红色酵母原生质体形成和再生条件的研究

了不同渗透压稳定剂、酶浓度、酶解时间,温度等对红色酵母原生质体的形成与再生的影响。实验结果表明：使用对数生长期早期的细胞,蜗牛酶浓度１％,３０℃处理５０－６ｍｉｎ,山梨醇为渗透压稳定剂,有利于原生质体制备和再生。     

酿酒酵母和产朊假丝酵母原生质体的形成、再生及属间融合

使用由亚硝基胍诱变所得到的营养缺陷型作为单倍体融合亲株的核基因标记,同时也采用线粒体球红霉素抗性突变株的小菌落形式作为融合亲株的线粒体基因标记。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和产朊假丝酵母(Candida utilis)两亲株原生质体的制备是用对数生长早期的细胞在蜗牛酶和0.7M KCl及β-巯基乙醇或二巯基苏糖醇的作用下完成的。二者的原生质体的形成率在30—60分钟内达到90—99％。原生质体再生率,酿酒酵母最高为29—35％,产朊假丝酵母为7.5％。两亲株的原生质体在35％PEG(M.W.6,000),10mM CaCl_2条件下被诱导融合。在基础培养基上,长出以营养互补为标记的融合菌株。融合频率为10~(-5)—10~(-6)。试验表明,这些融合菌株具有杂种的性质。其中一株杂合子在同化D-木糖、纤维二糖等的能力上比亲株明显增强。     

假丝酵母一新种——北京假丝酵母

本文研究了一株从水果表皮分离到的假丝酵母,它与至今已发表的所有已知假丝酵母均不相同,定名为北京假丝酵母(Candida beijingensis)。     

假丝酵母尿酸酶形成条件

选出了一株产尿酸酶的产朊候丝酵母(Candida utilis)AS2．117。此菌株尿酸酶形成条件的研究表明：尿酸、黄嘌呤和鸟嘌呤对酶形成起诱导作用;玉米浆对菌株生长和酶形成起十分重要的作用;蔗糖、葡萄塘、D-甘露糖和果糖是酶形成的适合碳源;生物素对酶产生有促进作用;在含有玉米浆培养基中加入无机氮源对产酶无作用,添加有机氮略增加产酶量。尿酸酶形成最适培养基组成为(％)：蔗糖;,玉米浆3,尿酸0．1,蛋白胨0．1,生物素0．05,KCI0．1,NaCl 0.1。最适pH为6．2。在250ml三角瓶中装30ml培养基为最适。在200r／min的旋转摇床上25℃振荡培养21h,在此条件下最终酶活力可达0．6u／ml。     

松茸菌丝原生质体形成与再生条件的研究

采用多因素实验正交优选法比较不同酶、渗透压稳定剂、菌丝生理状况、菌丝培养基、预处理液和酶解时间等因素对松茸原生质体形成的影响和再生培养基、明胶、酪蛋白对松茸原生质体再生的影响.以0.6MMgSO4作为渗透压稳定剂,2-硫基苏糖醇为预处理液,用2%蜗牛酶在30℃酶解6h,每克菌丝可以得到1×106个原生质体.再生最优条件0.6MMgSO4,PDY再生培养基,2.5%明胶,松茸菌丝再生率最高4.97%.     

酿酒酵母RasseⅫ原生质体的形成与再生

研究了菌龄、酶系统、脱壁促进剂、渗透压稳定剂对酿酒酵母ＲａｓｓｅⅦ（ＳａｃｃｈａｒｏｎｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＲａｃｅⅫ）原生质体形成与再生的影响。结果表明,对数生长早期的菌体最适于制备原生质体;酶浓度是影响原生质体产量的主要因子,其次为时间,再次是温度;而就再生率而言,温度则是决定因子,酶浓度为第二,时间则几乎不起作用;脱壁促进剂能够加速细胞壁的溶解,尤以巯基乙醇效果较好,然而也有降低再生率之弊,综合考虑原生质体形成与再生的情况,本研究中以选用２％的酶浓度３０℃下酶解１－１．５ｈ于１７％蔗糖高渗培养基上再生为获得ＲａｓｓｅⅫ原生质体形成率和再生率的最佳条件。     

酿酒酵母W5及休哈塔假丝酵母20335原生质体制备条件的确定

确定了酿酒酵母W5及休哈塔假丝酵母20335原生质体制备的最佳条件。选取不同脱壁预处理时间及不同酶解时间,对酿酒酵母W5、休哈塔假丝酵母20335进行原生质体制备和再生,比较制备率和再生率。确定脱壁预处理30 min后,以终浓度2%的蜗牛酶,30℃、100 r/min酶解处理15 min为双亲株原生质体制备的最佳条件。利用原生质体融合的方法,以酿酒酵母W5和休哈塔假丝酵母20335为亲本株,构建可以利用木糖生产生物乙醇的新型酿酒酵母融合株,该前期工作为W5、20335原生质体融合工作奠定了重要的基础,对于将木质纤维素原料转化为生物乙醇的研究具有极其重要的意义。     

