抗小鼠精子特有乳酸脱氢酶C4的与分泌片装配或未装配的单克隆抗体IgA的生物学功能

为了测定抗精子ＩｇＡ在免疫不育和抗精子避孕疫苗研制方面的生物学作用,用肠道内免疫的方法制备了一组抗乳酸脱氢酶Ｃ４（ＬＤＨ－Ｃ４）的单克隆ＩｇＡ抗体（ｍｏＩｇＡ）。以免疫印迹证实了它们的异质同形体。大部分ｍｏＩｇＡ（ＰＡ１－ＰＡ５）是用肠道内免疫和以派依尔氏淋巴细胞作为亲本细胞进行融合来获得的。在豚鼠血清补体存在的情况下,小鼠精子可以被ｍｏＩｇＡＰＡ１、ＰＡ２和ＰＡ４所制动。高浓度ＰＡ４和ＰＡ５可凝集小鼠精子。小鼠体外受精率可被３个ｍｏＩｇＡ（ＰＡ２、ＰＡ３和ＰＡ４）显著降低,但用ＰＡ１、ＰＡ２和ＰＡ５被动免疫之后,小鼠体内受精无明显变化。纯化的小鼠胆汁分泌片可同纯化的ｍｏＩｇＡ或腹水中的ｍｏＩｇＡ在体外组装起来。同分泌片结合之后,ｍｏＩｇＡ对精子的制动、凝集和体外受精无明显变化。这些研究结果提供了抗ＬＤＨ－Ｃ４的ｍｏＩｇＡ和分泌性ＩｇＡ对精子功能和体外受精的生物学作用的直接证据,在免疫不育的防治,避孕疫苗的研制以及性传播疾病的防治方面均有一定的指导意义。     

乳酸脱氢酶C4的精子免疫荧光定位特性

用１４个抗小鼠ＬＤＨ－Ｃ４的单克隆抗体对小鼠、树鼯和人精子的ＬＤＨ－Ｃ４进行了间接免疫荧光定位。结果显示：不同的单抗可以结合到小鼠精子表面不同的位置，其中ＰＡ１（Ｋ０２１）在尾部，ＰＡ２（Ｋ０２２）、ＰＡ４和ＰＡ５（Ｋ０２３）在中段和尾部，ＳＭ１、ＳＭ２和ＰＧ２的中段，ＳＭ３和ＳＭ４在顶体，ＳＭ５在顶体和赤道板。人和树鼯精子表面的ＬＤＨ－Ｃ４也呈现类似的情况。这些研究表明精子表面的ＬＤＨ－Ｃ４呈现     

抗丙肝病毒核心抗原单克隆抗体的研制与初步鉴定

用基因工程重组技术获得的丙肝病毒（ＨＣＶ）核心蛋白抗原与鼠血清白蛋白交联后免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术成功地建立了４株稳定分泌抗核心抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞,试验结果表明,该４株ＭｃＡｂｓ与免疫抗原及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶ ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５无反应,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。４株ＭｃＡｂｓ中３株为ＩｇＧ２     

抗rhEPO单克隆抗体的制备及初步应用

用重组人促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞在ＰＥＣ４０００作用下与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合,获得一株能分泌抗ｒｈＥＰＯ单抗隆抗体的杂交瘤细胞株２Ｆ１２,染色体数目大于１００条,间接ＥＬＩＳＡ法测定腹水和细胞培养上清效价,分别为１．６×１０＾－７和４×１０＾－４。测定抗体亚类时,则同时显示ＩｇＡ和ＩｇＧ１,其轻链为κ链;相对亲和力为５×１０％＾－１２ｍｏｌ／Ｌ。单抗２Ｆ     

抗脂多糖单克隆抗体特性及纯化的研究

用Ｅ．ｃｏｌｉ０１１１：Ｂ４死菌体及其脂多糖（ＬＰＳ）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合获得６株稳定分泌抗ＬＰＳ特异性单克隆抗体细胞株,其中一株为ＩｇＧ２ａ类,５株为ＩｇＭ类,轻链均为Ｋ型;染色体数目为９０－９８条;５株ＩｇＭ类单克隆抗体识别５种不同的抗原表位;相对亲和力在１０~８～１０~（１０）之间;１Ｂ１２单抗经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０纯化后,经还原性ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示只有７０ＫＤ的重键和２５ＫＤ的轻链。     

