静脉注射和气管内滴入博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的差异

目的 探讨静脉注射和气管内滴入博莱霉素(BLM)对小鼠肺纤维化形成的差异.方法 8周龄雌性C57BL/6小鼠40只,随机分为静脉注射组(V组)20只、气管内滴入组(I组)20只,分别经尾静脉一次性注射BLM 150 mg/kg和气管内滴入BLM 5 mg/kg.观察每组小鼠生存率、肺组织病理改变及肺组织羟脯胺酸的含量.结果 ① V组和I组小鼠的生存率分别为50%和75%,两者间统计学无显著性差异(P>0.05).②注射处置后28 d,两组小鼠均形成广泛、稳定的间质纤维化病理改变,但I组主要分布在肺门和支气管周围,而V组主要分布在胸膜下及血管周围.肺纤维化病理评分I组与V组之间无显著的统计学差异(P>0.05).③小鼠注射处置后28 d,V组与I组肺羟脯氨酸含量分别为634.4±67.1 μg/g和696.6±41.2 μg/g,两组间无显著的统计学差异(P>0.05).结论 利用BLM静脉注射和气管内滴入制备肺间质纤维化动物模型,纤维化形成的部位存在着一定的差异,而肺间质形成纤维化的程度和病理改变大致相同.     

不同剂量博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的差异及动态变化

目的探讨博来霉素诱导小鼠肺纤维化最佳剂量和方法。方法 126只8周龄雄性ICR小鼠,随机分成一次性大剂量模型和多次小剂量模型。一次性大剂量模型分为200 mg/(kg.bw)BLM组、150 mg/(kg.bw)BLM组、100 mg/(kg.bw)BLM组及阴性对照组(DN组),每组18只,分别经尾静脉一次性注射BLM 200、150、100mg/(kg.bw)及生理盐水10 mL/(kg.bw),各组分别于第7、14、21天各处死6只。多次小剂量模型分为每日10 mg/(kg.bw)BLM组及阴性对照组(N组),分别经尾静脉注射BLM 10 mg/(kg.bw)及生理盐水10 mL/(kg.bw),每天1次,连续注射14 d,两组分别于第14、21、28天各处死6只。留取肺组织,观察肺组织病理改变,检测Ⅲ型胶原的含量,观察小鼠体重及生存率。结果①在一次性大剂量模型中,BLM各剂量组肺泡炎症评分及肺纤维化评分与正常组相比,除100 mg/(kg.bw)BLM组和150 mg/(kg.bw)BLM组在第7天的模型差异无显著性外(P>0.05),其余各组差异均有显著性(P<0.05);各个剂量组Ⅲ型胶原的表达面积与正常组相比,除100 mg/(kg.bw)BLM组在第7天的模型差异无显著性外(P>0.05),其余各组均较正常组高(P<0.05),各个剂量组分别在第21天达到高峰,以200 mg/(kg.bw)BLM组第21天组Ⅲ型胶原的表达面积最高;该模型小鼠各剂量组死亡率为0。②在多次小剂量模型中,各组的肺泡炎症与肺纤维化程度与正常组相比差异均有显著性(P<0.05);各组Ⅲ型胶原的表达也均高于正常组(P<0.05),且随着时间的延长呈进行性增加,在第28天达到高峰;该模型小鼠共死亡11只,死亡率为30.56%。结论在本实验中,以尾静脉一次性注射BLM 200 mg/(kg.bw)后第21天诱导建立的ICR小鼠肺纤维化模型成模最好,其小鼠死亡率低,操作简单,有效安全方便的特点使之有希望成为一种复制肺纤维化的理想模型。     

虫草提取物对肺纤维化小鼠的抗氧化作用研究

目的：探讨虫草提取物对小鼠肺纤维化过程中脂质过氧化的影响。方法：昆明种小鼠144只,随机分为假手术组、模型组、虫草提取物高、中、低剂量组和醋酸泼尼松组,每组24只。除假手术组外其余各组小鼠采用气管内一次性滴注盐酸博莱霉素,假手术组小鼠气管内一次性滴注等体积生理盐水。造模后第二天开始给药,假手术组和模型组分别灌服等体积的生理盐水。各组动物于7,14,28d随机处死8只,分别观察各组小鼠肺系数、肺组织羟脯氨酸（HYP）、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性及血清中MDA的含量和SOD的活性,并取固定部位肺组织做病理组织学检查。结果：虫草提取物能明显降低肺纤维化小鼠肺系数和肺组织HYP的含量,并可提高血清和肺组织中SOD的活性,降低血清和肺组织中MDA的含量。病理组织学检查表明,虫草提取物明显改善实验性小鼠肺纤维化。结论：虫草提取物对小鼠肺纤维化具有一定的干预作用,其机制可能与抗脂质过氧化有关。     