啤酒酵母和产朊假丝酵母属间原生质体融合子的筛选

利用不可逆生化抑制剂碘乙酸抑制一亲株细胞的生理活性和利用两亲株细胞间生理性状的差异性,进行啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和产朊假丝酵母(Candida utilis)原生质体融合子的筛选,属间原生质体融合率为3.47×10~(-6)。经菌落形态比较,碳化合物的同化和发酵,DNA含量测定,酯酶型分析,细胞核染色,产孢试验和自然的核分离实验证明,融合子分三种类型:87.21%产朊假丝醇母型;9.02%啤酒酵母型;3.77%真正核融合子型。     

假丝酵母同源性的研究

用分光光度法测定了4株郎比可假丝酵母(Candida lambica)间的DNA-DNA同源性,结果:2.1182与LP012的同源性为90.4%,表明它们是同种的;2.1182与DX22为77.5%,DX22与LP012为76.8%,表明它们虽是同种,但产生了一些分化:LP006与LP012为63.2%,表明它们之间产生了较大的分化,接近种的范围,仍可认为是同种的。     

木质层孔菌原生质体的制备与再生条件的研究

目的：提高木质层孔菌原生质体的产量和再生率,为进一步诱变育种提高菌株产木质纤维素酶活力打下基础。方法：通过单因素实验分别筛选合适的酶浓度、菌丝的菌龄、酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂与pH值。结果：在酶解液浓度为2.0%纤维素酶＋2.0%蜗牛酶、菌龄60h、酶解温度32℃、酶解时间3h,以0.8mol/L的NaCl溶液为渗透压稳定剂,pH值为5.0时,原生质体形成量达4.13×10^5个/mL,再生率可达6.95%。有效地提高了木质层孔菌原生质体的产量和再生率。     

Clostridium acetobutylicum Protoplast Formation and Regeneration

Techniques and media for the production and regeneration of stable Clostridium acetobutylicum protoplasts are described.     

秦岭链霉菌的原生质体再生与诱变育种

在秦岭链霉菌(Streptomyces qinlingensis sp.nov.)的菌种改良中,应用原生质体再生并结合物理化学诱变能够得到产量较高、稳定性较好的菌株.筛选实验表明:秦岭链霉菌原生质体再生菌株R-72、诱变菌株NTG-1和H30-7对枯草芽孢杆菌的抗菌活性均提高了20%以上,并且连续培养10代,其遗传性状均比较稳定.进一步的生测实验表明菌株R-72,NTG-1和H30-7对5种病原细菌和5种植物病原真菌的抗菌活性相比原始菌株有显著提高.     

Protoplast Formation and Regeneration in Lactic Streptococci

We cloned the promoter of the 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase gene from Arachis hypogaea L. β-Glucuronidase (GUS) histochemical staining and GUS activity assay indicated that the activity of the promoter was exhibited predominantly in the leaves and enhanced by water and NaCl stresses, and by application of abscisic acid (ABA) and salicylic acid (SA) in transgenic Arabidopsis. Moreover, two novel ABRE-like (abscisic acid response element) elements were identified in the promoter region.     

秦岭链霉菌的原生质体再生与诱变育种

在秦岭链霉菌(Streptomyces qinlingensis sp. nov.)的菌种改良中, 应用原生质体再生并结合物理化学诱变能够得到产量较高、稳定性较好的菌株。筛选实验表明：秦岭链霉菌原生质体再生菌株R-72、诱变菌株NTG-1和H30-7对枯草芽孢杆菌的抗菌活性均提高了20%以上, 并且连续培养10代, 其遗传性状均比较稳定。进一步的生测实验表明菌株R-72、NTG-1和H30-7对5种病原细菌和5种植物病原真菌的抗菌活性相比原始菌株有显著提高。     

Protoplast Formation and Regeneration of Streptococcus bovis Cells

The simultaneous use of hen egg lysozyme and mutanolysin, N-acetylmuramidase SG, showed synergistic effects on the lytic action and more effectiveness for protoplast formation of Streptococcus bovis IFO 12058. The frequency of regeneration reached 100% after 7 days of incubation under the improved conditions and by a method in which protoplasts were overlaid with the agar medium layer.     

白腐真菌原生质体制备和再生条件的研究

对影响白腐真菌(5．776)原生质体制备和再生的条件：包括菌龄、水解酶液的种类及浓度、酶解温度、酶解时间、再生培养基的稳渗剂的选择进行了研究。通过单因素比较分析和正交实验得到最适合的白腐真菌原生质体制备和再生条件。结果表明：当菌龄为58h,采用1%纤维素酶和1%蜗牛酶(2：1)混合液,酶解温度30℃,酶解时间180min,用0．7mol/L氯化钠作渗透压稳压剂,白腐真菌(5．776)原生质体的形成数和再生率均比优化前大为提高,原生质体形成量为8．36×10~5个/mL,原生质体再生率为9．12%。     

Optimization of Protoplast Formation and Regeneration in Leuconostoc mesenteroides

Conditions are reported for efficient protoplast formation and regeneration in four strains of Leuconostoc mesenteroides. Protoplasts were produced from each strain at frequencies greater than 99%, although the rate of their production was variable from strain to strain. Bovine serum albumin and Mg²⁺ were required for maximal regeneration, while the presence of Ca²⁺ was inhibitory. Regeneration frequencies of 16% could be obtained with strain ATCC 10830. This frequency was four- to eightfold higher than the frequencies of the other strains examined.