曾经过人体接种观察证明为减毒株。这表明在CEC中鉴定的ts表型与对人减毒性状密切相关。     

鸡胚壳外培养的探讨

鸡胚是胚胎学、发育生物学教学及科研的良好材料.鸡的种蛋作为生物学的实验材料,其历史已经相当悠久.鸡的种蛋取材方便,不受季节限制,只要有适当的温度(37.5°-38℃)、湿度(55-70%)、空气就能孵化,继续它的胚胎发育,供教学、科研使用.以前用鸡胚做研究,一般是鸡胚发育不脱离蛋壳,这就需要在蛋壳上开天窗进行手术和观察,不太方便,观察也有局限.如果能在壳外培养,那将提供很大方便.这     

鸡胚细胞的微载体培养

国外有许多利用微载体培养各种贴壁细胞的报道。鸡胚细胞(CEF cells)是最早用于体外培养的细胞之一,用它可生产多种鸡的疫苗,如法氏囊、新城疫、马立克疫苗等。我国生产上多采用滚瓶法,近年来才有微载体法培养的探索。要进行细胞的大规模培养,转瓶是有效的模拟,可以模拟生物反应器培养的一些条件,为放大作准备。本文模拟生物反应器的培养条件,用500ml转瓶（装液200ml）研究了鸡胚细胞在徽栽体上巾壁和生长的规律,为放大培养作了准备。     

流行性感冒病毒鸡胚高产株的遗传特性分析

流行性感冒（流感）病毒的基因组由分节段的单股负链RNA组成,其中A、B型流感病毒含8个基因节段［1］。它的第4和第6节段分别编码病毒的血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）,决定病毒的抗原性,其它6个节段与病毒的生长特性有关［2］。在流感疫苗生产中,为了提高产量,利用高产毒株与流行毒株基因重配获得重组病毒,它含有流行毒株的第4、第6节段和高产毒株的其它6个节段,这样既具有流行毒株的抗原性又具有高产特性,可以用来降低疫苗的生产成本。     

一株达菲耐药的甲型H1N1流感病毒全基因特征分析

目的分析1株甲型H1N1流感达菲耐药病毒株的全基因特征,为指导流感临床治疗与防控提供依据。方法采用鸡胚进行病毒分离,提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增其全基因组8个基因片段,测定核苷酸序列,利用生物信息软件拼接全基因组序列,绘制基因进化树并分析重要基因位点变异情况。结果 A/Fuzhou/SWL11609/2013(H1N1)流感毒株的8个节段基因均处于2013-2014年度进化簇中,且与A/California/07/2009(H1N1)疫苗株高度同源,8个基因同源性均在97.4%以上;其HA和NA基因与A/Hubei-Wuchang/SWL1322/2013(H1N1)达菲耐药株同源性最高,分别为100.0%和99.6%;初步判断该毒株未发生重配现象,其重要致病性基因位点未发生变异;NA基因中具有H275Y典型达菲耐药位点特征,缺失一个糖基化位点(N386K),降低了基因结构的稳定性,同时在V241I和N369K的作用下降低了病毒的适应性。结论本次研究的甲型H1N1流感达菲耐药病毒株表现为低致病性流感病毒特征,但具备较好的人传人能力,需进一步加强监测,谨防耐药株的广泛流行。     

鸡胚培养与致畸实验在胚胎学教学中的应用

鸡属于卵生动物，整个胚胎发育过程是在一个受精的鸡卵中完成。用鸡胚做实验材料有活体下容易观察、重复性好、经济、卫生等优点，适合学生掌握鸡胚的早期发育和致畸实验。将新鲜受精种蛋按计划好的不同时期放入38℃恒温培养箱中，箱内置一杯水（2～3日更换1次），以维持60-70％的相对湿度，每日开箱通气4次以上保持箱内的氧含量。     

甲型流感病毒在我国动物中分布的初步调查

通过血清学调查证实,人的绝大多数甲型流感病毒能自然感染家离、家畜。通过病原学调查证实了甲型流感病毒在我国动物中分布面广,品种复杂。这些进一步支持人甲型流感病毒新亚型可能来源于动物的观点,并可能有助于进一步弄清近三次人的甲型流感病毒新亚型均首先发现于我国及其附近地区的原因。并进一步证实了甲,与甲。型流感病毒均能由人自然感染猪;首次较确切地在含有H．抗体的猪血清中查到有N。的抗体;在少数鸡血清中再次查到低水平的H．抗体。     

鸡胚壳外培养破壳方法的改进

近年来,鸡胚壳外培养越来越受到重视,因为它能直接观察到胚胎发育的过程,是胚胎学、发育生物学的教学和科研的好材料. 在无壳培养中,常遇到的第一个问题是破壳难,即易使卵黄膜破裂而失败.最早人们使用直接破壳法,成功率低.后来改用挫刀挫壳及胶布粘连、拉开方法,虽说成功率有所提高,但仍不理想,操作也不便.我们在多次试验的     

甲型肝炎病毒在人胚肺二倍体细胞核酸增殖培养模型的建立

目的 采用人胚肺二倍体细胞(2BS细胞)培养,结合实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测,开展甲型肝炎病毒(HAV)在2BS细胞核酸增殖培养模型的建立研究.方法 将不同浓度的HAV活病毒感染2BS细胞,分别于感染后0、8、10、14、20 d收获HAV感染的细胞,应用已建立的HAV核酸检测和抗原检测方法分别检测...     