三七总皂甙对博莱霉素所致小鼠肺纤维化的干预作用

目的:观察三七总皂甙(PNS)对实验性小鼠肺纤维化的干预作用。方法:小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、醋酸泼尼松组和PNS大、中、小剂量组。通过气管内注入博莱霉素(BLM)复制小鼠肺纤维化模型,于造模后第2天各治疗组开始给药,于给药后第7、14、28 d处死部分小鼠,取肺组织,行HE染色,并测定肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量。结果PNS能减少实验性肺纤维化小鼠肺组织中胶原沉积及降低肺系数(P<0.05,P<0.01),减轻肺部的病理损害(P<0.05,P<0.01)。结论:PNS对BLM诱导产生的小鼠肺纤维化有一定的抑制作用。     

罗勒多糖对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的作用

目的：研究罗勒多糖对博莱霉素诱导肺纤维化小鼠肺组织病理的影响。方法：将40只C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组,模型组,罗勒多糖高、中、低剂量组。模型组和罗勒多糖组小鼠,气管注射博来霉素（1.5mg/kg）,诱导其肺纤维化,假手术组注射等量生理盐水同法造模。罗勒多糖组小鼠每天用100、50、25mg/kg罗勒多糖,假手术组、模型组小鼠同法给药相应剂量的生理盐水,每天给药。造模28d后处死小鼠,肺组织病理切片进行HE和Masson染色,观察肺泡炎和肺纤维化程度,ELISA检测肺组织羟脯氨酸含量。结果：与模型组相比,罗勒多糖不同剂量组小鼠肺组织胶原染色明显减少,肺泡间隔增厚程度较轻,区域性实质性病变少见,炎症细胞浸润减少,纤维化程度均有所减轻,羟脯氨酸含量下降,中、高剂量组优于低剂量组。结论：罗勒多糖能减轻博莱霉素诱导肺纤维化小鼠肺组织炎症和肺纤维化程度,是一种潜在的可用于特发性肺纤维化（IPF）治疗的中药提取物。     

博莱霉素静脉注射制备小鼠肺间质纤维化模型

目的经尾静脉一次性注射博莱霉素(BLM)复制小鼠肺间质纤维化动物模型,并观察模型的肺组织病理学变化。方法8周龄雌性C57BL/6小鼠66只,随机分为BLM80组18只、BLM150组19只、BLM300组19只和对照组10只,分别经尾静脉一次性注射BLM80、150、300 mg/kg和生理盐水。结果①BLM80组和BLM150组小鼠最低体重分别为BLM注射前的84%和65%。②BLM80组、BLM150组、BLM300组和对照组小鼠的生存率分别为:100%、43%、0和100%。③BLM150组BLM注射后14 d、28 d,右肺羟脯氨酸含量分别为738±46 nmol、886±83 nmol,与对照组(360±75 nmol)比较差异均有显著性意义(P<0.01)。④BLM150组小鼠BLM注射28 d,在胸膜下及血管周围形成广泛、稳定、明显的纤维化改变。BLM150组与BLM80和对照组比较,肺纤维化病理评分分别呈明显增高(P值均小于0.001)。结论C57BL/6小鼠经尾静脉一次性注射BLM150mg/kg可以制备肺间质纤维化动物模型。     

博莱霉素同系物对癌基因表达的影响

应用快速酶联免疫法（ELISA）及Northern印迹杂交法研究了博莱霉素（BLM）同系物诱导癌基因表达的作用．通过检测P21和c－myc蛋白表达的改变和药物在RNA的转录水平上对癌基因表达的影响,证明BLM能够抑制c－myc基因的表达．这种抑制作用不仅发生在蛋白质的翻译水平,而且可能发生在RNA的转录水平上．BLMA6及A2对Ras基因亦有极显著的抑制,提示其亦为以p21蛋白为靶点的抗癌抗生素．A6、A2与A5之间的区别提示在同系物之间可能存在不同的抗癌机理     

