五味子乙素对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的:探讨五味子乙素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,五味子乙素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。结果:五味子乙素在0.75×10-4 mol/L 24 h,48 h及72 h,及0.75×10-5mol/L 24 h促进成骨细胞的增殖,在0.75×10-6mol/L24 h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论:五味子乙素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

补骨脂素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

为探讨补骨脂素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响,用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,补骨脂素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。补骨脂素浓度在1μmol/L 24 h,5~20μmol/L浓度范围内48 h,1、10、20μmol/L浓度范围内72 h促进成骨细胞增殖,在10~15μmol/L范围内48 h及72 h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。补骨脂素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

山萘酚对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

为探讨山萘酚体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响及中药菟丝子补肾壮骨作用的物质基础,用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,山萘酚以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时问后,用MTF法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。山萘酚在浓度1×10^-5mol／L24h,1×10^-5～1×10^-7mol／L浓度范围内48h促进成骨细胞增殖,在浓度1×10^-9moL／L48h及72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。山萘酚体外能促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,山萘酚可能是菟丝子补肾壮骨作用的活性成份之一。     

异补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

为探讨异补骨脂素加锌对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化作用的影响,用改良的组织块培养法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,在成骨细胞体系中以不同浓度加入异补骨脂素与锌,MTT法检测加药后不同时间成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量.结果显示:异补骨脂素加锌较单纯应用异补骨脂素或硫酸锌在24和48 h时促体外大鼠成骨细胞增殖的作用更加明显;在48和72 h时能促进成骨细胞碱性磷酸酶活性(ALP),其中ALP的测定在72h的活性更为显著.与单纯应用异补骨脂素或者锌相比,异补骨脂素与锌联合应用能够协同增效,对体外培养的成骨细胞的增殖与分化作用更加显著.     

补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞增殖与分化影响的实验研究

为探讨补骨脂素加锌对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化作用的影响及其量效关系,用改良的组织块培养法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,在成骨细胞体系中以不同浓度加入补骨脂素与锌,MTT法检测加药后不同时间成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶的活性;用放射免疫法(RIA)测定细胞外骨钙素(BGP)的含量,用改良的Lowry法测蛋白含量。补骨脂素加锌较单独应用补骨脂素或硫酸锌在48 h和72 h时促体外大鼠成骨细胞增殖的作用更加明显;在24、48 h和72 h时能提高成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,其中在48 h时的效果更为显著;在24 h和72 h时能提高细胞外液中的骨钙素含量;补骨脂素浓度为1×10-9mol/L和锌浓度为1×10-5mol/L两者联合用药较为合适。与单独应用补骨脂素或者锌相比,补骨脂素与锌联合应用能够协同增效,对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖与分化作用更加显著。     

甲氧补骨脂素对大鼠成骨细胞生物活性影响的实验研究

为探讨甲氧补骨脂素对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化作用的影响,用改良的组织块培养法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,在成骨细胞体系中以不同浓度加入甲氧补骨脂素,MTT法检测加药后不同时间细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量;用放射免疫法测定细胞内骨钙素含量。结果显示:与对照组相比,甲氧补骨脂素组在24 h和36 h时促进体外大鼠成骨细胞增殖的作用更明显;在24、48 h和72 h时均能提高成骨细胞碱性磷酸酶活性(ALP)和骨钙素(BGP)的分泌。甲氧补骨脂素对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖与分化均有明显的促进作用。     

二甲双胍调控糖尿病大鼠骨髓间充质干细胞的增殖和分化

虽然二甲双胍广泛用于治疗2型糖尿病,但是其对骨骼的潜在影响知之甚少。因此,本研究评估了二甲双胍对培养的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)和脂肪细胞两者的分化以及增殖的影响。首先随机组形成对照实验,其中对照组为在不经二甲双胍处理培养基中培养MSCs细胞21 d,而二甲双胍组则在用100μmol/L二甲双胍处理培养基中培养MSCs 21 d。结果表明,二甲双胍增强了大鼠MSCs的成骨细胞分化细胞中ALP的活性,抑制了培养中MSCs脂肪形成分化的过程,但是增强了MSCs细胞的增殖能力。     

大豆甙元对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的探讨大豆甙元体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,大豆甙元以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用放射免疫法(RIA)测定细胞外骨钙素(BGP)的含量,用改良的Lowry法测蛋白含量。结果大豆甙元1×10(-5)～1×10(-9)mol／L浓度范围内48h,72h促进成骨细胞增殖,在1×10(-7)～1×10(-9)mol／L范围内48h和72h提高成骨细胞外骨钙素含量。结论大豆甙元体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

蛇床子素对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

蛇床子素对大鼠成骨细胞增殖分化的影响@王建华$河北医科大学中西医结合研究所!石家庄050017 @宋冬梅$河北医科大学中西医结合研究所!石家庄050017 @刘楠$河北医科大学中西医结合研究所!石家庄050017 @李恩$河北医科大学中西医结合研究所!石家庄050017~~~~~~~~     