小麦幼胚培养高效成株系统的建立

研究探讨了不同的基因型、幼胚取材时期、4℃处理时间、盾片接种方式、分化及生根条件等对小麦幼胚培养再生成株特性的影响,并在此基础上建立了一套高效、可靠、重复性好的小麦组培再生系统。优化条件下,该系统从幼胚诱导致密愈伤组织的频率为89％,致密愈伤组织的分化频率诱导2周时为95％,培养近3个月时仍可达50％以上。此外还发现部分叶状结构当转至新鲜的分化培养基上时能够进一步发育成为芽苗。分化的芽苗在生根培养基上大多生成丛生苗。从基部切开后,每棵芽苗／分蘖均可独立成株。组培苗均可正常地开花结实。     

小麦幼胚培养高效成株系统的建立

研究探讨了不同的基因型、幼胚取材时期、４℃处理时间、盾片接种方式、分化及生根条件等对小麦幼胚培养再生成株特性的影响,并在此基础上建立了一套高效、可靠、重复性好的小麦组培再生系统。优化条件下,该系统从幼胚诱导致密俞伤组织的频率为８９％,致密愈伤组织的分化频率诱导２周时为９５％,培养近３个月时仍可达５０％以上。此外还发现部分叶状结构当转至新鲜的分化培养基上时能够进一步发育成为芽苗。分化的芽苗在生根培养     

鸡胚胎生殖细胞在鼠胚成纤维细胞饲养层上的生长

目的:探讨以鼠胚成纤维细胞为饲养层分离、培养鸡胚胎生殖细胞的方法和条件。方法:分离、培养12.5～13.5d鼠胚成纤维细胞。分离孵化5.5d鸡胚原始生殖细胞,原代培养时不使用饲养层,与性腺基质细胞共培养;继代培养时将其置于鼠胚成纤维细胞饲养层上,在含生长因子、分化抑制因子的培养体系中培养胚胎生殖细胞。结果:鼠胚成纤维细胞可连续传代18代以上(4个月),3～15代细胞可以用作饲养层细胞。分离的鸡胚胎生殖细胞在饲养层上可增殖形成典型胚胎生殖细胞集落,并能连续在体外培养超过9代。集落未分化标志高碘酸希夫反应(PAS)呈强阳性,体外分化实验表明胚胎生殖细胞具有多能性。结论:用鼠胚成纤维细胞作为饲养层能获得可连续增殖的胚胎生殖细胞。     

几株甲型流感病毒神经氨酸酶(NA)理化特性和抗原性的比较

以两株甲2型流感病毒株贵57-1、甘66-3(H2N2)和两株甲3型流感病毒株京科68-1、穗防74-315(H3N2)为代表株,测定温度、pH及金属离子对感染的鸡胚尿囊液病毒神经氨酸酶(NA)活性的影响,并用NA交互抑制试验检查贵57-1NA与穗防74-135NA之间的N抗原变异情况。 结果表明,在50℃加热30分钟4株病毒的NA活性仅下降原活性的10％以下;但56°C30分钟加热,两株甲2型病毒(H2N2)的NA活性明显下降,仅为原活性的12％以下;而两株甲3型(H3N2)则分别为原活性的34％及37％。根据Paniker和Tams等的报道,N2的活性对45℃及56℃加温比N1更稳定。似乎表明,变异着的NA抗原有越来越耐热的趋势。     

一种新的甲型流感病毒重配株(H1N2)来源的研究

3株H1N2亚型毒株基因分析表明,它们仅HA基因节段类似于A/广东/6/91(H1N1)病毒,即PR8类似毒株,而其他7个基因节段均类似于1995年人群中流行的H3N2毒株,故可认为新分离出H1N2亚型毒株是由PR8类毒株与1995年人群中流行的H3N2毒株通过基因重配而来.由于1995与1998年分离到的H1N2毒株间基因组非常相似,故可认为1998年分离到的H1N2毒株并不是由PR8类毒株与1998年人群中流行的H3N2毒株重配而来,而是由1995年H1N2毒株演变而来.     

胚培养在水稻高营养育种上的应用研究

幼胚或子房培养成苗的关键是材料必须带内颖;其次,对接种的材料进行低温预处理可提高发芽成苗率;再次用 N_6与 B_5培养基的复合配方做基本培养基,并需要附加0.5ppm 的赤霉素(GA_3)和维生素 B_1、B_6、烟酸,以及较高浓度的蔗糖(5%左右)。近几年来,我们将大田未开花的稻穗剪下,放入实验室内的自动调温杀雄器里进行彻底的群体杀雄作为受体。然后用丙种射线(剂量为2—3万伦琴)辐射处理花粉,再与受体稻穗     

流感病毒在Vero细胞上的增殖

目的研究流感病毒在非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)上高效增殖的最适条件。方法将Vero细胞在50cm2细胞瓶或3000mL旋转瓶中培养成单层,以不同感染复数接种流感病毒,在不同的培养条件下孵育,取上清测病毒血凝滴度。结果当加入胰酶终浓度为40μg·mL-1时,低感染复数接种流感病毒,可获得高效价病毒液,在3000mL旋转培养瓶中流感病毒的易感性较在50cm2静置培养瓶中略高。结论建立了流感病毒在Vero细胞上高效增殖的初步方法。