腺苷A2a受体在博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用

目的：观察腺苷A_2a受体（A_2aR）在小鼠肺纤维化形成中的调控作用。方法：30只雄性SPF级野生型BALB/C小鼠和20只A_2aR基因敲除BALB/C小鼠,随机分为以下5组：野生型小鼠对照组（A组）、野生型小鼠纤维化组（B组）、A_2aR基因敲除小鼠对照组（C组）、A_2aR基因敲除小鼠纤维化组（D组）、野生型小鼠纤维化+A_2aR激动剂（CGS21680）组（E组）,每组各10只。纤维化组小鼠气管内注入博莱霉素（bleomycin,BLM）溶液50μl （5 mg/kg体重）,对照组在气管内注入等体积生理盐水,注射后立即将小鼠直立旋转3~5 min,使其均匀分布于两肺。A、B、C、D各组每天腹腔注射生理盐水0.5 ml,E组每天腹腔注射A_2aR激动剂（CGS21680）0.5 ml （0.25 mg/kg体重）,连续28 d。第29天取血检测血清转化生长因子β1（TGF-β1）含量;检测肺组织中羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）、TGF-β1和A_2aR蛋白质含量,TGF-β1 mRNA、A_2aR mRNA的表达,并观察肺组织光镜和超微结构。结果：①光镜和超微结构提示,B组肺泡壁增厚破坏,肺泡腔狭窄或部分陷闭,纤维增生,炎细胞浸润,I型、Ⅱ型肺泡上皮细胞明显空泡化,D组较B组明显,E组表现较B组减轻。Masson染色提示B组、D组小鼠肺组织纤维增生明显,E组明显减少,提示基因缺失加重了小鼠肺纤维化的形成。②与A组比较,B组血清TGF-β1含量,肺组织Hyp含量,TGF-β1、A_2aR蛋白质含量和TGF-β1 mRNA、A_2aR mRNA的表达均明显增高（P<0.01,P<0.05）。与C组比较,D组血清TGF-β1含量、肺组织Hyp、TGF-β1含量和TGF-β1 mRNA表达明显增高（P<0.01,P<0.05）,提示肺纤维化小鼠肺组织Hyp含量增高,TGF-β1表达上调。③与B组相比,D组血清TGF-β1、肺组织Hyp、TGF-β1含量和TGF-β1 mRNA表达明显增高（P<0.01）。与B组比较,E组A_2aR蛋白质含量和A_2aR mRNA的表达均增高（P<0.01）,而血清TGF-β1、肺组织Hyp和TGF-β1蛋白含量及TGF-β1 mRNA表达较B组明显下降（P<0.01,P<0.05）,提示A_2aR基因敲除小鼠肺组织Hyp含量增高、TGF-β1表达上调;A_2aR激动剂可使A_2aR表达上调、TGF-β1表达下降。结论：A_2aR基因敲除小鼠的肺纤维化明显增加。A_2aR在肺纤维化形成中反应性增高,可通过降低TGF-β1的表达而抑制肺纤维化形成。     

EGFR 对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化中上皮- 间质转分化的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在肺内的表达对博莱霉素(BLM)诱导小鼠肺纤维化中上皮-间质转分化的影响。方法:将40只4～6周龄C57BLB/c雄性小鼠随机分为正常对照组(气管滴入PBS),纤维化组(气管滴入BLM 3 mg/kg),EGFRRNAi组(气管滴入BLM 3 mg/kg+气管滴入siRNA 20μl)和RNAi阴性对照组(气管滴入BLM 3 mg/kg+气管滴入siRNA阴性对照20μl)。实验第10天处死小鼠,收获肺组织,检测羟脯氨酸含量;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测EGFR和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达;肺组织切片行HE染色观察肺组织病理改变,免疫组化染色检测EGFR和α-SMA表达。结果:纤维化组EGFR和α-SMA两者的mRNA和蛋白表达均较正常对照组显著增加;RNAi组肺病理损伤较纤维化组减轻,气道上皮下胶原沉积及肺羟脯氨酸含量减少(P<0.05),肺组织EGFR和α-SMA两者的mRNA和蛋白表达均较纤维化组显著下降(P<0.05)。结论:在博来霉素诱导的肺纤维化中EGFR RNAi抑制EGFR活化,下调α-SMA的表达,减轻了博莱霉素诱导的肺纤维化病理改变。其抑制肺纤维化病理过程可能与其抑制上皮-间质转分化(EMT)有关。     

