三氯生对原代大鼠卵巢颗粒细胞孕酮分泌影响的实验研究

目的:研究三氯生对原代大鼠卵巢颗粒细胞孕酮(P4)分泌功能的影响。方法:原代大鼠卵巢颗粒细胞培养备用。取备用的卵巢颗粒细胞采用不同浓度的三氯生(0、0.01、0.1、1μM)染毒。24 h后分别采用MTT法检测颗粒细胞的相对活力、酶联免疫法(ELISA法)检测颗粒细胞P4分泌水平、实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)及western blot法检测类固醇激素合成急性调节蛋白(St AR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)以及3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的基因及蛋白表达水平。结果:三氯生在本研究所采用的浓度范围内对颗粒细胞的活性并没有影响(P0.05);三氯生(0.1、1μM)可抑制颗粒细胞P4的分泌,且呈现剂量依赖性下降(P0.05)。三氯生(0.1、1μM)可使St AR的基因表达水平显著增高、P450scc的基因表达水平下降(P0.05)。1μM三氯生可使St AR及P450scc的蛋白表达水平明显降低(P0.05)。三氯生对3β-HSD的基因及蛋白表达水平皆没有影响(P0.05)。结论:三氯生可抑制原代大鼠卵巢颗粒细胞的P4分泌,对类固醇激素合成关键分子的影响可能是其作用机制之一。     

γ—氨基丁酸（GABA）对离体大鼠卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响

本文观察了ＧＡＢＡ对大鼠分散颗粒细胞生孕酮的影响。结果表明：当ＧＡＢＡ浓度为１０＾－＾６ｍｏｌ／Ｌ时明显促进颗粒细胞基础孕酮分泌（Ｐ＜０．０５）。但更高浓度（１０＾－＾５ｍｏｌ／Ｌ）时则表现抑制ＨＣＧ刺激孕酮生成的效应（Ｐ＜０．０２）。提示颗粒细胞的激素分泌功能可能受到ＧＡＢＡ的调控。     

籽鹅卵泡颗粒细胞烯醇化酶过表达模型的建立及其对孕酮分泌的影响

目的：建立廿烯醇化酶（EN01）腺病毒过表达载体转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞模型,探讨EN01过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。方法：采用EN01腺病毒过表达载体以梯度感染复数值（MOI）100、250、350、400pfu／cell转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞,于转染后2,4h、48h,荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白（GFP）表达。双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（EusA）研究EN01过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果：最佳转染条件是,当MOI为350pfu／cell,转染48h后,转染率达100％;通过荧光定量PCR与Westernblot法,检测到EN01mRNA与蛋白均过表达（P〈0．01）;与培养液组和腺病毒空载体组相比较,EN01过表达使颗粒细胞孕酮分泌量极显著增加（P〈0．01）。结论：EN01过表达会使体外原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞孕酮分泌量增加。     

不同培养时间对鸡卵泡颗粒细胞孕酮、雌激素分泌水平及FSHR、LHR基因表达的影响

目的：研究培养不同时间鸡卵泡颗粒细胞孕酮和雌激素的分泌水平,促卵泡素受体（FSHR）和促黄体素受体（LHR）的基因表达水平,推断体外培养时间对颗粒细胞激素分泌及相关受体基因表达的影响。方法：通过细胞体外培养的方法,分别于0 h、24 h、48 h、72 h、96 h收集鸡卵泡颗粒细胞上清液,采用ELISA法测定细胞上清液内的孕酮及雌激素分泌水平,并采用荧光定量PCR技术检测颗粒细胞内FSHR和LHR基因表达情况。结果：在培养初期0 h~48 h孕酮和雌激素分泌量显著降低（P < 0.05）,随着培养时间增加到72 h两种激素的分泌量又开始增加,并达到培养初期水平,培养至96 h细胞内孕酮和雌激素分泌量再次降低;颗粒细胞FSHR和LHR mRNA的表达水平则随着培养时间的增加而降低（P < 0.05）。结论：体外培养的卵泡颗粒细胞内孕酮和雌激素的分泌量随体外培养时间的延长呈先降低后升高的趋势,可能与体外培养细胞的生长状态相关,从整体上看随着培养时间的延长,细胞内孕酮和雌激素的分泌量均降低,可能与两种促性腺激素受体FSHR和LHR基因表达量下降相关。     

