细菌蛋白的免疫学特性及其作为多糖蛋白结合疫苗载体的可行性

多糖蛋白结合疫苗(polysaccharide-protein conjugate vaccine)是将病原菌的荚膜多糖与载体蛋白通过共价结合的方式制备而成的疫苗。在上市的多糖蛋白结合疫苗中,载体蛋白(carrier protein)预先接种或共同接种时可能介导免疫干扰,降低结合物中多糖的免疫应答,影响疫苗接种效果。另外,多糖作为疫苗抗原有血清型别的限制,疫苗中所含的血清型别无法保护所有型别的细菌感染。因此,考虑将细菌自身具有保护性的抗原蛋白作为载体蛋白,其中,肺炎链球菌溶血素蛋白、金黄色葡萄球菌蛋白、B群链球菌菌毛蛋白和沙门菌表面蛋白都是目前经过实验室证实的具有免疫原性的载体蛋白。现对这些细菌蛋白的免疫学特性及其作为多糖蛋白结合疫苗载体的可行性作一概述。     

多糖蛋白结合物的纯化方法及应用

多糖蛋白结合疫苗相对于多糖疫苗成功的关键是其诱导了对于多糖的免疫记忆,增强了机体对病原菌的免疫应答。而结合物的纯度对结合疫苗的效果起着至关重要的作用。纯化方法的选择对于结合物制备的产率和成本具有重要意义,常用的结合物纯化方法种类多样,目前主要使用的纯化方法基于被分离物所带电荷、溶解度、分子大小进行分离纯化。现就这3类常用的多糖蛋白结合物的纯化方法及应用作一概述,为今后的研究提供参考。     

细菌性多糖蛋白结合疫苗免疫应答机制的研究进展

细菌性多糖蛋白结合疫苗是一类重要的、安全有效的预防疫苗。目前该疫苗在控制由流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌等引起的感染性疾病中已取得了巨大的成功,尤其是针对两岁以下的婴幼儿。然而,由于缺乏对其免疫激活机制的了解,多糖蛋白结合疫苗仍存在一些问题,如在高危人群中免疫原性较低。因此,了解细菌性多糖蛋白结合疫苗在机体内的免疫应答机制至关重要,以便设计更为合理的疫苗。传统的免疫机制认为,T淋巴细胞活化是由提呈的多肽诱导,即多糖蛋白结合物中载体蛋白部分的加工产物。近年来,已发现T细胞识别多糖的新机制,显示多糖蛋白结合疫苗的多糖部分积极参与T细胞活化。现就近年来细菌性多糖蛋白结合疫苗免疫应答机制的相关研究作一概述。     

离子色谱在多糖疫苗及多糖蛋白结合疫苗质量控制中的应用

离子色谱具有方便、快速、灵敏度高、选择性好、重现性好、准确度高、可同时分析多种离子化合物等优点,其中的高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)可直接分析糖类物质,可应用于多糖疫苗及多糖蛋白结合疫苗中多糖的分析。近年来,离子色谱应用在多糖及多糖蛋白结合疫苗的质量控制中,如测定疫苗中的多糖、游离糖、杂质多糖、对人有免疫原性的功能基团等的研究有许多报道,对有关内容进行了综述。     

不同蛋白载体的痢疾多糖结合疫苗小鼠免疫原性对比试验

试验中以小鼠为动物模型,对不同蛋白载体的痢疾多糖结合疫苗进行免疫效果观察。3种福氏2a痢疾结合疫苗和3种宋内氏痢疾结合疫苗分别皮下免疫NIH小鼠,同时设置O-SP(O-特异性多糖)对照组,免疫3针,在不同免疫针次间采血,用ELISA测定抗体滴度。单独使用福氏2aO-SP和宋内氏O-SP免疫后,小鼠血清中几乎没有抗LPS IgG抗体产生,而用结合疫苗免疫后,小鼠血清中产生了抗LPS IgG抗体,且第二次、第三次免疫后,小鼠血清中抗LPS IgG抗体水平有显著升高,表明结合疫苗具有加强免疫应答效应。三种不同的痢疾结合疫苗相比较,F2a-O-SP-rEPA结合疫苗较F2a-O-SP-TT结合疫苗和F2a-0-SP—DT结合疫苗的小鼠抗LPS IgG抗体水平高,S-O-SP-rEPA结合疫苗较S-O-SP-TT结合疫苗和S-O-SP—CRM9,结合疫苗的小鼠抗LPS IgG抗体水平高。以rEPA作为载体的痢疾结合疫苗比DT,TT作为载体的痢疾结合疫苗的免疫原性要强。     

伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液稳定性研究

目的评价伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液的稳定性,为该疫苗原液的制备、储存提供有力的数据支持。方法选取3批伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液分别放置于(37±2)℃、(25±2)℃和2~8℃温度下,根据稳定性研究方案定期取样,对其主要评价指标(多糖含量、结合物含量、相对分子质量、鉴别试验)进行检测,评估疫苗原液的稳定性。结果伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液于2~8℃放置22个月,(25±2)℃放置52 w,(37±2)℃放置24 w时,各项主要评价指标均符合其质量标准的要求。结论伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗原液稳定性良好,在2~8℃可稳定存放22个月。     

特异性抗原融合蛋白结核病疫苗研究进展

结核病是一种严重危害人类健康的重大传染病,由于BCG预防效果不佳,研制新型结核病疫苗迫在眉睫。研究开发新型结核病疫苗应根据机体抗结核杆菌感染的免疫应答特点、结合BCG的不足来开展。新型结核病疫苗主要分为三类:重组BCG或重组结核菌;重组痘病毒或重组腺病毒载体疫苗;蛋白抗原亚单位或重组融合蛋白抗原亚单位疫苗。由于蛋白亚单位疫苗可以不受机体已被分枝杆菌刺激的影响,能特异性地诱导CD4+Th1细胞和CD8+细胞毒性T细胞活化,并且使用安全性好,而备受研究者的青睐。目前主要是以BCG或重组BCG初次免疫,然后选择亚单位疫苗加强免疫作为结核病疫苗序贯免疫策略。然而,单个蛋白制成亚单位疫苗,其免疫效果有限,因此将多个具有保护效果的抗原或多肽表达成融合蛋白,联合适当的佐剂,制成融合蛋白亚单位疫苗。目前,已有一些融合蛋白亚单位疫苗进入临床试验阶段,更多的融合蛋白正处于研究阶段。     

液相色谱-ELISA测定结合疫苗中游离蛋白含量可行性的初步探讨

用适宜分离范围的色谱柱,预先确定细菌多糖蛋白结合疫苗载体蛋白的洗脱峰出峰时间;然后将细菌多糖-蛋白结合疫苗用相同条件进行分离,分部收集各洗脱峰并直接包被酶标板,与适宜浓度的载体蛋白特异抗体反应后,加入酶标二抗测定各洗脱峰样品中载体蛋白的吸光值;把载体蛋白出峰后的吸光值总和计为游离载体蛋白质吸光值;以游离载体蛋白吸光值占所有洗脱峰吸光值的比例计算游离载体蛋白含量。以伤寒Vi结合疫苗(载体蛋白rEPA)和甲型副伤寒结合疫苗(载体蛋白为TT)作为实验材料探讨方法的可行性。结果说明,该方法具有较好的特异性和敏感度。     

11价肺炎链球菌多糖-蛋白D结合疫苗在婴儿中的免疫原性和安全性[英]Narkka A…／／Pediatr Infect Dis J．

在过去的10年中，对于一系列以不同蛋白和多糖作为载体的多糖．蛋白复合物型抗肺炎链球菌疫苗的研究表明，在众多的疫苗中，只有1种带有CRM197载体蛋白的7价疫苗(PncCRM)能够有效地阻止致病性肺炎链球菌的感染。在欧美地区，这种疫苗广泛应用于高危人群，但其血清型是4、6B、9V、14、18C、19F和23F，缺少了亚洲等众多发展中国家普遍存在的血清型1和5。为了有效地抑制更多型别的肺炎链球菌，     