成骨细胞的分化调控

骨组织中有两类参与调控骨代谢过程的细胞,成骨细胞负责造骨,破骨细胞负责溶骨。在一些骨相关疾病(如骨质疏松、骨相关肿瘤)发病过程中,造骨和溶骨失去平衡,这种失衡与破骨细胞和成骨细胞的数量异常及功能失调都有关,所以对成骨细胞分化机制的研究也是十分必要的。目前,已经有大量的文献表明,成骨细胞分化机制复杂,受许多激素、细胞因子以及一些小分子化合物的调控和影响,如骨形态发生蛋白(BMP)、Wnts等。     

雌激素对成骨细胞增殖及IGF-2表达的调控作用

目的 探讨雌激素对大鼠成骨细胞功能的影响及胰岛素样生长因子2（insulin-like growth factor 2,IGF-2）表达的调控机理。方法应用1×10^-10mol／L、1×10^-8mol／L、1×10^-6mol／L浓度的雌二醇（estradiol,172）分别作用原代培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞24h;采用MTT法和对硝基酚磷酸盐法检测成骨细胞增殖能力和细胞中碱性磷酸酶（ALP）活性;应用实时定量PCR和Western印迹杂交分析成骨细胞中IGF-2的mRNA和蛋白质的表达规律。结果1×10^-6mol／L浓度的磁使大鼠成骨细胞增殖能力和ALP活性分别增加了67％和55％,使IGF-2的mRNA与蛋白质的表达水平分别增加了90％和140％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论雌激素对成骨细胞中IGF-2基因的表达具有正性调控作用。成骨细胞中IGF-2的高表达可能与雌激素调节成骨细胞增殖和分泌功能相关。     

木黄酮对人催乳素瘤细胞增殖及其凋亡影响的实验研究

目的：观察木黄酮（genistein,GST)对培养的人垂体催乳素瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法：将CST、β-雌二醇（E2）作用于体外培养的人催乳素瘤细胞,测定MTT值及^3H-TdR掺入量,流式细胞仪测定细胞周期,并用TUNEL法观察细胞凋亡情况。结果：不同浓度的GST可抑制催乳素瘤细胞的增殖,并存在着剂量效应,10^-5mol.L^-1GST可使G1期的细胞比例从对照组的55.3%上升为90.3%;不同浓度的E2以剂量依赖方式刺激催乳素瘤细胞的增殖,并使G2期的细胞比例从对照组的15.6%上升为41.8%,GST和E2的共同作用仍可抑制催乳素瘤细胞的增殖,但抑制程度降低,不同浓度的GST均明显促进催乳素瘤细胞的凋亡,E2对GST的促凋亡作用无明显影响。结论：GST在体外能明显抑制培养人催乳素瘤细胞的增殖,并促进其凋亡,E2可部分拮抗GST的抑制增殖作用,但对其促凋亡作用无明显影响。     

小鼠巨核系祖细胞增殖,分化特性的研究

小鼠骨髓细胞经7d培养后进行细胞形态学观察,可见不同发育阶段的巨核细胞及不同大小的巨核细胞集落。通过计数每个集落中的细胞数,可确定相应祖细胞的有丝分裂能力。结果表明,具有不同有丝分裂能力的祖细胞的体外增殖动力学有所不同。祖细胞的数量与其有丝分裂次数呈负相关(r=-0.986)。进行0、1、2和3次有丝分裂的祖细胞的阿糖胞苷自杀率分别为48.9,58.7,48.0和41.2％;放射敏感性的D_O值(Gy)分别为1.71,1.24,1.03和0.77,D_O值的大小与有丝分裂次数呈负相关(r=-0.958)。经3Gy全身照射后CFU-Meg与CFU-GM的恢复动态过程具有不同特点。     

体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的研究大鼠骨髓基质干细胞的生长特点和诱导条件下的成骨能力。方法通过密度梯度离心和贴壁培养法分离成年大鼠骨髓基质干细胞,应用含地塞米松、p甘油磷酸纳和维生素c的诱导分化培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化并检测碱性磷酸酶活性和细胞矿化作用。结果原代培养基质干细胞首先形成细胞集落,14d时集落间接近融合;传代细胞体积变大,约5～7d传代一次。诱导条件下,细胞碱性磷酸酶活性明显增高,并出现了矿化结节。结论骨髓基质干细胞易于分离培养及体外扩增,成骨能力肯定,可作为骨组织工程的种子细胞。     

INTEGRIN SYNTHESIS AND UTILIZATION IN CULTURED HUMAN OSTEOBLASTS

This study describes the adhesion of human osteoblasts, culturedin vitro, to proteins of the extracellular matrix, the biosynthesis of integrins, their topography and organization in focal contacts. The adhesion of osteoblasts to laminin, type I collagen, vitronectin and fibronectin was 77–100%, in 2h and at 55nm substrata concentration, and it was accompained by spreading of the cells. Adhesion to fibronectin (FN), laminin (LN) and type I collagen (COL) was inhibited by antibodies to the β1 integrin and antibodies to the α5 chain affected adhesion only to fibronectin. Using a panel of polyclonal antibodies against α2, α3, α5, αv, β1 andβ3 integrins we detected synthesis of α3β1, α5β1, αvβ3, and an αvβ1-like dimer by immunoprecipitation of metabolically labelled cell lysates. Studies of immunolocalization demonstrated the presence of the same integrins identified in lysates, plus α4, α1 and β5 subunits. In cells adhering in the presence of serum we showed organization of β3 and αv integrins in focal contacts. In cells adhering to fibronectin α5 and β1 integrins were localized in focal contacts. In cells spread on laminin or type I collagen none of the integrins investigated was localized in focal contacts.     

