桑白盾蚧病原真菌Simplicillium lanosoniveum的致病性

从太原市白蜡树上采集的自然染病死亡的桑白盾蚧Pseudaulacaspis pentagona虫尸上分离获得一株病原真菌,菌株号为TYL001。经过形态观察和分子鉴定,该菌株为Simplicillium lanosoniveum。用该菌株5种浓度的孢子悬浮液(1.0×10~6孢子/m L、5.0×10~6孢子/m L、1.0×10~7孢子/m L、5.0×10~7孢子/m L、1.0×10~8孢子/m L)感染桑白盾蚧雌成虫,感染6d后,孢子悬浮液对桑白盾蚧的感染率分别为80.00%、83.33%、86.67%、90.00%、93.33%,说明该菌株对桑白盾蚧具有较强的感染力,且有浓度效应;感染症状出现的高峰期在72–120h之间,且孢子浓度越大,感染症状出现的越早;5种孢子浓度的感染中时IT50依次为106.95h、97.00h、91.46h、87.73h、79.38h,说明感染致病所用时间也具有浓度效应。本研究为生物防治桑白盾蚧提供了新菌种。     

L-色氨酸基因工程菌发酵培养基配方优化研究

[目的]对L-色氨酸基因工程菌液态发酵的培养基进行优化。[方法]通过P-B试验,筛选出对基础发酵培养基的发酵液中L-色氨酸浓度影响显著的因素,进一步通过最陡爬坡试验、B-B试验对影响显著的因素进行优化。在此基础上,确定最佳的发酵培养基配方。[结果]酵母粉、Fe SO4·7H2O、KH2PO4对发酵液中L-色氨酸浓度的影响显著;最佳培养基配方为:Glucose 25.0 g/L,酵母粉4.5 g/L,(NH4)2SO49.0 g/L,Mg SO44.5 g/L,柠檬酸钠2.0 g/L,Fe SO4·7H2O 96.1 m g/L,KH2PO41.2 g/L。[结论]根据此配方进行验证实验,发酵液中L-色氨酸浓度可达2.25 g/L。     

高产精氨酸菌株选育及发酵培养基优化

利用改良阿须贝培养基筛选出4种产精氨酸的菌株,其菌落特征分别为白色链球状菌株,干白分散球状菌株,金黄色杆状菌株,粉红色球状菌株,对它们分别进行了产精氨酸发酵试验,利用分光光度计测定精氨酸含量,最终确定金黄色棒状菌株为生产精氨酸产量较高的菌株。通过单因素和正交设计试验,分别考察玉米浆、硫酸铵、尿素、葡萄糖对金黄色杆状菌株发酵产精氨酸的影响,结果表明最佳条件为:玉米浆浓度3%,硫酸铵浓度6%,尿素浓度0.3%,葡萄糖浓度13%,在此条件下,可获得精氨酸最大产量为368.9ug/mL,与初始发酵培养基条件下发酵相比精氨酸产量提高约300%。该研究为精氨酸菌株的筛选提供了一条新途径,也为所筛选的金黄色杆状菌后期的研究及进一步规模生产精氨酸提供了参考依据。     

红色诺卡菌固体培养基配方的优化

应用响应面优化设计法优化固体培养基配方,增大红色诺卡菌的固体培养细胞生物量。首先用Plackett-Burman法从现有培养基组分中找到影响红色诺卡菌细胞生物量的关键因素,再通过最陡爬坡法确定细胞生物量最大的配方,用作中心组合设计(Central Composite Design, CCD)实验的基础起始值,拟合数学模型方程,最后找到最优组分的组合。优化的配方转移至企业实施放大实验,对结果进行验证和比较。试验结果表明,培养基各组分中影响红色诺卡菌细胞生物量的关键因素为蛋白胨、NaCl、牛肉膏;最优固体培养基配方:蛋白胨42 g/L、牛肉膏8 g/L、NaCl 1.2 g/L、甘油10 mL/L、Na_2HPO_4·12H_2O 0.3 g/L、琼脂20 g/L。在细胞生物量方面最优固体培养基配方比原配方高104%。响应面优化设计可用于提高红色诺卡菌细胞生物量固体培养基的优化,也为红色诺卡菌培养条件、液体发酵的优化研究提供参考。     

