非离子型去垢剂与细胞色素P-450的相互作用

细胞色素P-450与底物结合后,可产生底物诱导光谱。我们发现非离子型去垢剂Lubrol PX也可诱导细胞色素P-460产生Ⅰ型底物诱导光谱。这是由于Lubrol PX与细胞色素P-450的位点Ⅰ产生了结合,这种结合对Ⅰ型底物的羟化有竞争抑制作用。Lubrol PX对重组的细胞色素P-450酶系活力也有抑制作用。     

微粒体细胞色素P-450、NADPH-细胞色素P-450还原酶的纯化与重组活性

经苯巴比妥钠诱导的雄性大白鼠的肝微粒体纯化的细胞色素P-450同功酶组份,经SDS-PAGE鉴定呈电泳纯,分子量为55kD。部分纯化的NADPH-细胞色素P-450还原酶,含72和77kD两个蛋白质组分。上述细胞色素P-450和NADPH-细胞色素P-450还原酶与卵磷脂制备的脂质体重组后的活性试验表明,对艾氏剂有环氧化作用,对环已烷有羟化作用,对溴氰菊酯的羟化作用微弱。当重组系统中缺少细胞色素P-450组份时,对环已烷不再起作用。同时还研究了纯化的细胞色素P-450的光谱特性。     

用低G／C％含量引物通过PCR扩增家蝇细胞色素P—450 cDNA

根据昆虫细胞色素P-450基因的多型性和遗传多态性,以苯巴比妥钠诱导、室内饲养的杀虫剂敏感种群雌性家蝇Musca omestica vicina Macquart为材料,提取总RNA,以0ligo(dT)-纤维素亲和层析分离出总mRNA;以此为模板反转录合成总cDNA。再以总cDNA为模板,以P-450CYP6A1cDNA序列为参考设计一对低G/C%含量引物,进行PCR扩增,获得1.5kb左右的预期目的片段。     

氰戊菊酯和苯巴比妥钠对敏感和抗性棉铃虫中肠多功能氧化酶系的诱导作用

用苯巴比妥钠（2mg/g）和氰戊菊酯（0.2mg/g）拌饲料处理,对敏感品系棉铃虫Helicoverpa armigera中肠的细胞色素P450和细胞色素c还原酶含量均具有明显的诱导作用（两者都使细胞色素P450含量提高了2.24倍,使细胞色素c还原酶的含量分别提高1.33和1.40倍）,但对细胞色素b5诱导作用不显著（仅为对照的1.23和1.15倍）;此外,苯巴比妥钠对敏感棉铃虫中肠的艾氏剂环氧化酶活性和甲氧试卤灵-O-脱甲基酶活性也有显著的诱导作用（分别提高了2.75和2.66倍）,但对7-乙氧香豆素-O-脱乙基酶活性没有诱导作用,而氰戊菊酯对敏感棉铃虫中肠的艾氏剂环氧化酶活性则有2.02倍的诱导作用。同一浓度的苯巴比妥钠和氰戊菊酯使抗性品系棉铃虫中肠的细胞色素P450含量分别提高1.21和1.15倍,使细胞色素c还原酶含量分别提高1.48和1.86倍（差异显著）,但是细胞色素b₅含量没有明显变化（分别为对照的1.15和0.98倍）;此外,氰戊菊酯能使抗性棉铃虫中肠的艾氏剂环氧化酶活性提高1.53倍,但苯巴比妥钠对该酶活性则有明显抑制作用。     

产绿原酸内生菌细胞色素P450基因的克隆和功能研究

以一株产绿原酸的内生枯草芽孢杆菌为基础,对其绿原酸途径的关键酶基因进行克隆和功能研究。克隆该内生菌的细胞色素P450基因并进行原核表达,对重组蛋白进行肉桂酸羟基化酶(C4H)酶活测定。结果显示,从内生菌中克隆了4个细胞色素P450酶系基因并进行了原核表达,其中P-4重组蛋白具有C4H活性,产生的香豆酸与LC-MS检测的结果一致,该酶的最适温度范围较宽,产物香豆酸对该酶有抑制作用。该内生菌可能利用其细胞色素P450酶系作为C4H的同工酶从而将产物导入绿原酸合成途径。     

细胞色素P-450在昆虫的适应性和抗药性中的作用

<正> 前文介绍了细胞色素P-450的分子特性和光谱特性、P-450的多样性、诱导性及其分子机理。鉴于这些特性对药剂的代谢、选择毒性、对寄主植物的适应性以及抗药性的重要性,本文简要地介绍细胞色素p-450(简称P-450)是如何发挥其保护作用的,以及与昆虫化学防治的关系。 一、P-450对昆虫的保护作用     

细胞色素P-450研究概况

肝细胞色素P-450是人及动物体内,代谢内源性及外源性化合物的一族酶,其氧化药物的机制已被进一步阐明,并发现P-450虽可使大多数外源性化合物代谢解毒,但也与某些药物的毒性作用以及化学致癌有关。现已证明,肝内有多种形式的P-450,分别为不同的诱导剂所诱导。它们在光谱特性、底物特异性以及催化反应等方面有明显的区别,并证明酶的诱导是由特定基因调节的。此外,近年来多种P-450的分离分析方法也有了一定的提高。     