内毒素致多脏器功能障碍综合征绵羊模型的建立

目的建立简单有效的内毒素（lipopolysaccharide,LPS）致多脏器功能障碍综合征（multiple orgendysfunction syndrome,MODS）绵羊模型,观察其血气、血常规和血清生化等的变化特点。方法绵羊全麻后,3μg/kg和6μg/kg LPS分别于30 min和60 min内静脉泵入实验I组和实验II组。以不同时点测定血气、血常规和血清生化的变化。结果 LPS静注后,实验I组和II组绵羊的死亡率分别为33.3%和50%;两实验组3 h内氧合指数明显降低（P〈0.05或P〈0.01）;不同时点天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TBIL）和肌酐（CRE）明显升高（P〈0.05或P〈0.01）;白细胞（WBC）数目在2 h明显降低,之后明显升高（P〈0.05或P〈0.01）。结论两种剂量的LPS均能成功地建立绵羊MODS模型;血气、血常规和血清生化等均有明显的变化。     

博来霉素诱导G57BL/6与ICR小鼠肺间质纤维化模型的比较

目的探讨C57BL/6与ICR小鼠在博来霉素(BLM)致肺纤维化过程中的种属差异。方法 8周龄雌性C57BL/6小鼠19只,ICR小鼠16只,分别经尾静脉一次性注射BLM150mg/kg,观察每组小鼠体重、生存率及肺组织病理改变。结果①C57BL/6与ICR小鼠最低体重分别发生在静脉注射处置后的7d和5d,最低体重分别为注射前的65.46%和73.21%,两组间无显著的统计学差异。②C57BL/6与ICR小鼠的生存率分别为36.84%和56.25%,两组间存在显著的统计学差异。③C57BL/6小鼠BLM注射后28d,在胸膜下及血管周围形成广泛、稳定的间质纤维化病理改变,而ICR小鼠肺组织未见明显纤维化形成。C57BL/6小鼠肺纤维化病理评分明显高于ICR小鼠(P0.001)。结论 BLM诱导的肺纤维化作用在C57BL/6与ICR小鼠间存在着明显的种属差异。C57BL/6小鼠较ICR小鼠更适于复制博来霉素诱导的肺纤维化动物模型。     

博来霉素致肺纤维化大鼠形态学变化的实验研究

目的　观察博来霉素 (Bleomycin ,BLM)致大鼠肺纤维化模型的形态学及胶原含量的变化 ,探讨其发生机制。方法　健康SD大鼠 ,BLM 5mg (kg·bw)复制大鼠肺纤维化模型 ,于 1、3、7、14、2 8d ,观察肺纤维化形成的病理变化和肺匀浆羟脯氨酸 (HYP)的含量变化。结果　光镜所见 :给予BLM后 1- 7d肺部病变以肺泡炎为主 ,14d以后则进入慢性纤维化阶段。电镜所见 :模型组 3- 7dⅠ型细胞受损 ;Ⅱ型细胞增生 ,其内板层小体明显增多 ,线粒体嵴消失甚至出现空泡样变 ;14 - 2 8dⅡ型细胞数目减少 ,纤维组织增生。模型组肺组织匀浆HYP含量于 7d开始明显增加 ,2 8d达高峰。结论　博来霉素诱发大鼠肺纤维化早期以肺泡炎为主 ,7d开始出现肺纤维化 ,2 8d肺纤维化为主要病变     

腹腔注射百草枯构建小鼠肺纤维化模型

目的:探讨百草枯一次性腹腔注射致小鼠肺纤维化的病理改变及半数致死剂量(LD50),进而制备肺纤维化病理改变稳定的百草枯中毒小鼠肺纤维化模型。方法:60只正常雌性C57BL/6J小鼠被随机分为6组,10只/组,分别为正常对照组及百草枯给药30、40、50、60和80 mg/kg组,所有小鼠于造模后28 d处死,取其左肺用于病理观察(HE染色),并计算LD50及各组肺纤维化Ashcroft评级。结果:至观察期28 d,小鼠一次性腹腔注射百草枯溶液的LD50为55.1923 mg/kg;各染毒组均出现不同程度的肺纤维化改变,且注射剂量越高,肺纤维化病变越严重,但早期死亡率亦越高。结论:一次性腹腔注射百草枯可制备小鼠肺纤维化模型,40和50 mg/kg为较合适的造模剂量。     