不同培养条件对中国被毛孢胞内核苷类组分的影响

采用紫外分光光度法,对冬虫夏草Cordyceps sinensis无性型——中国被毛孢Hirsutella sinensis液体摇瓶培养时胞内核苷类组分的形成积累条件进行了研究。结果表明:菌丝体中核苷类成分形成积累的最适摇瓶培养条件是碳源为葡萄糖:氮源为酵母浸出粉:微量元素为MgSO_4·7H_2O和KH_2PO_4;起始pH值6．5:摇瓶装液量100mL/500mL:摇床转数180r/min:接种量10％。正交试验结果表明最佳培养基配方为葡萄糖2％,酵母浸出粉3％,奶粉1％,MgSO_4·7H_2O 0．1％,KH_2PO_40．2％。培养条件优化后,菌丝体中总核苷的含量可达6．5748mg/g,比优化前提高了33．6％。     

昆明西山森林公园天然虫生真菌及其内生真菌的分离鉴定及多样性分析

【背景】不同地区虫草物种多样性的调查是虫草相关研究的热点之一,虫草真菌区系研究是真菌资源研究的重要内容。【目的】了解云南省昆明市西山森林公园天然虫生真菌及其内生真菌的多样性,增加对虫草真菌区系的认识。【方法】对该地区通过资源调查并采用组织分离法对采集的虫草样本进行虫生真菌及其内生真菌的分离,利用形态特征观察及ITS联合nr SSU、nr LSU、translation elongation factor-1α (tef-1α)、rpb1、rpb2多基因测序进行虫生真菌物种鉴定及多样性分析。【结果】共采集45份云南省昆明市西山森林公园天然虫草样本,鉴定结果表明隶属于2科5属12种,包括虫草科(Cordycipitaceae)的鳞翅虫草属(Samsoniella)(2种,含疑似新种1个)、虫草属(Cordyceps)(4种)和白僵菌属(Beauveria)(4种),以及线虫草科(Ophiocordycipitaceae)的紫枝孢属(Purpureocillium)(1种)和弯颈霉属(Tolypocladium)(1种,为疑似新种),优势属为虫草属(Cordyceps),优势种为环链虫草(C...     

两株椰心叶甲分离物的鉴定及其系统发育分析

采用形态学方法对2株从自然罹病死亡的椰心叶甲虫尸上分离到的致病菌株Dz01和Ma4进行了鉴定,发现2个菌株在菌丝、瓶梗和分生孢子等形态特征上与金龟子绿僵菌小孢变种基本一致,可将2个菌株鉴定为金龟子绿僵菌小孢变种。基于Dz01和Ma4菌株和其它31个代表绿僵菌主要种或变种菌株rDNA上ITS1-5.8S-ITS2区序列构建的最大简约树显示,Dz01和Ma4菌株均聚在金龟子绿僵菌小孢变种所构成的分支中,这为2个菌株形态学鉴定结果提供了分子依据。     

红托竹荪菌种快速分离培养基优化

通过对红托竹荪快速分离培养基优化,提高红托竹荪菌种分离与评价效率。采用响应面分析法,以菌种生长速度为响应值拟合二次多元回归方程,确定培养基配方;测定优化培养基与PDA对照培养基菌丝生长速度和菌丝直径,以菌丝形态、锁状联合和菌落形态等指标评价优化培养基;测定优化培养基与PDA培养基培养菌丝在木屑培养基中菌丝生长速度,验证应用效果。通过试验,筛选出快速分离培养基配方为葡萄糖20.71 g/L、全麦粉8.36 g/L、玉米粉8.07 g/L、琼脂粉18.00 g/L、木屑水1.06 L。快速分离培养基与PDA培养基对比,培养的菌落直径平均增加66.25%,快速分离培养基菌丝日平均生长速度增加33.33%,木屑培养基菌丝日平均生长速度增加44.22%。由于优化培养基中含有淀粉、纤维素等有效成分,其刺激了菌种分泌淀粉酶、纤维素酶等,维持了胞外酶系的完整性。还可根据菌丝培养基过程形成的透明圈大小判定菌种胞外酶产生能力,达到快速评价菌种质量,保障菌种质量的目的。     