内皮素—1对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞产生孕酮的影响

本文用离体细胞体外孵育法研究了内皮素－１（ＥＴ）对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞孕酮生成的影响及其作用机理。结果发现,ＥＴ能显著抑制ｈＣＧ刺激下的孕酮产生,抑制作用在浓度为１０－８ｍｏｌ／Ｌ时,即有显著意义（Ｐ＜０．０５,ｎ＝６）,至１０－７ｍｏｌ／Ｌ时则有非常显著的意义（Ｐ＜０．０１,ｎ＝６）;不同浓度ＥＴ（１０－７—１０－７ｍｏｌ／Ｌ）,对颗粒细胞基础孕酮的产生无明显影响。进一步研究表明,ＥＴ对ｈＣＧ刺激下孕酮生成的抑制作用,在用免抗人内皮素抗血清（ＥＴ－Ａ）１：１０００及ｃＡＭＰ后能明显被逆转。实验中还观察到,ＥＴ使颗粒细胞ＬＨ／ｈＣＧ受体数下降,亲和力降低。本文结果提示,ＥＴ可能为卵巢内的一种局部调节肽,通过作用于ＥＴ受体,干扰ＬＨ／ｈＣＧ受体功能和ｃＡＭＰ生成而抑制颗粒细胞孕酮的产生。     

c-fos、c-myb和c-erbB-2与大鼠卵巢颗粒细胞生孕酮调控关系的研究

目的和方法:用离体细胞体外孵育法,观察反义c-fos、c-myb和c-erbB-2 寡脱氧核苷酸(c-fos ODN、c-myb ODN和c-erbB-2 ODN)对hCG诱导大鼠颗粒细胞孕酮产生的影响,同时观察内皮素-1、γ-氨基丁酸和钙离子通道阻断剂维拉帕米对颗粒细胞中c -fos、c-myb和c-erbB-2蛋白的影响.结果:反义c-fos、c-myb和c-erbB -2 ODN均明显抑制hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生,并伴有各自癌基因蛋白染色阳性的颗粒细胞百分率下降;而无义tat ODN没有相应的作用.2×10-7mol/L内皮素-1和5×10 -6mol/L γ-氨基丁酸能显著抑制hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生,同时使c-fos、c-my b和c-erbB-2蛋白染色阳性的颗粒细胞百分率下降;而1×10-6mol/L维拉帕米对hCG 诱导颗粒细胞孕酮的产生和c-fos、c-myb和c-erbB-2蛋白染色阳性的颗粒细胞百分率均无明显影响.结论:c-fos、c-myb和c-erbB-2与hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生密切相关;内皮素-1、γ-氢基丁酸能通过调节这些癌基因在颗粒细胞中的表达而影响hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生;而Ca2+无相应的作用.     

c—fos,c—myb和c—erbB—2与大鼠卵巢颗粒细胞生孕酮调？…

目的和方法：用离体细胞体外孵育法,观察肥义ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｂ和ｃ－ｅｒｂＢ－２寡脱氧核苷酸（ｃ－ｆｏｓ ＯＤＮ、ｃ－ｍｙｂ ＯＤＮ和ｃ－ｅｒｂＢ－２ ＯＤＮ）对ｈＣＧ诱导大鼠颗粒细胞孕酮产生的影响。同时观察内皮素－１、γ－氨基丁酸和钙离子通道阻断剂维拉帕米对细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｂ和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的影响。结果：反义ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｂ和ｃ－ｅｒｂＢ－２ ＯＤＮ均明显抑制ｈＣＧ诱导颗     

一种新的荧光孕酮探测鸡输卵管孕酮受体

我们用化学合成的方法,制备了6S(α-氨基丙酸)-异硫氰酸荧光素-孕酮(简称:6NHPF),对鸡的输卵管孕激素受体(PR)进行了观察。发现PR存在于腔上皮细胞核,在平滑肌肌细胞及输卵管近泄殖腔端不存在PR。在输卵管相邻的组织切片上用孕酮或6NHPF的中间体化合物抑制剂,发现对合成的荧光孕酮都能够竞争性抑制,证实了这种新的,亲水性的小分子荧光孕酮能与PR特异性地结合。     

促乳素对促性腺激素诱导小鼠卵巢雌激素和孕酮形成的影响

给幼龄小鼠（２１－２３日龄）注射８ＩＵＰＭＳＧ促滤泡生长。４８ｈ后给一组动物只注射８ＩＵｈＣＧ,另一组注射８ＩＵｈＣＧ加１００μｇ促乳素（ＰＲＬ）。３,１２和２４ｈ后杀死动物,取血和卵巢,从后者分离颗粒细胞（ＧＣ）作离体培养。测定血清和培液中雌激素和孕激素含量表明,ＰＲＬ显著增强ｈＣＧ所致血中孕酮含量上升,但抑制ｈＣＧ所致雌激素的产生;对ＧＣ离体培养的测定结果也完全相同,上述结果表明,ＰＲＬ抑制Ｈ     