丙型肝炎病毒C33_c单克隆抗体的研制和鉴定

用丙型肝炎病毒重组蛋白Ｃ３３_ｃ抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,运用杂交瘤技术成功地建立了７株能稳定分泌抗Ｃ３３_ｃ单克隆抗体的杂交瘤细胞１Ｈ６Ｄ２、２Ｇ１Ａ６、３Ａ４Ａ８、３Ｅ３Ｅ７、４Ｇ１２Ｃ１０、４Ａ１０Ｃ２、５Ｆ４Ｂ６．试验结果表明,７株ＭｃＡｂｓ具有良好的ＨＣＶ特异性,间接ＥＬＩＳＡ法测得小鼠腹水ＭｃＡｂ效价为１：１０￣４－１：４×１０￣４;竞争抑制实验和相加指数测定证实７株ＭｃＡｂｓ识别相关的抗原表位;７株ＭｃＡｂｓ中１株为ＩｇＭ（５Ｆ４Ｂ６）,其它６株为ＩｇＧ（２ａ）。     

用核酸免疫技术制备抗丙肝病毒C区单克隆抗体

用丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１区真核表达质粒ｐｃＤＮＡ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１按４００ｕｇ／只剂量免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,１４周后同一剂量再加强免疫一次。加强免疫后２周,在５０％ＰＥＧ１４５０介导下将脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞（５１）融合。实验结果融合率达５４．３％（３１３／５７６）。阳性率为５．４％（１７”３１３）。克隆化后得到６株稳定分泌抗丙肝病毒Ｃ区单克隆抗体杂交瘤细胞株。这６株杂交瘤均产生ＩｇＭ抗体,接种ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后产生腹水的效价为１６４－１３２０（ＥＬＩＳＡ）。     

甲型副伤寒菌O—特异性多糖与破伤风类毒素结合菌苗的制备 …

以脱毒后去除类脂Ａ的甲型副伤寒杆菌高分子量Ｏ－ＳＰ１和低分子量Ｏ－ＳＰ２为特异笥抗原,以破伤风类毒素（ＴＴ）为蛋白质载体,用已二酸二肼（ＡＤＨ）作为连接剂制备的两种结合物及其多糖免疫ＮＩＨ小鼠,结果显示单独注射Ｏ＿ＳＰ１或Ｏ－ＳＰ２免疫小鼠后,均不能刺激小鼠产生抗ＬＰＳ抗体;而用Ｏ－ＳＰ１－ＴＴ和Ｏ－ＳＰ２－ＴＴ结合物免疫后,小鼠血甭中均产生了特异性抗－ＬＰＳ－ＩｇＧ抗体,且Ｏ－ＳＰ１－ＴＴ免疫组     

GABA和孕酮对人及豚鼠精子的体外获能作用

为了探讨γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）是否参与人及豚鼠精子体外获能的调节,将生育男子和豚鼠清子分别悬浮于ＢＷＷ和低Ｃａ＾２＋最小获能培养基（ＬＣａ＾２＋－ＭＣＭ）中,加入ＧＡＢＡ、孕酮（Ｐ４）、ＧＡＢＡＡ受体激动剂及其拮抗剂,在５％ＣＯ２孵箱３８．５℃培养２ｈ。然后用ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ Ａ２３１８７激发精子顶体反应（ＡＲ）和超激活运动（ＨＡＭ）。以精子与金霉素（ＣＴＣ）荧光结合类型、ＡＲ和ＨＡＭ为指标来     

志贺氏Ⅰ型痢疾杆菌O—特异性多糖与破伤风类毒素结合疫苗 …

从志贺氏１型痢疾村菌ＬＰＳ中分离纯化出料捩的,以ＡＤＨ为连接剂将其与ＴＴ结合形成Ｏ－ＳＰ－ＴＴ结合疫苗,并用此结合疫苗免疫ＮＩＨ小鼠,结果显示使用Ｏ－ＳＰ免疫后,小鼠血清中没有抗ＬＰＳ抗体产生,而用Ｌ－ＳＰ－ＴＴ免疫后鼠血清中生了抗ＬＰＳＩｇＧ和ＩｇＭ抗体,且ＩｇＧ抗体水平高于ＩｇＭ抗体;Ｏ－ＳＰ－ＴＴ免疫组等二次和第三次免疫后ＩｇＧ我有显著的升高（Ｐ〈０．０１）,但第二次和第三次免疫后血清ＩｇＭ     

