通用性配体亲和层析

通用性配体亲和层析采用稳定,价廉的简单配体与固相基质连接形成亲和吸附剂,这种吸附剂已广泛应用于蛋白和多肽等的分离纯化。本文介绍三种通用性配体亲和层析方法的基本原理和应用,包括金属整合物配体亲和层析、染料配体亲和层析和组氨酸配体亲和层析。     

亲和层析技术在生物科学中的应用及发展

近几十年来,亲和层析技术发展十分迅速,广泛应用于生物分子(如结合蛋白、酶、抑制剂、抗原、抗体、激素、激素受体、糖蛋白、核酸及多糖类等)及组织(如细胞、细胞器、病毒等)的分离和纯化,是蛋白质组学研究中重要的技术之一.介绍了亲和层析的基本类型及配体合成的研究进展,概述了亲和层析技术在蛋白质组学以及在其他方面的应用和发展动态.     

薄芝糖肽亲和层析纯化技术

目的研究硼配基亲和层析技术纯化薄芝糖肽的新方法.方法用乙酸铵缓冲液考察不同pH条件下加入不同浓度NaCl对薄芝糖肽吸附解吸的影响,找出静态最佳吸附解吸条件;依据Chase模型求出最大静态吸附容量、吸附常数以及动态吸附糖及蛋白的容量.结果在pH8.2、NaCl浓度加至0.15mol/L条件下薄芝糖肽的吸附量达到最大,因此为最佳吸附解吸条件;在此条件下的最大静态吸附容量qm=55.57mg/g湿基,吸附常数Kd=5.312g/L;动态吸附多糖容量为43.1mg/g湿基,动态吸附蛋白容量为10.3mg/g湿基.结论该系统使用的亲和层析能有效地分离纯化薄芝糖肽.     

Cibacron Blue亲和层析及应用

以Ｆ３ＧＡ（Ｃｉｂａｃｒｏｎ ＢｌｕｅＦ３ＧＡ）为配基建立了一种可用于免疫毒素（ＩＴ）分离纯化的亲和层析方法,实验中用三种不同来源的核糖体灭活蛋白（ＲＩＰ）,即蓖麻毒素Ａ链（ＲＴＡ）,苦撤毒素（Ｍｏｍｏｒｄｉｎ,ＭＴ）和Ｓａｐｏｒｉｎ,以探讨ＲＩＰ与Ｆ３ＧＡ的相互作用。分析三种ＲＩＰ均能引起Ｆ３ＧＡ吸收光谱明显红移,提示ＲＩＰ均可与Ｆ３ＧＡ发生特异结合,将Ｆ３ＧＡ与Ｓｅｐｈａｄｅｘ交联可获得Ｂｌｕ     

一种新的免疫吸附亲和层析柱的制备及其应用

本文介绍用加工成颗粒性的硝酸纤维素作为固相配体支持物,制备一种新的免疫吸附亲和层析柱,用于纯化AFP。该法制备简单,固相支持物连接抗体之前不需活化处理和使用化学交联剂。实验结果表明,纯化的AFP纯度较高,收获量也大,是一种实用的柱层析技术。     

生物制药中的灌注层析技术

灌注层析技术替代传统层析技术为世界著名制药工业及科研机构创造了更多成功点。机会。我国生物活性物质与天然药物的研究开发需要借助强有力的快速分离纯化手段才能取得成功。本文介绍灌注层析技术的特点;灌流方式下的免疫检测技术;灌注层析纯化方法开发与优化,放大;在线生产监测;产品分析与定量;诊断试剂的自动化制备;抗体片段的纯化;ＢｉｏＣＡＤ系列生物工作站的技术特点。     

胶体金免疫层析技术在疟疾诊断中的应用

疟疾仍然是21世纪人类健康的严重威胁之一,快速准确的诊断是疟疾防治的关键。目前利用胶体金免疫层析技术研制的诊断盒主要有4种,在疟疾快速检测方面发挥了重要作用,本文着重综述了这4种诊断盒在疟疾检测中的应用情况以及各自的特点。     