人血清极低密度脂蛋白体外代谢的研究

本文利用脂蛋白脂肪酶(LPL)在体外研究人血清极低密度脂蛋白(VLDL)的代谢变化,及其与其他脂蛋白的关系。发现在适宜条件下,LPL水解VLDL核中的甘油三酯(TG),释放游离脂肪酸(FFA),同时VLDL浊度变小,透光度增加。反应后产物通过密度梯度超速离心方法分离,发现分解代谢产物在密度为1.020～1.045g/ml之间有新生组分产生,其电泳迁移率增快,着色带增宽。电镜观察这些新组分的颗粒比天然VLDL为小,而比低密度脂蛋白(LDL)为大,并有空泡状不规则脂质体的单层形成,以及一些非球形、具有触角或尾巴状的构形,很可能是脂解后VLDL的过剩表面,是新生高密度脂蛋白(HDL)的前体。这些结果说明人血清VLDL经LPL分解代谢后,其结构,形态和组分均发生了明显的变化。     

aFGF对大鼠卵巢颗粒细胞生长及分化的影响

卵巢颗粒细胞的生长及分化影响卵泡的发育,在卵巢生殖机能中占重要地位。除已知卵泡刺激素(FSH)可影响颗粒细胞的生长及分化外,近年发现,一些肽类物质特别是生长因子如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子(FGFs)、胰岛素样生长因子等都可影响颗粒细胞的生长及分化,参与卵巢生殖机能的调控。FGFs是一类多功能因子,具有广泛的生     

人工合成寡肽对大鼠黄体细胞孕酮生成的调节及其可能作用机制

本实验比较了合成寡肽抗孕酮生成作用,并进行了相应机制探讨。发现当ＰＨ７．３－７．５时,能较强抑制孕酮分泌的寡肽其结构有共同特点;活性寡肽可对ＰＬＣ信使传递系统产生抑制作用。也可能通过调节黄体细胞内钙离子浓度降低了ｈＣＧ致孕酮的生成作用,甘－丝－赖还升高黄体细胞中ＰＫＣ活性,而降低了ＰＫＡ。可见人工合成寡肽的抗孕酮作用分子机制十分复杂,有待于深入探讨。     

恒河猴血清孕酮含量测定方法

目的建立恒河猴血清中孕酮含量测定方法。方法本文采用放射免疫测定技术。结果孕酮的回收率为94％,批内CV为5．1％～8．3％,批间CV为4．5％～7．7％,灵敏度为5～10Pg。说明该方法具有较高的灵敏度、特异性、准确性。分别测定了幼年组、成年组和老年组的雌性恒河猴的血清中的孕酮含量分别为：（0．20±0．04）ng／mL、（6．26±0．17）ng,mL和（0．35±0．06）ng/mL;成年雌性恒河猴月经周期孕酮的变化范围为：滤泡期为（1．10±0．12）ng／mL,排卵期（2．36±0．18）ng/mL,黄体期（6．17±0．15）ng/mL,妊娠期随着妊娠月份的增加,孕酮浓度也增加,最高可达50ng／mL。结论经实验验证,该方法灵敏、可靠、适用,可作为恒河猴血清中孕酮含量测定的一种方法。     

肾上腺素和去甲肾上腺素对离体大鼠颗粒细胞雌二醇生成的影响

本工作采用离体孵育大鼠颗粒细胞的方法,观察了肾上腺素和去甲上腺素对颗粒细胞雌二醇生成的影响,为进一步探讨其作用机制,实验还观察了β－肾上腺素能受体阻断剂心得安,外源性ｃＡＭＰ和腺苷酸环化酶激动剂对肾上腺素和去甲肾上腺素诱导颗粒细胞雌二醇生成的影响,结果发现,肾上腺素和去甲肾上腺素可明显促进离体大鼠颗粒细胞雌二醇的生成,此作用可被心得安阻断,外源性ｃＡＭＰ和Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ可促进肾上腺素和去甲肾上     

孕酮对豚鼠心室肌细胞动作电位的影响

目的：观察孕酮(pfogesterone)对心室肌细胞动作电位的影响。方法：采用玻璃微电极技术,引导离体豚鼠心室乳头肌细胞动作电位,观察孕酮不同浓度及作用时间对心室肌细胞动作电位及有效不应期的影响。结果：①较高浓度的孕酮使心室肌细胞动作电位零期最大除极速率(Vmax)和动作电位幅度(APA)降低,使心室肌细胞有效不应期(ERP)延长;②较高浓度孕酮使心室肌细胞动作电位时程APD20缩短;使动作电位时程APD90、APD延长。结论：孕酮具有抑制心室肌细胞Na^ 通道、K^ 通道和Ca^2 通道的作用。     