细胞粘附分子在IgA肾病患者肾组织中的表达──定量免疫组织化学研究

本研究应用免疫组织化学方法及计算机图象分析系统,对４７例ＩｇＡ肾病患者肾组织中细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）和血管细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ－１）的变化进行了定量研究。以此进一步探讨细胞粘附分子在ＩｇＡ肾病肾脏损伤中的作用变化机理。本文的结果显示：ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１在ＩｇＡ肾病肾小球内表达均增加,且与肾小球病变程度有密切关系。肾小球病变越重,上述粘附分子在肾小球内表达越强。重度ＩｇＡ肾病患者肾小球内ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１的表达最强。在伴有炎症细胞浸润的肾间质中ＩＣＡＭ－１也有存在。这一结果说明,ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１表达强度的变化与ＩｇＡ肾病的发展有密切的关系。     

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原多肽检测丁肝病毒IgM抗体及其初步应用

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＶ－Ａｇ）肽建立了检测抗ＨＤＶ－ＩｇＭ抗体的ＥＬＩＳＡ方法,本法操作简便、快速,重复性好,特异性强,与抗ＨＡＶ－ＩｇＭ、抗Ｈｋ－ＩｇＭ、抗ＨＢｓ－ＩｇＭ、抗ＨＣＶ－ＩｇＩ、抗ＣＭＶ－ＩｇＭ、抗ＲＶ－ＩｇＭ、类风湿因子（ＲＦ）及抗核抗体（ＡＮＡ）阳性血清均不起反应,且可被２－巯基乙醇阻断而不起反应。经初步临床应用,３１例正常人血清抗ＨＤＶ－ＩｇＭ全部阴性,２８例慢活肝患者检出率为３２．１％（９／２８）,１７例慢迁肝患者血清阳性率为１１．８％（２／１７）１８例肝癌和肝硬化病人血清阳性率为２２．２％（４／１８）这三组病人与正常对照者相比较均有显著性差异（Ｐ＜０．００１）。此外,抗ＨＤＶ－ＩｇＭ阳性血清的ＡＬＴ值均明显高于正常参考范围,提示在ＨＤＶ感染过程中,患者肝细胞进一步受损。实验结果证明,抗ＨＤＶ－ＩｇＭ是诊断ＨＤＶ感染的重要指标,对ＨＤＶ感染早期诊断具有重要价值。     

腺苷受体拮抗剂对帕金森病小鼠神经递质的影响

运用神经毒剂ＭＰＴＰ（１－ｍｅｔｈｙ－４－ｐｈｅｎｙ－１,２,３,６－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）制作的ＩＣＲ小鼠帕金森病模型,通过荧光测定方法和免疫组织化学方法,测定ＭＰＴＰ及腺甘Ａ２ａ受体拮抗剂喹唑啉（Ｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅ,ＣＰ６６７１３）对单胺类神经递质去甲肾上腺素（ＮＡ）、多巴胺（ＤＡ）、５－羟色胺（５－ＨＴ）及其代谢产物５－羟吲哚乙酸（５－ＨＩＡＡ）和氨基酸类神经递质γ－氨基     

不育症精子乳酸脱氢酶同工酶C_4的细胞化学定位、定量研究

本文采用酶细胞化学方法,在光镜下用积分分级计数法,全自动图像分析仪检测精子ＬＤＨ－Ｃ４活性,两法测定ＬＤＨ－Ｃ４活性显著正相关（ｒ＝０．８０１和０．７４２,Ｐ＜０．０１）;ＬＤＨ－Ｃ４酶细胞化学电镜技术观察精子ＬＤＨ－Ｃ４活性,通过计数酶点可测定ＬＤＨ－Ｃ４活性。本文检查３８例不育男性和２０例已生育男性精子ＬＤＨ－Ｃ４活性,ＬＤＨ－Ｃ４主要分布于精子ＳＴＭ及胞质,其次是顶体及质膜表面。可通过胞膜外逸到精浆,ＬＤＨ－Ｃ４在各部活性比值为５∶２∶１∶１。不育组精子ＬＤＨ－Ｃ４可能通过膜破损处外漏到精浆使精子内ＬＤＨ－Ｃ４显著减少,ＬＤＨ－Ｃ４在精子顶体亦显著减少,使不育组精子ＬＤＨ－Ｃ４活性显著低于生育组精子,提示ＬＤＨ－Ｃ４活性的定位和大小直接与生育能力相关,检测ＬＤＨ－Ｃ４活性可作为检查不育症精子质量的可靠指标。ＬＤＨ－Ｃ４与精子密度显著相关（ｒ＝０．７３７和－０．４９３,Ｐ＜０．０５）;与活动性无相关性。     

