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浙江蝮蛇毒中性磷脂酶A2的晶体学研究 总被引:1,自引:0,他引:1
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江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A2的溶血位点 总被引:1,自引:0,他引:1
用聚合酶链式反应 (PCR)对江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A2 基因进行点突变 ,使对应 34位氨基酸残基由Arg分别突变为Glu和Gln ,将其基因克隆至温敏表达载体pBLMVL2 ,并在大肠杆菌RR1中成功诱导表达 ,表达产物以包涵体的形式存在。对包涵体进行变复性后 ,用凝胶过滤的方法纯化。对纯化后的产物进行酶活力测定及溶血活性测定。实验结果表明 ,突变后的表达产物维持原有磷脂酶A2 活性 ,且溶血活性显著降低 ,表明磷脂酶A2 的34位碱性氨基酸残基在溶血过程具有重要作用 相似文献
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江浙蝮蛇蛇毒中性磷脂酶A2的结构模拟研究 总被引:1,自引:1,他引:0
从我国江浙蝮蛇蛇毒纯化出的中性磷脂酶A2(ATX)不仅具有酶催化活性,还具有突触前神经毒性。用图象模拟和能量极小化及分子动力学方法,根据美国西部菱斑响尾蛇(C.atrox)蛇毒PLA2的晶体结构构建了ATX二体和单体模型,它们的基本折叠与C.atroxPLA2是很相似的。能量计算表明,二体的总势能比单体相应能量的两倍低263.6kcal/mol;ATX二体模型中两亚基间的作用与C.atroxPLA 相似文献
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江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A2基因的表达 总被引:5,自引:4,他引:5
将江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A2基因克隆至表达载体pBLMVL2,转化入大肠杆菌RR1,经过温敏诱导,SDS-P;AQGE检测,在约14kD处有一表达条带。表达产物酸性磷脂酶A2约占细菌蛋白总量的30%,并以包涵体的形式存在。纯化包涵体后,将产物变性,复性,然后用FPLC Superose^TM12纯化,产物经过SDS-PAGE检测只有单一条带。 相似文献
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江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A2抑制制血小板作用的机理 总被引:4,自引:3,他引:4
江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A2(APLA2)对多种致聚剂引起的血小析具有抑制作用,这种抑制并非是由于APLA2与血小板膜结合,引起膜流动性降低造成。APLA2不裂解血小板,电镜观察表明它能抑制血小析部颗粒的中心化,使之不易被激活。进一步研究显示APLA2是作用在骨架上,使致聚剂引肌动蛋白单体聚合难以进行,APLA2导致的cAMP浓度的升高正说明了这点。结果提示APLA2首先作用于轿小板细胞膜,引起cAM 相似文献
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我们利用简并引物从江浙蝮蛇腺总RNA经RP-PCR扩增磷脂酶A2(简称PLA2)基因,并以碱性PLA2(B-PLA2)基因为探针,分离出了酸性PLA2(A-PLA2)和两个未见报道的特征结构类同的基因,分别命名为Asn^48-PAL2和BA-PAL2。双向测序测定了这组PLA2同工酶(除信号肽外)基因的全序列,并由此推导编码的氨基酸序列。其中A-PLA2基因编码的氨基酸序列与较早报道的由蛇毒中分离 相似文献
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钙离子对江浙蝮蛇蛇毒中性磷脂酶A2溶液构象的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
用荧光光谱方法研究了钙离子对江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A2(简称NPLA2)构象的影响。结果表明,Ca2+能使酶中唯一的色氨酸残基的荧光增强:只有在Ca2+存在时,底物卵磷脂才明显改变酶分子中Trp周围的环境,使其光谱的兰移达7nm,荧光增强约一倍:酶中唯一的His残基被修饰以后,则没有上述两种现象发生;结合在NPLA2上的bisANS的荧光强度,随Ca2+浓度的增加而增强,提示Ca2+对bis-ANS结合区域的构象有明显影响。 相似文献
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我们用同源模建方法构建了江浙蝮蛇毒碱性-酸性杂合磷脂酶A2-Ⅱ和中性磷脂酶A2的三维结构,并对它们的结构特征做了比较分析。在此基础上,我们在三维结构水平上解释了磷脂酶A2荧光光谱学研究的一些结果。我们还对四种江浙蝮蛇毒磷脂酶A2的酶活性部位的静电势分布做了分析。我们认为:含钙的PLA2酶活性部位周围的静电势有利于PLA2与带负电荷的底物结合。 相似文献
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江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A2单斜晶体的培养和晶体学研究 总被引:2,自引:0,他引:2