1株能利用高粱汁产L-乳酸的菌株鉴定及培养基优化

以产L-乳酸的菌株A2为对象,采用16S rRNA基因测序法结合菌株的表型特征进行鉴定,以甜高粱汁为主要培养基质,采用响应面设计软件对该菌种的发酵培养基进行优化。结果表明,A2菌株为Lactobacillus plantarum S4,优化得到的甜高粱汁培养基配比为甜高粱汁327. 83 g/L,蛋白胨1. 67 g/L,磷酸氢二钾4. 7 g/L,硫酸锰0. 17 g/L,在此培养基配比下,Lactobacillus plantarum S4厌氧发酵68 h后,L-乳酸产量达(61. 20±1. 36) g/L,L-乳酸/葡萄糖转化率(90. 74±2. 28)%,L-乳酸/蔗糖转化率(47. 20±1. 81)%。     

Mycoparasitism of Phakopsora pachyrhizi,the soybean rust pathogen,by Simplicillium lanosoniveum

Rust of soybean, caused by Phakopsora pachyrhizi, was first reported in the southeastern US in 2004 where it quickly became established. Yield losses ranged from 35% to more than 80%. The mycophilic fungus Simplicillium lanosoniveum was previously shown to colonize rust pustules on soybean leaves and prevent germination of urediniospores. The number of pustules on soybean leaves also was significantly reduced when S. lanosoniveum colonized leaves. This study examined the antagonistic interactions between P. pachyrhizi and S. lanosoniveum using confocal, transmission (TEM) and scanning electron microscopy (SEM) in order to determine if S. lanosoniveum was mycoparasitic. Co-inoculated detached soybean leaves were examined using TEM and SEM to examine changes in urediniospores colonized by S. lanosoniveum. An isolate of S. lanosoniveum, previously shown to be an antagonist of P. pachyrhizi, was transformed with the green fluorescent protein (GFP) gene and used to document the infection process using confocal microscopy. S. lanosoniveum colonized pustules and coiled around urediniospores before infection. The mycoparasite penetrated urediniospores through germ pores within 24 h after inoculation, at which time organelles showed signs of degradation. By 2 days after inoculation, there was extensive colonization of urediniospores by hyphae of S. lanosoniveum. Hyphae of the mycoparasite erupted from the colonized urediniospores at 7 days after inoculation, and there was extensive sporulation on the surface of urediniospores. Over 90% of urediniospores were colonized within 5 days after inoculation with the mycoparasite. We showed in previous studies that S. lanosoniveum is an antagonist of P. pachyrhizi as well as an effective biocontrol agent, but we were unable to document its mode of action. We now present microscopic evidence that S. lanosoniveum is a mycoparasite.     

共生真菌Simplicillium lanosoniveum促进衣藻生长和脂类合成

【背景】藻类是生产生物柴油的主要原料,而一些真菌和细菌能够与藻类共生并提高生物柴油产量,因此藻-菌共生培养技术成为国内外研究的热点。【目的】研究共生真菌Simplicilliumlanosoniveum对衣藻Chlamydomonas reinhardtii细胞生长和脂类合成的影响。【方法】将分离的蓝藻共生真菌和衣藻混合(共生)培养。【结果】与衣藻单独培养相比,混合培养衣藻的比生长速率(0.20 d-1)、细胞产率[0.17 g/(L·d)]和生物量(2.85 g/L)分别提高了10.3%、51.3%和55.7%;脂类比合成速率[0.68 mg/(g·d)]、合成速率[1.95 mg/(L·d)]和含量(220.4 mg/g)分别提高了33.3%、107.5%和32.0%,并且脂类中的饱和脂肪酸以及单不饱和脂肪酸C18-1和C18-2的比例上升,有利于生物柴油的加工。【结论】真菌Simplicilliumlanosoniveum能够促进衣藻的生长和脂类合成,因此藻-菌混合培养可用于生物柴油原料的生产。     

一株深海真菌FS86的分离鉴定及其生物活性研究

采用平板涂布法从南海深海沉积物中分离出一株真菌FS86,根据培养特征、形态学特征和ITS序列分析,该菌株被鉴定为球孢枝孢(Cladosporium sphaerospermum)。生物活性测试结果表明,其发酵提取物对8种病原真菌和4种肿瘤细胞株都具有明显的抑制作用,其MIC值和IC50值分别为0.1-4 mg/m L和0.86-2.13μg/m L。     

Isolation and Identification of the Lipolytic and Thermophilic Fungus

In view point of the basic research for the enzyme properties and the development of utilization of lipase, a thermophilic fungus which could produce a remarkable amount of thermostable, alkalistable and extracellular lipase has been isolated from the compost soil. The taxonomical characteristics of this thermophilic fungus were examined and it was identified as Humicola lanuginosa S-38.     