吸入乙酰半胱氨酸对博莱霉素导致的大鼠肺纤维化的影响

目的:研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)雾化吸入对于博莱霉素(BLM)导致的大鼠肺纤维化的影响作用。方法:取清洁SD大鼠100只,平均分为10小组,1小组为对照组,其余每3小组为一组,分别为模型组,防治组,治疗组,通过在大鼠气管中注入BLM的方法来制造大鼠肺纤维化模型,防治组在造模前的7天以及造模后的7天内,治疗组在造模后的7天内,分别给予NAC雾化吸入治疗。在成功造模后的第7天、14天、28天,每组处死1小组大鼠,取出病理组织,通过免疫组化方法来观察肺组织纤维化的程度。研究NAC对大鼠肺纤维化的影响。结果:与模型组对比,防治组和治疗组在纤维化程度上明显较轻(P0.05)。结论:吸入NAC对于博莱霉素导致的大鼠肺纤维化有明显的抑制作用,而且防治组疗效明显好于治疗组。既提前7天用药,效果更明显,大鼠获益更多。     

博莱霉素与博莱霉素A5诱导小鼠肺组织损伤的差异

目的探讨静脉注射博莱霉素(BLM)和博莱霉素A5(BLM-A5)对小鼠肺组织损伤的不同作用。方法8周龄雌性C57BL/6小鼠49只,随机分为BLM组19只、BLM-A5组20只和对照组10只,分别经尾静脉一次性注射BLM 150 mg/kg、BLM-A5 150 mg/kg和生理盐水。观察每组小鼠体重、生存率,肺组织病理改变及肺组织羟脯胺酸的含量。结果①BLM组和BLM-A5组小鼠最低体重分别为静脉注射处置前的65.46%和66.87%,均较对照组明显降低(P值均小于0.001)。②BLM组、BLM-A5组和对照组小鼠的生存率分别为:43%、55%和100%。③BLM组小鼠注射处置后28 d,在胸膜下及血管周围形成广泛、稳定的间质纤维化病理改变,而BLM-A5组无明显纤维化形成。BLM组与BLM-A5组、正常组比较,肺纤维化病理评分均明显增高(P值均小于0.001)。④BLM-A5组和对照组注射处置后28 d,右肺羟脯氨酸含量分别为471.6±49.4 nmol和405.0±74.6 nmol,两组间无统计学差异。BLM组为978.4±106.1 nmol,与BLM-A5组、对照组比较分别存在显著性差异(P值均小于0.01)。结论静脉注射BLM与BLM-A5,对小鼠肺组织损伤的作用存在着明显的差异,BLM可导致肺间质形成广泛的纤维化,而BLM-A5仅引起轻微的肺组织损伤,不形成明显的间质纤维化。     

C57BL/6J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立及其病理特征

目的探讨C57BL/6J小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型的可能性及其发病特点。方法使用PLP139-151抗原及其C57BL/6J小鼠自制脑脊髓匀浆（spinal cord homogenate,SCH）免疫C57BL/6J小鼠,使用完全福（氏）免疫佐剂为免疫佐剂,并在尾静脉注射百日咳杆菌,建立EAE模型,与经典的PLP139-151免疫的SJL/J小鼠EAE模型进行对比。结果PLP139-151免疫C57BL/6J小鼠仅有一只小鼠表现为尾部张力明显降低;自制SCH免疫C57BL/6J小鼠可见明显脱髓鞘改变。与PLP139-151免疫SJL/J小鼠组相比发病率较低（P〈0.05）,神经功能评分比较没有明显差异（P〉0.05）,但发病时间长于PLP139-151免疫SJL/J小鼠组（P〈0.05）。结论SCH免疫C57BL/6J小鼠的EAE动物模型,主要表现为急性单相病程,从临床表现和病理学特点来看符合人类MS的病理特点,值得在以后的研究中进一步研究探讨。