江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A_2单斜晶体的培养和晶体学研究牛秀田,孟五一,桂璐璐,王小强,林政炯(中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室,北京100101)顾培忠,周元聪(中国科学院上海生物化学研究所,200031)关键词江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A_2... 相似文献
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运用差示扫描量热法,在不同PH值的缓冲溶液内和各种浓度的碱土族氯化溶液内,研究了来自江浙蝮蛇毒的酸性与碱性磷脂酶A2的热变性过程。得到表征这两种酶深液构象变化的热力学参数。依据这些参数研究了两者的溶液构象及其变化。在PH4.5以下,分子净荷正电的这两种酶在溶液中不形成可热致伸展的有序构象;PH高于4.5时,Asp和Glu的侧链羧基以负离子形式存在有利于有序构象的稳定。His是决定PLA2活力和热稳 相似文献
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江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A2具有强烈的溶血及抗凝血活性.运用刚体修正技术获得了正交晶型Ⅰ中分子的精确旋转与平移参数.采用非晶体学二重对称性制约的最小二乘修正方法在0.6~0.25 nm分辨率范围内进行了结构精化.最终的晶体学R因子为20.1%, 键长、键角与标准值的均方根偏差分别为0.0013 nm和1.55°.与正交晶型Ⅱ结构比较表明,二者除了β-折叠部位与Ca2+结合部位构象存在小的差别外,磷脂酶A2分子主体构象极其相似.2种晶型由不对称单位中2个分子形成的二体也是类似的.但是,二体中1个单体分子的相对取向有5.5°的差别,提示二体结合面有一定柔性.晶型Ⅰ二体较晶型Ⅱ二体在晶胞中的堆积更紧密. 相似文献
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蝮蛇毒酸性磷脂酶A2高含钙量的晶体结构研究 总被引:4,自引:0,他引:4
钙离子是磷脂酶A2(PLA2)经必需的辅因子,以蝮蛇生磷脂酶A2为材料,在晶体生长过程中加入CaCl2培养了高含钙量的PLA2晶体,X射互衍鉴定该晶体与天然酶同晶。民集了1.6埃分辩率的同步辐射衍射数据,经晶这修正所得高含钙酶的结构与天然酶结构要近,但钙结合部位与C端肽段有细微判别与钙配位的七个氧原子所形成的五角双锥构型比天然酶的完美。钙离了对磷脂酶A2整个分子构象的影响较小,下离子的作用主要是通 相似文献
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钙离子在江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2中的作用是多方面的。它不仅能够引起酸性磷脂酶A_2在溶液中构象的变化,而且对该酶活性有较大的影响。Ca~(2+)为酶活力所必需,当Ca~(2+)浓度达到0.06mmol/L时,酶表现出很高的活力;Ca~(2+)浓度超过0.5mmol/L时,催化反应出现一个明显的延滞期。化学修饰表明His_(47)在表现活力方面起重要作用,Ca~(2+)的存在可降低其修饰反应的速度,提示这是由于Ca~(2+)引起构象发生变化而造成的。 相似文献
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尖吻蝮蛇毒磷脂酶A2基因的克隆与序列分析 总被引:3,自引:3,他引:3
从尖吻蝮蛇毒腺中抽提总RNA,经RTPCR扩增磷脂酶A2的基因,以江浙蝮蛇的酸性磷脂酶A2基因为探针杂交筛选克隆,分离得到4种磷脂酶A2基因。经双向测序测定了这些磷脂酶A2同功酶基因的全序列,并由此推导出编码的氨基酸序列。运用计算机软件推算了它们的等电点,按照等电点和结构特征将它们分别命名为尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶A2I(A.aAPLA2I)、尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶A2II(A.aAPLA2II)、尖吻蝮蛇毒碱性磷脂酶A2(A.aBPLA2)和尖吻蝮蛇毒Lys49磷脂酶A2(A.aLys49PLA2)。其中A.aAPLA2I的1~10位氨基酸残基序列同以前分离得到的尖吻蝮蛇酸性磷脂酶A2已测定的1~10位氨基酸残基序列完全一致。A.aLys49PLA2基因则由于其推导出的49位氨基酸残基由Lys代替了Asp而区别于以前克隆到的磷脂酶A2基因。最后运用计算机软件比较了它们的同源性。这一组磷脂酶A2基因的克隆,将为进一步研究磷脂酶A2的结构与功能的关系提供更多的信息。 相似文献
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尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶A2泊表达及其生化特征 总被引:2,自引:3,他引:2
将尖吻蝮蛇毒酸性磷脂酶A2I(A.aAPLA2I)的基因克隆至表达载体pBLMVL2,在大肠杆菌RR1中成功表达,表达产物A.aAPLA2I约占细菌蛋白质总量的30%,以包含体的形式存在。纯化包含体后,将产物变性,复性,然后用FPLC Superose ^TM12纯化,产物经过SDS-PAGE检测只有单一条带。 相似文献