细胞色素P-450研究概况

肝细胞色素P-450是人及动物体内,代谢内源性及外源性化合物的一族酶,其氧化药物的机制已被进一步阐明,并发现P-450虽可使大多数外源性化合物代谢解毒,但也与某些药物的毒性作用以及化学致癌有关。现已证明,肝内有多种形式的P-450,分别为不同的诱导剂所诱导。它们在光谱特性、底物特异性以及催化反应等方面有明显的区别,并证明酶的诱导是由特定基因调节的。此外,近年来多种P-450的分离分析方法也有了一定的提高。     

细胞色素P-450酶系的研究进展

<正> 细胞色素P-450酶系(简称P-450)因其在内源性和外源性的化学物质尤其对各种杀虫剂和环境有害化学物质的氧化代谢方面起着重要的作用,而受到广泛的重视。该酶系还在昆虫对杀虫剂的抗性机制以及选择毒性中,昆虫对寄主植物的适应性等方面都起着重要作用。     

真菌-氧化氮还原酶细胞色素P-450nor 2 cDNA序列的测定

在真菌的反硝化作用中,一种细胞色素P-450起着一氧化氮还原酶的作用,被称为细胞色素P-450nor^[1]。最近的研究发现：真菌细胞色素P-450nor有三种类型。除了缣孢菌(Fusarium oxysporum)P+450nor(即F．P-450nor)外。还有两种存在于柱孢菌(Cylindrocarpon tonkinense)．即C. P-450norl和2^[2]。 F．P-450nox和C．P-450norl能以NADH为直接的电子供体,使NO还原生成N₂O。C. P-450nor2不仅能直接利用NADH。而且能直接利用NADPH．还原NO生成N₂O。F. P-450nor基因已被克隆和测序^[3-4]。本文测定了C．P-450nor2的eDNA编码区全序列,3’非编码区部分序列和5’引导序列。     

昆虫细胞色素P450研究:P450基因

细胞色素P450广泛存在于生物界,它因参与许多外来物质和内源性物质的代谢而具有十分重要的作用［1－5］细胞色素P450的研究大约有50多年的历史[3]。60年代的工作主要是对这一血红素蛋白的生物化学和生物物理学特征的了解以及膜结合P450酶系的酶学功能[3]。70年代的研究集中在细胞色素P450酶系的分离纯化及其活性的重组。纯化P450的成功证明了许多P450在物理学和酶学特征方面的不同,也为制备抗体及利用抗体来确定某种P450的存在与数量以及抑制特定P450的酶活性提供了手段,使进一步阐明P450的反应机制成为可能。80年代分子生物学技术的…     

溴氰菊酯对家蝇细胞色素P-450含量的影响

本文研究了溴氰菊酯对正常品系雌性家蝇Musca domestica vieina腹部微粒体细胞色素P-450的诱导作用.结果表明溴氰菊酯对P-450有一定的诱导作用,在低于LD₅₀的波度范围内,浓度高的溴氰菊酯作用较明显,浓度低的溴氰菊酯在重复处理家蝇后也显示出诱导作用.这种诱导作用在24小时内有随时间的延长而增强的趋势.另外对照组与处理组的P-450 CO差光谱的特征吸收峰的波长均为451nm,表明诱导作用未改变P-450的光谱性质.     

艾氏剂环氧化酶及细胞色素P-450对小菜蛾抗药性发展的影响

本文对室内长期饲养的小菜蛾(Plutella xylostella L.)敏感品系和田间采集的抗性种群体内的艾氏剂环氧化酶及细胞色素P-450进行了比较研究。结果证明,艾氏剂环氧化酶在感性和抗性小菜蛾间存在着量及质的差异。 抗性种群的艾氏剂环氧化酶的Vmax和Km值分别为感性品系的5.4倍和6.5倍。抗性种群的细胞色素P-450的含量是感性品系的1.1-1.3倍。艾氏剂环氧化酶在量上及质上的差异及细胞色素P-450含量的提高是导致小菜蛾抗药性发生与发展的重要机制之一。而且质的差异较之量的差异可能起着更为重要的作用,     

细胞色素P450介导的果蝇抗药性研究进展

细胞色素P450 (cytochrome P450, CYP450)超基因家族是由一些数量多而功能复杂的血红蛋白酶基因所组成,该代谢酶系作为一种几乎地球上所有需氧生物都存在的重要生存策略,可以调控多种内源物质及外源化合物的代谢,参与了众多重要的生命过程,代谢解毒作用是该酶系重要功能之一。细胞色素P450的代谢解毒作用受药物影响,机体通过改变基因表达量,实现增强代谢解毒,加快机体对于有害物质的代谢,从而使得机体对有害环境产生一定的适应性,进而使得机体产生耐药性或抗药性。本研究说明果蝇细胞色素P450介导的杀虫剂类药物代谢机制及代谢抗性的特点等方面的研究,对明确果蝇的抗药性机制研究具有参考意义。     