一株产黄酮类物质内生真菌的初步研究

从银杏(Ginkgo biloba L.)的不同组织部位共分离出45株内生真菌。应用显色反应、聚酰胺薄膜层析对45株内生真菌的发酵提取物进行了初步分析,再采用高效液相色谱(HPLC)做进一步检测,得到1株产黄酮类物质的内生真菌(GL-2),经鉴定为明孢多节孢Nodulisporium hyalosporum。     

一株产紫杉醇内生真菌YN6的分离及鉴定

从云南红豆杉（Taxus yunnanensis）树皮内表皮中分离得到75株内生真菌,采用基于紫杉醇合成关键酶10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-O-乙酰基转移酶（10-deacetylbaccatin Ⅲ-10-O-acetyl transferase,DBAT）和C-13苯丙氨基侧链CoA乙酰基转移酶（C-13-phenylpropanoid side chain-CoA acyltransferase,BAPT）基因为标志分子的快速筛选方法获得一株可产紫杉醇的内生真菌YN6,并通过高效液相色谱法和质谱法对其紫杉醇进行分析.同时,通过对内生真菌YN6的形态特征分析以及18S rDNA序列分析将其初步鉴定为拟盘多毛孢属（Pestalotiopsis sp.）真菌. 拟盘多毛孢YN6的紫杉醇产量约为120~140 μg/L,是目前已报道的紫杉醇产量较高的野生菌株之一. 拟盘多毛孢YN6的发现为微生物发酵生产紫杉醇提供了潜在的优良种质资源.     

产紫杉醇内生真菌Z58的分离和鉴定

本研究从曼地亚红豆杉（Taxus x media）树皮内表皮分离得到一株产紫杉醇的内生真菌Z58,通过高效液相色谱法、质谱法和核磁共振波谱法对其紫杉醇提取物进行了分析. 结果表明,内生真菌Z58的紫杉醇提取物具有和紫杉醇标准品相近的色谱特征峰,其保留时间为10.2 min;也与紫杉醇标准品具有相同的质谱特征峰（（M+Na）+=876）和1H-NMR谱带.并通过形态学特征分析和18S rDNA序列分析,将内生真菌Z58初步鉴定为肉座菌属（Hypocrea sp.）真菌.肉座菌Z58的紫杉醇产量约为2.5～3.0 μg/g（紫杉醇/菌丝干重）,是一株具有潜在应用价值的产紫杉醇内生真菌.     

1株产紫杉醇内生真菌LNUF014的鉴定及产物检测

从红豆杉的韧皮部组织中分离得到的360株内生真菌中,通过对发酵粗提的检测,共筛选到11株产紫杉醇的真菌。其中1株内生真菌LNUF014的发酵液采用有机试剂抽提紫杉醇,经薄层层析和高效液相色谱分析,初步表明该菌株的紫杉醇类物质含量为53.68μg/L。根据形态学研究和真核生物18S rDNA基因序列分析,将其鉴定为镰刀菌属(Fusarium)。产紫杉醇内生真菌的研究将对紫杉醇类抗肿瘤药物的研制具有重要意义。     

一株产木质素降解酶真菌的分离与鉴定

从自然界中分离到一株产木质素降解酶真菌.平板显色反应显示,该菌株具有产多种木质素降解酶的能力,并通过酶活力测定得到证实.为确定该菌株的分类地位,对其ITS序列进行了扩增并测序,并利用MEGA4.0生物学软件计算其与同属其它菌株的遗传距离并构建系统发育树,在分子水平上确定它们之间的亲缘关系.试验结果表明,该菌株的ITS序列与Irpex lacteus乳白耙菌序列相似度达99%,且与Irpex lacteus XSD-2亲缘关系最近.     

降解鸡毛真菌板蜡蚧的鉴定及产酶培养优化

鉴定降解鸡毛真菌并通过单因素和正交实验优化其产角蛋白酶发酵培养条件.从加入鸡毛粉钓饵的医院花坛土中分离筛选获得3株角蛋白高效降解真菌,利用形态学和分子系统学鉴定均为板蜡蚧(Lecani-cillium testudineum).单因素实验表明,对优选菌株1Y2-12产酶能力具促进作用的碳源为乳糖,氮源为酵母膏,无机离子...