抗芜菁花叶病毒转基因甘蓝型油菜的研究

以子叶柄为材料,建立了甘蓝型油菜（ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）双低品种的再生体系。通过子叶柄与农杆菌（ＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＬＢＡ４４０４）共培养,将表达载体ｐＢＴｕ中芜菁花叶病毒外壳蛋白（ＴｕＭＶ－ＣＰ）基因以整合方式导入甘蓝型油菜,然后用卡那霉素进行筛选,获得了油菜再生植株。经ＰＣＲ特异性扩增、点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析,证明再生植株基因组ＤＮＡ中整合了ＴｕＭＶ－ＣＰ基因。攻毒实验表明,有ＴｕＭＶ－ＣＰ基因插入的工程油菜对ＴｕＭＶ均有不同程度的抗性。     

芜菁花叶病毒的3’末端序列克隆与CP基因序列分析

目的:克隆芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)的3'末端序列,并进行CP基因序列分析.方法:以TuMV杭州榨菜分离物(TuMv-HZZC)接种病叶为材料,利用病毒粒子吸附法制备病毒RNA模板,经RT-PCR扩增获得了TuMV-HZZC 3'末端序列,将其克隆到PMD 18-T质粒上进行序列分析.结果:TuMV-HZZC分离物3'末端序列包括部分的Nib基因、完整的TuMVCP基因和3'-UTR,CP基因为864bp,分别编码288个氨基酸,3'-UTR序列(不包括PolyA尾巴)为213bp.经过与其他TuMV分离物的CP基因核苷酸和氨基酸比较,同源性分别达到88.0%～97.6%和91.0%-96.5%.结论:TuMV的系统进化具有典型的地域和寄主关联性.     

277例急性髓细胞白血病的细胞遗传学分析

目的：探讨急性髓细胞白血病（AML）染色体异常核型的分布情况、特点及其与预后的关系。方法：选择2009年1月-2012年12月在本院门诊和住院治疗的AML患者277例,采取新鲜骨髓,采用直接法和短期培养制备标本,以R显带技术进行染色体核型分析。结果：除47例无分裂相共检出异常核型122例,异常率为53．04％。结构异常（75例）以t（15;17）（56例）和t（8;21）（19例）常见,1．78％的M2、90．77％的M3、26．79％的M2和1．85％的M5分别有t（7;11）、t（15;17）、t（8;21）和t（11q23）异常,而100％的t（7;11）、100％的t（15;17）、55．56％的t（8;21）、100％的t（8;15）和66．7％的t（11q23）分别见于M2、M3、M2、M5和M4亚型。数I／1异常（28例）以＋8（12例）为常见,100％的＋22见于M4E0。结构和数目同时异常（19例）以t（8;21）伴性染色体丢失（8例）为最常见,100％为M2。核型异常与临床缓解率高度相关,伴t（15;17）易位组、伴t（8;21）易位组预后佳,正常核型组次之,其它异常核型预后较差,复杂核型预后最差。结论：特定的染色体异常与亚型及预后密切相关,染色体核型分析在急性髓细胞白血病诊断、分型、治疗及预后判断中具有十分重要的地位和作用。     

131例原发性闭经女性的细胞遗传学分析(含世界首报异常核型3例)

原发性闭经是一种原因复杂的疾病, 染色体异常则是发病的主要原因。通过对131例原发性闭经患者的外周血淋巴细胞染色体的G带核型分析, 发现其中83例为正常女性核型, 占63.36%; 各种异常核型48例,占36.64%, 其中包括3例世界首次报道的异常核型[46,X,t(X;1)(q22;p34); 46,X,t(X;5;6)(p11.2;q35;q16); 46,XX,t(4; 9)(q21;p22),t(6;10)(p25;q25),t(11;14)(q23;q32)]。另外, 将33例Turner’s综合征患者的主要异常体征及核型分布分别与Elsheikh等的报道进行比较, 发现矮身材、蹼颈、后发迹低和肘外翻的发生率与文献资料存在显著差异, 说明东西方Turner’s综合征患者临床体征的表现可能存在差异。通过对2例X-常染色体易位携带者的分析, 认为Xp11.2和Xq22区域可能与原发性闭经有关。     