Cibacron Blue亲和层析及应用

以Ｆ３ＧＡ（Ｃｉｂａｃｒｏｎ　Ｂｌｕｅ　Ｆ３ＧＡ）为配基建立了一种可用于免疫毒素（ＩＴ）分离纯化的亲和层析方法。实验中用三种不同来源的核糖体灭活蛋白（ＲＩＰ）,即蓖麻毒素Ａ链（ＲＴＡ）,苦瓜毒素（ｍｏｍｏｒｄｉｎ,ＭＴ）和Ｓａｐｏｒｉｎ,以探讨ＲＩＰ与Ｆ３ＧＡ的相互作用。分析显示三种ＲＩＰ均能引起Ｆ３ＧＡ吸收光诸明显红移,提示ＲＩＰ均可与Ｆ３ＧＡ发生特异结合。将Ｆ３ＧＡ与Ｓｅｐｈａｄｅｘ交联可获得Ｂｌｕｅｄｅｘ。Ｂｌｕｅｄｅｘ亲和层析是一种经济有效,简单易行,便于在各类实验室中使用的蛋白质亲和层析技术。结果表明：在低盐溶液中ＲＴＡ和ＭＴ均可迅速地与Ｂｌｕｅｄｅｘ结合,而在高盐溶液中（０．６５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）又极易被洗脱回收。这一技术用于免疫毒素的研究可有效地去除游离抗体,而不影响其杀伤活性。     

抗人α2a型基因工程干扰素单克隆抗体及亲和层析柱的研制

应用鼠－鼠杂交瘤细胞技术建立了三系稳定分泌抗重组人α２ａ型干扰素（ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ）单克隆抗体细胞系１Ａ５、１Ｂ５和２７Ａ７。细胞连续传代和在液氮中冻存后复苏,分泌抗体能力不变,并且维持在较高水平,细胞培养上清效价１∶２５６～１∶４０９６,腹水１∶２６×１０５～１∶２７×１０８。Ｉｇ亚类测定,１Ａ５和１Ｂ５ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１,２７Ａ７为ＩｇＧ２ａ。三系ＭｃＡｂ均识别ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ和－α２ｂ,与ｒＨｕ－ＩＦＮ－α１和正常大肠菌体裂解液无反应。竞争ＥＬＩＳＡ试验,三系ＭｃＡｂ分别针对ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ上三个不同表位。同ＭｃＡｂ建立双抗体夹心ＥＬＩＳＡ对ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ和－α２ｂ均可检测到１５０ｐｇ／ｍｌ,约１０ＩＵ／ｍｌ的敏感度。用提纯的单抗制备亲和层析柱,单抗偶联率９５％以上。三系单抗亲和层析柱均可将粗制ｒＨｕ－ＩＦＮ－α２ａ提纯到９７％以上纯度。平均回收率为：１Ａ５单抗柱９０２％,１Ｂ５单抗柱９５３％,２７Ａ７单抗柱９４７％。比活性平均值依次为１９４×１０８ＩＵ／ｍｇ,１９７×１０８ＩＵ／ｍｇ和１６４×１０８ＩＵ／ｍｇ,残余鼠ＩｇＧ量均符合规程要求。纯化ｒＨｕ－ＩＦＮ?     

用琼脂糖亲和层析一步纯化蓖麻毒蛋白

本文报道了一种单用琼脂糖(Sepharose4B)来纯化蓖麻毒蛋白的快速简便的方法。我们发现在pH5的条件下,蓖麻毒蛋白和与其密切相关的蓖麻凝集素对琼脂糖的结合能力有很大的差别。在有0.2mol/LD-半乳糖存在下可将蓖麻毒蛋白从Sepharose上洗下,同样条件下蓖麻凝集素仍牢固地结合在柱上。从而经一步柱层析便可得到电泳纯的蓖麻毒蛋白。此法不需另行合成亲和胶,适合于蓖麻毒蛋白的大规模纯化。     

利用环状糊精纯化淀粉水解酶类

环状糊精是由环状糊精葡萄糖基转移酶作用于淀粉所产生的一组非还原性环状低聚糖 ,最常见的有α,β和γ型 ,它们分别是由 6、7或 8个葡萄糖单元以α 1,4糖苷键联结而成的。由于其特殊的“内疏水外亲水”分子结构 ,使得环状糊精能与多种有机分子形成特殊结构的包合物 ;同时环状糊精还能与酶的活性 /非活性部位相互作用 ,所以以环状糊精为配体 ,利用亲和层析纯化水解淀粉的酶类     