血小板活化因子对大鼠卵巢颗粒细胞垂体腺苷酸环化酶激活肽mRNA表达的影响及调节机制

目的：探讨血小板活化因子（PAF）对大鼠卵巢颗粒细胞垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）mRNA表达的影响及其可能调节机制,旨在寻找PAF在卵巢中的作用靶点。方法：原代培养卵巢颗粒细胞,用放射免疫分析（RIA）及逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测颗粒细胞雌二醇分泌情况及其PACAP mRNA表达变化．结果：PAF对PACAP mRNA表达无明显影响,但与hCG共同作用可促进PACAP mRNA的表达：Forkolin可使PACAP mRNA表达升高。结论：PAF可通过对hCG的允许作用间接促进大鼠卵巢颗粒细胞PACAP mRNA表达,hCG的促进作用可能是通过cAMP—PKA途径介导的。     

阿片肽类物质对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响

本文观察了外源性阿片肽对大鼠离体黄体细胞孕酮生成的影响,结果表明:β-内啡肽以剂量-反应依赖方式促进黄体细胞孕酮生成,有效浓度范围是10~(-8)-10~(-6) mol/L;强啡肽仅在浓度为10~(-6)mol/L时才显示刺激孕酮生成的作用;而甲硫-脑啡肽无明显作用。μ-阿片受体激动剂DAGO和乙基吗啡也能明显促进孕酮的生成。纳洛酮可完全阻断β-内啡肽,DAGO和乙基吗啡的作用。由于大鼠血液中β-内啡肽含量较低,而卵巢局部具有较高浓度的β-内啡肽。因此,我们认为,β-内啡肽可能在卵巢局部参与黄体细胞孕酮生成的调节,是卵巢内促黄体因子之一,这种作用可能是由μ-型阿片受体介导的。     

脱氢表雄酮对人早期胎盘孕酮分泌的影响

采用绒毛组织体外卵育模型,观察了脱氢表雄酮对人早期胎盘滋养层组织孕酮分泌的可能影响。结果表明,高浓度（１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ以上）的脱氢表雄酮及其硫酸盐可以显著地抑制体外卵育的人早期胎盘滋养层组织的孕酮分泌（Ｐ〈０．００１）,低浓度则无效应。脱氢表雄酮及其硫酸盐抑制孕酮分泌的影响不依赖于其芳香化产物雌激素。芳香化酶抑制剂４－羟基雄烯二酮也能抑制孕酮分泌（Ｐ〈０．００１）,但其作用可被１７β－雌二醇逆     

卵巢颗粒细胞凋亡的调控因素

卵泡闭锁是哺乳动物卵巢中一种普遍现象,其实质是由卵巢颗粒细胞凋亡造成的。颗粒细胞的状态已经成为衡量卵母细胞质量乃至胚胎发育能力的一个重要参考指标,因此对颗粒细胞的凋亡开展研究显得十分必要。调控颗粒细胞凋亡的因素有多种,本文从与颗粒细胞凋亡相关的激素、与颗粒细胞凋亡相关细胞因子和与颗粒细胞凋亡相关的基因三方面对卵巢颗粒细胞凋亡的调控因素进行综述。     

血清孕酮诱导阻断因子对早产的预测价值研究

通过分析母体血清中孕酮诱导阻断因子(PIBF)的浓度,对采样和早产之间的时间间隔进行预测。对37名有先兆早产孕妇和41名健康孕妇在孕第24～28周期间进行了一项前瞻性的研究工作。在37名患有征兆子痫的患者中有11名患者早产。研究中将所有孕妇分为3组:早产孕妇、先兆早产孕妇和健康孕妇。在分娩前5天内采集的样本的PIBF浓度(22.17±6.19) ng/mL明显低于之前采集的样本浓度(31.33±6.78) ng/mL,并且明显低于健康孕妇采集的样本浓度(69.65±12.38) ng/mL;采样和分娩之间的平均时间间隔为(4.1±1.8)d。多元回归分析每个观测值对早产起到的作用,结果表明PIBF的缺乏对早产有显著影响(p=0.002)。采用受试者工作特征(ROC)分析来评估PIBF的诊断准确性。ROC曲线的面积(AUC)为0.956 (95%CI=0.884～0.989;p0.000 1),因此PIBF在预测早产上具有优异的诊断价值。在分娩前5天内,可以通过低于正常妊娠的PIBF值来预测妊娠终止,因而有助于有助于早产的诊断。