Ogura CMS紫菜苔×萝卜×甘蓝型油菜杂种的获得及细胞遗传学研究

以OguraCMS紫菜苔×萝卜杂种F1(AR ,2n =19)为母本 ,以甘蓝型油菜 (AACC ,2n =38)为父本进行杂交 ,获得了 4棵杂种植株。其中 1株 (PRN 1)的花色为嵌合体 ,该植株上的花多为黄色 ,但是也有乳白色花 ,另外还有 1朵花甚至 1个花瓣上同时具有黄色和白色区域 ,其余 3株 (PRN 2、 3、 4 )都开白花。PRN 4的花药开花前退化 ,其余 3株都可以看到 3～ 6枚花药 ,能够产生部分花粉 ,但是PRN 2的花粉不能被I2 KI溶液染色。PRN 2具有 4个蜜腺 ,PRN 1和PRN 3具有 2个蜜腺 ,PRN 4无可见蜜腺。在低温下PRN 2叶色正常 ,其余 3株幼叶表现不同程度缺绿。PRN 1的染色体数目为 2n =38,染色体平均配对构型为 14 6 7Ⅰ +10 0 7Ⅱ +1 0 6Ⅲ ,其染色体组构成可能是AACR ;PRN 2的染色体数目为 2n =35 ,染色体平均配对构型为 13 89Ⅰ +8 33Ⅱ +1 33Ⅲ +0 11Ⅳ ,PRN 3的染色体数目为2n =33,染色体平均配对构型为 14 0 0Ⅰ +7 82Ⅱ +1 0 0Ⅲ +0 0 9Ⅳ。PRN 4的染色体数目未能确定。与甘蓝型油菜回交后PRN 1～ 3植株各自产生了一定数量的种子 ,而PRN 4则未产生种子。对这些杂种及其后代的遗传及育种意义进行了讨论     

转基因动物育种的EK细胞途径

将外源基因导入动物体中的途径目前主要是使用向受精卵中注射DNA的方法,这是一种可重复的有用的方法,但其成功率很低,外源基因的整合、表达和稳定的筛选工作是在个体水平上进行的,这对许多大家畜来说是难以实现的工作。近年来,经过人们计多年的努力,综合了分子遗传学、发育遗传学和体细胞遗传学的当代成果,一种新的哺乳动物遗传工程的方法日益成熟,这就是转基因动物育种的EK细胞途径。     

9;21相互易位携带者生育多例9p部分三体患者细胞遗传学分析

在河南南阳收集到一个家系4代23人, 其中6人患先天性智力障碍, 具有轻度的面部和小母指畸形等特点, 先证者伴随有癫痫的发生。采用常规的外周血培养染色体G带分析, 发现先证者的核型为：46, XY, der(21) t(9; 21) (9p22.2; 21q22.3)pat, 是部分9p三体。对该家系其他成员的染色体进行分析, 发现所有患者均为部分9p三体, 异常染色体均来自9号与21号染色体平衡易位携带者染色体相互易位的异常分离, 因此这是一个部分9p三体综合征家系。而重复区段发生在9号染色体短臂远端一半区域(9pter→9p21)内, 该区是关键区, 导致智力障碍和面容轻微畸形。     

轮状病毒感染患者外周血单个核细胞的转录组学分析

轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起急性肠胃炎的主要病原体,分析RV感染患者的人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs)有利于探讨人PBMC在清除RV中的作用。为此,本研究采集2019年2月-2019年6月长春儿童医院中RV感染患者和健康儿童血液,分离PBMC,通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术比较RV感染患者与健康儿童之间的RNA表达图谱,借助基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、Reactome通路富集分析DEGs,使用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)技术进行验证。结果显示,与健康对照组相比,RV感染轻症患者PBMC中有1619个DEGs;重症患者PBMC中有2816个DEGs,主要与干扰素(Interferon,IFN)反应、中性粒细胞、溶酶体、核小体、染色质等相关。qPCR验证轻症患者干扰素刺激基因(IFN-stimulated genes,ISGs)15表达上调,白介素(Interleukin,IL)1β表达下调;重症患者IL15、ISG15表达上调,IL1β表达下调,与转录组结果相一致。本研究提示,RV感染可能激活人I型和II型IFNs反应抵御病毒感染,但也会抑制溶酶体相关基因,对细胞自噬过程产生影响。     

影响C6大鼠神经胶质瘤细胞表达HSP68的因素分析

为了解各种因素对细胞热休克反应的影响,本文用Western印迹、蛋白水解酶活性电泳(renatured electrophoresis)、密度测定等方法分析了营养、血清、细胞密度等对C_6细胞合成热休克蛋白68(HSP68)量和时间的作用。结果表明,在一定血清浓度范围内(≤30％),培养基含的血清浓度越高,细胞启动HSP68合成的时间越长;营养条件的差异影响HSP68合成的量和时间;不同生长阶段的细胞热休克反应有差异,生长到稳定期的细胞是研究细胞应激反应的较合适材料。     

利用激光微束穿刺法将杀虫蛋白基因导入油菜的研究

利用激光微束照射油菜子叶柄,将来自苏云金杆菌的杀虫蛋白（Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌｃｒｙｓｔａｌｐｒｏｔｅｉｎ,ＩＣＰ）基因导入油菜细胞中,经植株再生和卡那霉素筛选,获得了转基因植株。对转基因植株进行了ＰＣＲ检测和饲虫实验,发现转基因植株为ＰＣＲ扩增阳性,某些植株表现出了较强的抗虫性。实验结果表明外源抗虫基因已被整合到油菜基因组并得到了表达。     

Effects of turnip mosaic virus and turnip yellow mosaic virus on the survival, growth and reproduction of wild cabbage (Brassica oleracea)