细胞色素P450酶系与除草剂代谢

细胞色素P450是广泛存在于动物、植物和微生物体内的一类具有混合功能的血红素氧化酶系。它不但能够催化苯丙烷类、萜类化合物和脂肪酸等内源性物质的生物合成 ,而且参与许多外源性物质包括除草剂等的生物氧化。综述了代谢除草剂的细菌、哺乳动物和植物细胞色素P450酶系 ,概述了细胞色素P450酶系参与除草剂代谢的作用方式 :脱烷基化作用、环甲基化羟基化作用和芳环的羟基化作用等。这些细胞色素P450酶系在培育除草剂抗性作物、生物安全和生物修复方面表现出了巨大的潜能     

昆虫中的细胞色素P-450及其特性

<正> 细胞色素P-450在微粒体多功能氧化酶系(MFO)中起着关键性作用。它能与氧分子和底物结合,并参与氧的活化。因此,P-450在杀中剂代谢、昆虫的选择毒性和抗药性、在保幼激素和脱皮激素的代谢以及在昆虫对寄主植物的适应性中都有着极其重要的作用。 自50年代后期以来,人们不仅对P-450的分子性质、光谱性质和多样性进行了详细研究,而且对P-450与P-450-还原酶、磷脂的相互关系及其在膜中的结构也进行了研究。目前     

P450酶在植物三萜化合物生物合成中的催化与调控

植物三萜化合物是一类具有6个C₅异戊二烯单元的高附加值天然化合物,具有抗炎、护肝、抗肿瘤、抗氧化和降血压等重要药理活性。在三萜化合物生物合成过程中,细胞色素P450酶通过引入羟基、羧基、羰基以及环氧基等官能团,为丰富三萜结构的多样性起到了重要的作用。然而,目前P450酶底物催化特异性机制仍不清晰,异源底盘细胞中表达率低、与细胞色素氧化还原酶(CPR)的适配性差限制了其在植物三萜化合物微生物异源合成中的应用。本文系统地介绍了植物三萜化合物的合成途径、P450酶的催化系统组成和催化机制。通过P450酶的理性与非理性的分子改造,P450酶及其CPR的适应性匹配以及关键代谢途径的区室化研究,以期为P450酶在高效合成三萜化合物的应用提供研究思路。     

热带假丝酵母多倍体变种的细胞色素P450和尿素在烷烃代谢中的作用

建立了可行的细胞色素 P450测定方法。考察了以烷烃为单一碳源的酵母细胞色素P450的一氧化碳差示光谱,峰值约为455nm。观察了烷烃培养的酵母细胞色素 P450在生长期中的消长。比较了十四醇、十四醇添加苯巴比妥、以及正十四烷等三种不同培养条件下酵母细胞色素P450的含量和发酵产物的成份。结果表明,细胞色素 P450为烷烃转化成二元酸所必需。烷烃为单一碳源培养酵母时,培养基中过量尿素(0.2%以上)促进烷烃利用和酵母生长,降低细胞色素 P450生成和二元酸的积累。根据上述实验结果和本研究室以前报道,提出了烷烃代谢调控模式。     

棉铃虫6龄幼虫中肠与脂肪体微粒体P450酶系的比较

报道了棉铃虫6龄幼虫中肠和脂肪体微粒体P450酶系的组成与加单氧酶活性。与脂肪体微粒体相比,中肠策粒体具有更高的细胞色素P450,细胞色素b5和NADPH－细胞色素P450还原酶含量,表现出较高的艾氏剂环氧化酶和对－硝基苯甲醚O－脱甲基酶活性。SDS－PAGE电泳显示,中肠与脂肪体微粒体介于P450分子量范围内（45－60kDa)的蛋白图谱有所不同,反映出中肠和脂肪体微粒体蛋白组成存在差异。通过对－硝基苯甲醚O－脱甲基酶的动力学分析发现脂肪体微粒体的对－硝基苯甲醚O－脱甲基酶对底物有更强的亲和性,表明不同组织来源的P450同功酶存在质的不同。     

地塞米松对从江香猪细胞色素氧化酶P450 3A29 mRNA表达的影响

从江香猪是全国稀有的微型猪种,其细胞色素氧化酶P450基因纯合度较高,遗传稳定,具备开发药物代谢动物模型的良好基础。本研究旨在应用实时荧光定量方法研究从江香猪细胞色素氧化酶P450 3A29 mRNA的组织分布及地塞米松对其表达的影响,并比较与人细胞色素氧化酶P450 3A4的相似性。结果表明,从江香猪细胞色素氧化酶P450 3A29 m RNA的组织分布特征及地塞米松对其诱导作用总体上与人体相似,从江香猪可用于人细胞色素氧化酶P450 3A4的诱导研究。