脂肪来源细胞体外增殖规律及定向诱导分化研究

脂肪组织由整形外科吸脂术获得(19例,31．5±5．8岁)。酶消化法分离抽吸物中细胞,体外扩增至第10代．测定细胞生长曲线、累计倍增数目,明确其体外生长规律和增殖能力;通过对表面抗原CD29、CD105、CD106、CD166、CD49d、CD34、CD31、3G5等的检测分析脂肪来源细胞的群体组成：分别向软骨、骨、脂肪定向诱导,进一步明确该细胞群体定向分化能力。实验表明,每300ml脂肪抽吸物平均可获得5×10~7个有核细胞,体外扩增10代,平均每代倍增数目为1．59±0．224．累计倍增数目为15．53。流式细胞学及免疫细胞化学检测显示,干细胞相关抗原CD29、CD105、CD106、CD166等表达率均＞60%,但与造血系相关的CD34、CD31表达率也分别达到7．3%、29．2%。ADC向软骨诱导可检测到Ⅱ型胶原表达;向成骨诱导可见矿化结节形成,并可检测到AKP、Osteonectin基因表达;向脂肪诱导可检测到PPARr2、GLU-4、Leptin基因表达,细胞内有脂滴形成。脂肪来源的细胞获得量大,体外增殖能力强,并含有具有多向分化潜能细胞,有可能作为组织构建的种子细胞。     

锂和三尖杉酯碱对HL—60细胞增殖,分化和c—myc表达的影响

本研究利用细胞培养技术观察了氯化锂和三尖杉酯碱（ＨＴ）对ＨＬ－６０细胞增殖的影响,不同浓度的氯化锂对ＨＬ－６０细胞的集落形成和３Ｈ－ＴｄＲ参入均呈剂量依赖式抑制;三尖杉酯碱亦有类似的作用。在培养体系中加氯化锂和三尖杉酯碱时,对ＨＬ－６０细胞数及集落形成抑制作用与单用二者相比较有明显增加。用ＮＢＴ还原试验,氯化锂和三尖杉酯碱均促进ＨＬ－６０细胞的分化,小剂量氯化锂还能加强三尖杉酯碱对ＨＬ－６０细胞诱导分化作用。从氯化锂和三尖杉酯碱处理的ＨＬ－６０细胞中提取总ＲＮＡ,应用ＲＴ／ＰＣＲ检测ｃ－ｍｙｃ的表达,结果表明经氯化锂和三尖杉酯碱处理的ＨＬ－６０细胞ｃ－ｍｙｃ表达均降低,与未处理的ＨＬ－６０细胞ｃ－ｍｙｃ比较,说明氯化锂和三尖杉酯碱均能抑制ｃ－ｍｙｃ的表达,提示ｃ－ｍｙｃ很可能在白血病细胞增殖、分化中起调控作用。     

缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌细胞形态及增殖的影响

本实验应用形态学、免疫组化染色,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入、流式细胞等技术探讨缺氧（〈１％Ｏ２和２．５％Ｏ２）对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）形态及增殖的影响。结果表明：缺氧２４ｈ使ＰＡＳＭ表型从收缩型向合成型转换,胞浆内ＳＭ－ａ ａｃｔｉｎ减少,线粒体和粗面内质网增多,缺氧４８ｈ以后线粒体肿胀,空泡化,内质网扩张,胞浆内出现髓鞘样结构。流式细胞分析显示缺氧ＰＡＳＭ Ｇ２／Ｍ期细胞比例明显增多（Ｐ〈０．００     

原代培养大鼠松果体细胞的增殖与分化——免疫组织化学研究

目的：探讨体外培养大鼠松果体细胞的生长、增殖及分化。方法：采用MTT测定法BrdU及5－HT免疫组织化学方法。结果：相差显微镜观察可见培养的松果体细胞呈小圆形或不规则形,初期聚集成巢,以后逐渐散贴壁,有强折光性,细胞体随培养时间的延长而增大,MTT检测证实。培养的松果林体细胞增生较活跃,细胞倍增时间在培养第9天,第11天左右高峰。BrdU免疫组化法对松果体细胞分裂与增殖的观察及统计结果与MTT检验结果相符。5－HT阳性细胞占培养细胞总数的80％以上,结论：体外培养能获得生长增殖旺盛,具有一定生理功能的松果体细胞。