亲和层析纯化HepG2细胞分泌的PAI—1

本文报道用抗ＰＡＩ－１单克隆抗体（ＭｃＡｂ）亲和层析建立了纯化ＰＡＩ－１的简便方法。经免疫亲和层析,Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ２００凝胶过滤,从ＨｅｐＧ２细胞培液中分离到糖基化和非糖基化两种形式的ＰＡＩ－１,回收率为８４％,ＰＡＩ－１比活性为６．１×１０＾４ＩＵ／ｍｇ。糖基化ＰＡＩ－１分子量为５０ｋＤ,比活性５．８×１０＾４ＩＵ／ｍｇ。非糖基化ＰＡＩ－１分子量４３ｋＤ,占总ＰＡＩ－１３０％,仍具有ＰＡ     

玉米赤霉烯酮单克隆抗体酶联免疫测定方法的建立及初步应用

用ＺＥＮ－ＢＳＡ人工抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠,经融合,筛选和克隆化得到可稳定可泌抗ＺＥＮ单克隆抗体的杂交瘤细胞株ＺＥＮ－１Ｃ６。ＺＥＮ－１Ｃ６属ＩｇＧ１,纯化腹水抗体效价为１０＾－５,与５种衍生物的交叉反应系数为０．１６～１．２０％,用ＺＥＮ－１Ｃ６建立了检测食品（玉米,小麦,大米）中玉米赤霉烯酮的ＣＩＥＩＡ法。该法检测纯毒素的线性范围为５～１０００ｎｇ／ｍｌ,最低检出浓度为０．１ｎｇ／ｍｌ。平均回     

人免疫缺陷病毒1型Rev单链抗体细胞内免疫抗病毒基因治疗研究

应用抗ＨＩＶ－１Ｒｅｖ单链抗体细胞内免疫方法,研究在人Ｔ细胞和周围血淋巴单核细胞内抗病毒复制的效果,探讨细胞内免疫抗ＨＩＶ－１基因治疗的可行性。克隆抗ＨＩＶ－１Ｒｅｖ单链抗抗体（ｓＦｖ）基因,以逆转录病毒为基因载体,将名装后的含靶基因的逆转录病毒转导至人ＣＤ４阳性Ｔ－细胞株ＣＥＭ和ＳｕｐＴ１,以及ＨＩＶ－１阴性自愿者的周围血淋巴单核细胞（ＰＢＭＣ）,再分别用不同剂量（ＭＯＩ）的ＨＩＶ－１病毒株ＰＮ     

Epstein—Barr病毒潜伏膜蛋白（LMP）基因免疫的初步研究

利用基因免疫技术,将重组质粒ＰＢＳ－ＬＭＰ－Ｈｙｇ直接注入ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌中,于第２、４、８周,用间接免疫荧光法检测鼠血清中抗ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）特异抗体,结果表明,所有免疫小鼠（５／５）均产生特异体体,且抗体滴度随时间变化逐渐增高。     

加压素(4 -8)对大鼠脑内Ca2+/CaM依赖的蛋白激酶Ⅱ自身磷酸化的影响

大鼠皮下注射加压素（ＡＶＰ）（４－８）１ｈ后,大脑皮层中Ｃａ＾２＋／ＣａＭ依赖的蛋白激酶Ⅱ自身磷酸化程度与对照组比较增高１９２％,Ｐ〈０．００１;海马中增高４０％,Ｐ〈０．０５。ＣａＭＫⅡ的自身磷酸化程度依赖于Ｃａ＾２＋及ＣａＭ浓度。在用抗 ＣａＭＫⅡα单克隆抗体对给药１ｈ组样品和对照组样品进行免疫印迹检测时,发现皮下注射ＡＶＰ（４－８）１ｈ后,大脑皮层中ＣａＭＫⅡα亚基的蛋白量没有明显差异。ＡＶ     

猪精子中与卵透明带糖蛋白ZP3结合的蛋白质

依次经ＰＳＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析柱和纤维素ＣＭ－５２离子交换层析柱,从猪精子的ＣＨＡＰＳ抽提液分离得４个蛋白质组分。用固相透明带精蛋白结合试验（ＩＺＰＧＢＡ）检测;表明精子蛋白ＳＰ１和ＳＰ２具有结合透明带糖蛋白ＺＰ３的活性,ＳＰ２并显示凝集血球的活性。精子蛋白ＳＰ１与卵预温育明显抑制精卵结合,抑制活性与加入的精子蛋白的浓度呈正相关。用生物素标记的ＺＰ３和蛋白质印迹技术,证明ＳＰ１中的６８ｋＤ精子蛋白与ＺＰ３结合,提示６８ｋＤ精子蛋白参与精卵结合。