亲和标签在重组蛋白表达与纯化中的应用

亲和标签融合技术为重组蛋白的纯化提供了一种简单方便的纯化工具,具有结合特异性高、洗脱条件温和、通用性强、纯化倍数高等显著优点。概述了亲和标签对融合蛋白表达的影响,可以提高重组蛋白的产量,增强重组蛋白的可溶性,促进重组蛋白的正确折叠;回顾了在重组蛋白表达与纯化中广泛使用的几种亲和标签,以及近年来相继出现的几种比较新颖的纯化标签;介绍了亲和标签的组合使用策略,His6-MBP组合标签集合了两个标签的优点,串联亲和纯化可以纯化获得生理条件下的蛋白质复合体;展望了亲和标签未来的发展趋势,认为仍需继续开发性能更加优越、纯化效果更加显著的纯化标签系统。     

腺苷转运体亲和层析分离

本文合成了一种腺苷亲和层析凝胶,并采用亲和层析法从牛脑细胞膜上分离出了几种膜上结合的腺苷结合蛋白质。这些蛋白质在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳凝胶上为单一或主要的蛋白带,分子量分别为６４ｋｄ,４５ｋｄ,３５ｋｄ。腺苷转运体抑制剂潘生丁和ＮＢＭＰＲ对６４ｋｄ蛋白与＾３ｈ－腺苷的结合抑制作用远强于腺苷受体的激动剂ＮＥＣＡ和Ｒ－ＰＩＡ;这表明６４ｋｄ蛋白为牛脑细胞膜上结合的腺苷转运体。     

亲和层析法纯化霍乱毒素及其B亚单位

利用GM1偶联活化的Sephadex G50或扰CT IgG偶联活化的Sepharose 4B,我们已成功地建立了两种亲和层析纯化CT和CT-B的方法,获得了纯化产品。受体亲和柱对CT-B和CT的分离效率分别为71.6％或48.3％,抗体亲和柱分别为50％或51.7％。纯化产物经SDSPAGE、PAGE分析表明均达到亲和层析电泳纯级。GM1-ELISA、CHO细胞测毒加间接免疫荧光检测、家兔肠段结扎试验和家兔免疫保护试验结果提示纯化产物具有良好的生物学活性。这种有效而简单的方法可推广应用于CT或CT相关毒素的纯化。     

Rapid Purification of Annexin V from Human Placenta by Affinity Chromatography

Abstract

Affinity purification of annexin V from human placenta on column with appropriate monospecific antibodies is developed. The procedure permits purification of the protein to a highly purified state by a two stage procedure. The yield of the protein is about 5 mg per 100 g of wet tissue. Because of high homologies between various annexins, it was supposed that this procedure can be also applied for purification of other annexins from other tissues.     

连续性血液净化在肾衰危重病人抢救中的应用及效果评价

目的:探讨连续性血液净化在危重病人抢救中的应用及效果评价.方法:选取2010年1月～2012年11月我院收治的危重病人共26例,均采用连续性静脉-静脉血液滤过方法治疗,比较治疗前后的心脏血流动力学参数、肾功能与电解质的变化,观察全部患者治疗前后的临床症状改善情况及临床转归.结果:治疗前后的心率、中心静脉压、平均动脉压、心指数及心排出量差异均存在统计学意义(P＜0.05);治疗后患者的血尿素氮、肌酐及钾水平均明显低于治疗前(P＜0.05);治疗后患者的低血压、低血氧、昏迷改善率分别为66.67％、71.43％及62.50％;26例患者中死亡14例(53.85％),存活12例(46.15％).结论:连续性血液净化可以积极有效地治疗危重病患者,选择治疗的时候需要针对患者的情况进行综合判断和全面评估.     

重组蛋白下游连续纯化技术的研究进展

重组蛋白质的纯化一直是限制其生产的瓶颈环节,传统纯化工艺以批次模式为主,普遍存在成本高,处理效率及回收率低等问题。近年来,随着连续离心,过滤,层析技术的开发和应用,传统工艺的缺陷得到有效的克服。主要以下游纯化工艺为主线,对工业大规模纯化过程中所涉及的连续技术的特点及应用进行了归纳分析。对纯化工艺中的核心技术-层析,以及未来重组蛋白质的纯化技术进行了展望,旨在为重组蛋白质生产工艺的优化提供新的理论依据和指导思想。     

应用单克隆抗体免疫亲和柱纯化干细胞因子

应用抗人干细胞生长因子(SCF)单克隆抗体,通过化学偶联方法制备成亲和层析柱,用于纯化大肠杆菌表达的可溶性重组人rh-SCF.结果表明,经亲和柱纯化的样品经SDS-PAGE电泳检测纯度达95%以上,计算蛋白回收率为23.4%,并且纯化后rh-SCF生物活性明显高于纯化前样品.