Hib多糖蛋白结合疫苗中残余氰化物检测方法的建立

为了保证多糖蛋白结合疫苗的生产质量,建立了高效离子色谱和电化学检测残余溴化氰(CNBr)的方法。结果显示,该方法用于Hib多糖蛋白结合疫苗的残余氰化物检测时,在10~100μg/L的测定范围内,具有良好的专属性、灵敏度、精密度、线性和准确度。该方法操作简便,检测时间仅需要10 min。该方法也适用于以溴化氰作为多糖活化剂的其他多糖蛋白结合疫苗的质量控制。     

Astragalus polysaccharide and sulfated epimedium polysaccharide synergistically resist the immunosuppression

The immunoenhancement of compound polysaccharides, APS-sEPS composed with astragalus polysaccharide (APS) and sulfated epimedium polysaccharide (sEPS), was observed in immunosuppressed model chicken induced by cyclophosphamide (Cy). 11-day-old chickens were injected with Cy once a day for three successive days except vaccine control group. At day-14-old, all chickens were vaccinated with ND vaccine, and in experimental groups simultaneously administrated with APS-sEPS at three dosages, APS and sEPS once a day for three successive days. On days 7, 14, 21 and 28 after the administration, the peripheral T-lymphocyte proliferation, serum antibody titers, IFN-γ, IL-2, IgG and IgM were determined. The results displayed that APS-sEPS could overcome Cy-induced immunosuppression, significantly promote T-lymphocyte proliferation and raised serum antibody titers, IFN-γ, IL-2, IgG and IgM levels, its high and medium doses were superior to single APS or sEPS. This demonstrated that APS and sEPS could synergistically resist the immunosuppression and APS-sEPS was an effective immunopotentiator.     

褐藻多糖

褐藻多糖主要包括褐藻胶、褐藻糖胶和褐藻淀粉。近年来研究表明,褐藻多糖有一定的抗癌、抗HIV-1作用。详细介绍了褐藻多糖的来源、类型、结构及性质;分离、提纯方法以及它们的生理活性和相关的构效关系研究。     

Micropattern immobilization of polysaccharide

Two types of polysaccharides, sulfated hyaluronic acid and heparin, were pattern-immobilized on a poly(ethylene terephthalate) and polystyrene film, respectively, in a specific pattern by photolithography. Sulfated hyaluronic acid was prepared from hylaronic acid by the treatment of sulfur trioxide/pyridine complex. Heparin was purchased and used without further treatment. The polysaccharides were coupled with azidoaniline. The derivatized polysaccharides were cast on a film from aqueous solution. After drying, the film was photo-irradiated in the presence or absence of a photomask. The micropatterning was confirmed by staining with a cationic dye. Platelet adhesion was reduced on the sulfated hyaluronic acid-immobilized areas. The immobilized sulfated hyaluronic acid significantly reduced thrombus formation. On the other hand, cells were cultured on the heparin-immobilized film. In the presence of fibroblast growth factor (FGF), the growth of mouse fibroblast STO cells was enhanced only on the heparin-immobilized regions. This result indicated that micropattern-immobilized heparin activated FGF for cell growth activity.     

植物多糖与免疫

综述了从自然界分离出来的植物多糖的研究进展和发展前景。讨论了从低等植物到高等植物所含多糖的免疫调节特性和作用以及它们的应用。     

Discoidin-binding polysaccharide from Dictyostelium discoideum

Extracts of Dictyostelium discoideum grown axenically in a chemically defined medium were evaluated for binding to discoidin I and discoidin II, endogenous lectins of this slime mold. Binding activity was measured by competitive inhibition of 125I-lactosyl-bovine serum albumin binding to the immobilized lectins. With the solubilization procedure used extracts of vegetative cells and of early aggregates had no significant inhibitory activity, but an abundant discoidin-binding substance was detected in late aggregates and fruiting bodies. This material was purified by ethanol and acid precipitation followed by precipitation with discoidin. It is a polysaccharide composed of 77% galactose, 15% N-acetylgalactosamine, 5% glucose, and 3% N-acetylglucosamine and may be a biologically functional ligand for the slime mold lectins, in particular discoidin II. Use of axenic cells was critical in these experiments, since extracts of Escherichia coli and Klebsiella aerogenes, commonly used as food for D. discoideum, were found to contain substances that react with discoidin. This would complicate isolation of endogenous discoidin ligands from cells raised on bacteria.