Wild plants of Brassica oleracea (wild cabbage) are commonly infected with turnip mosaic poty virus (TuMV), turnip yellow mosaic tymovirus (TYMV) and several other viruses. A field experiment in which plants were inoculated either with TuMV or TYMV showed that virus infection significantly reduced survival, growth and reproduction. Relative to water inoculated-controls, plants infected with TYMV had greater mortality, were shorter, had a smaller leaf area and number, showed a greater amount of damage from herbivory and chlorosis, were less likely to flower and produced fewer pods and lower total seed output. Plants infected with TuMV did not appear to be adversely affected at first; however, mortality after 18 months was higher than control plants. Although TuMV infection had no effect on the number of plants flowering, the infected plants did produce fewer pods and a lower total seed output. We conclude that both viruses can significantly affect vegetative and reproductive performance of wild cabbage and hence that introgression of virus resistance (particularly when conferred by a major gene or a transgene) from a crop might increase plant fitness in natural populations of this species. Ecological risk assessments of virus resistance transgenes must do more than survey adult plants in natural populations for the presence of the target virus. Failure to detect the virus could be due to high mortality on infection with the virus.     

子房注射法与农杆菌介导法转化甘蓝型油菜的比较研究

以甘蓝型油菜湘油１３号为试验材料,运用根癌农杆菌介导法和子房注射法成功地将Ｂｔ杀虫蛋白基因导入油菜,在特定的条件下,以子叶柄作为转化受体进行农杆菌介导转化,其转化效率受侵染时间和共培养时间的影响,最佳侵染时间为３－５ｍｉｎ,最佳共培养时间为６０－７２ｈ;子房注射法的最佳注射时间为授粉后第２０－３０ｈ,最适注射部位为子房中部,ＤＮＡ注射量为０．５－１．５μｇ,在最佳转化条件下它们分别获得抗卡那霉素植     

MAR的分子结构

核基质(nuclear matrix)是真核生物细胞核中存在的主要由非组蛋白性纤维蛋白组成的空间网架结构.它参与了真核生物几乎所有的细胞核功能,包括DNA复制、RNA的合成和调控以及hnRNA的加工、染色体的功能构建、有丝分裂、甾类激素作用、病毒复制和致癌作用等.最近的研究表明,核基质还与雌体细胞的第二条X染色体的钝化有关[1].这些生物学功能是核基质通过识别基因组中与之特异结合的DNA序列--MAR(matrix association region)来实现的.自从1984年Mirkovitch等在果蝇hsp70和组蛋白基因侧翼发现第一批MAR分子以来[2],已有大量的MAR在各种真核生物中被克隆和测序.作为真核染色质loop的边界元件(boundary elemnt)和染色质功能区域(fountional domain)的顺式作用元件[3],MAR为研究真核基因(或基因组)的结构和功能之间的对应关系提供了一种联系的纽带.表1中列出了截至1997年底所发现并鉴定的所有MAR分子,通过对这些MAR的序列分析,我们可以找到一些MAR的结构特征.     

MAR的分子结构

核基质（ｎｕｃｌｅａｒｍａｔｒｉｘ）是真核生物细胞核中存在的主要由非组蛋白性纤维蛋白组成的空间网架结构。它参与了真核生物几乎所有的细胞核功能,包括ＤＮＡ复制、ＲＮＡ的合成和调控以及ｈｎＲＮＡ的加工、染色体的功能构建、有丝分裂、甾类激素作用、病毒复制和...     

甘蓝型油菜抗虫转基因植株及其抗性分析

通过油菜子叶外植体－农杆菌共培养法将苏云金杆菌杀虫蛋白基因导入甘蓝型油菜,获得抗虫的转基因植株。带有１￣２ｍｍ子叶柄的油菜子叶经农杆菌感染后,共培养２￣３天,然后转移到附加１５ｍｇ／Ｌ卡那霉素的ＭＳ选择培养基上筛选转化愈伤组织及不定芽。卡那霉素抗性苗相继在含２０￣５０ｍｇ／Ｌ卡那霉素的选择培养基上继代培养,再转移到含２５ｍｇ／Ｌ卡那霉素的生根培养基上诱导生根。以苏云金杆菌杀虫蛋白基因为探针,进行１     

利用微束激光穿刺法将菜豆几丁质酶基因导入油菜的研究

本文以甘蓝型“双低”油菜新品种Ｈ１６５为实验材料,以子叶柄为外植体,研究了微束激光转化系统中的一些关键因素,如取材时间以播中后４－５天为宜;高渗液预处理２０－４０分钟者最佳;外源ＤＮＡ浓度以０．０５－０．１μｇ／μｌ获得转基因植株最有利等。已建立一种操作简便,重复性好,并能准确定位于靶体细胞的转化体系,并用这个转化体系成功地将菜豆几丁酶基因导入油菜,并获得转基因植株。经ＰＣＲ扩增检测为阳性,实验结